209例骨髓增生异常综合征患者5q缺失检测



209例骨髓增生异常综合征患者5q缺失检测

张文娴，刘志何，白鸥*

(吉林大学第一医院 肿瘤中心，吉林 长春130021)

骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndrome,MDS)是一组异质性疾病。一般认为起源于造血干细胞，属于恶性克隆性疾病，主要以骨髓衰竭、血细胞发育不良和高度向急性髓系白血病转化为特征[1]。大约50%的MDS患者骨髓标本存在细胞遗传学异常[2]，其中主要涉及5q-/-5、7q-/-7、20q-、+8[3-6]。2015年第2版NCCN指南将骨髓原始细胞比例<5%、仅红系病态造血、伴单独del(5q31-33)细胞遗传学异常的MDS患者归为5q-综合征，该型MDS患者主要以老年、女性、难治性大细胞贫血、红系病态造血、血小板计数正常或增高、预后良好、低风险向急性髓系白血病转化为特征[7-9]。目前用于检测MDS患者5q缺失的商品化探针有2种，即5q31和5q33探针，但目前尚无相关文献探讨以上两种探针在检测MDS患者5q-方面是否存在统计学差异。本研究选择5q31和5q33两种探针，使用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)同时检测209例MDS患者的骨髓标本，旨在探讨MDS患者5q31和5q33基因片段的缺失率和缺失细胞比例是否存在统计学差异。

1材料与方法

1.1研究对象

患者来自2011年1月至2014年12月在吉林大学第一医院肿瘤中心就诊的209例MDS患者，诊断符合WHO的MDS分型标准(2008年)，其中男134例，女75例，中位年龄50岁(15-83)。对同一MDS患者骨髓标本分别使用5q31和5q33两种探针进行检测，比较两种探针在检测MDS患者5q31和5q33方面是否存在差异。

1.2主要试剂

5q31和5q33特异性DNS探针均购自北京金蓓嘉生物技术有限公司。

1.3标本制备

将采集的骨髓标本吸入离心管后离心7 min(1400转/分)，弃上清液后加入0.045%的KCl混匀，置于37℃的恒温箱中低渗半小时，取出离心管加入1 ml固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)，吹打混匀后离心7 min(1 400转/分)，弃上层浑浊液体，加固定液至8 ml，吹打混匀后置于室温半小时，重复上述操作2次，将标本放于4℃冰箱保存备用。

1.4间期荧光原位杂交(I-FISH)

将备用的骨髓标本滴片后置于56℃的原位杂交仪中烤片半小时，然后放入2×SCC溶液中5 min，70%、85%、100%的乙醇中各2 min，封片后放入75℃变性5 min，42℃杂交16-18 h，杂交后的玻片分别经2×SSC(5 min)、0.1/NP40(3 min)、70%的乙醇(2 min)，冷却后用5 μl的DAPI复染20 min，于荧光显微镜下计数300个间期细胞。

1.5结果判定

正常间期细胞应用5q31和5q33探针杂交均可见2个红色杂交信号(2R)。异常信号中以杂合性缺失最常见，表现为在间期细胞内可见1个红色杂交信号；纯合型缺失罕见，表现为间期细胞内无杂交信号。本研究5q31和5q33缺失阈值均为5.3%。

1.6统计学处理

采用SPSS20.0统计学软件进行分析，缺失细胞比例比较采用χ2检验，P<0.05具有显著性差异。

2结果

本研究应用5q31和5q33两种探针对吉林大学第一医院肿瘤中心的209例MDS患者5q缺失情况进行了检测，结果有9例MDS患者同时检出5q31和5q33缺失，检出率为4.3%(9/209)，检出符合率为100%。所有患者5q31和5q33基因缺失均为杂合型缺失。目前国际FISH检测阈值一般设定为20%，本研究将检测阈值提高至20%以后，有8例MDS患者同时存在5q31和5q33基因缺失，检出率为3.8%，检测符合率仍为100%。

9例5q缺失MDS患者，均为5q31和5q33同时缺失，且均为杂合型缺失，5q31中位缺失细胞数比例为67.7%(18.5%-92.5%)，5q33中位缺失细胞数比例为67.2%(16.5%-88%)，两者在缺失细胞数比例方面无统计学差异(P>0.05)。

3讨论

细胞遗传学检测在MDS患者分型和预测预后方面具有重要意义，主要涉及-5/5q-、-7/7q-、20q-、+8等细胞遗传学异常，其中del(5q)是MDS中最常见的细胞遗传学异常之一，伴单独del(5q)的MDS患者预后一般较好，国外相关文献报道，del(5q)的发生率在10%-15%左右[10-12]，我国曹鹏飞等[13]对100例MDS患者的骨髓标本进行了细胞遗传学检测，总异常检出率为48%，其中-5/5q-检出率最高，为16%。本研究del(5q)的发生率为4.3%，低于国内外相关文献报道，考虑可能存在以下两点原因：①本研究del(5q)的阈值为5.3%，而国内发表的文献del(5q)的阈值一般为3%左右，远低于本研究的阈值，本研究若将阈值降至3%，则del(5q)的比例升至12%，经阈值调整后的del(5q)比例，与国内外文献报道基本一致。②国外文献报道的del(5q)，包括-5、del(5q12-14)、del(5q31-33)、不平衡易位等多种异常形式，而本研究仅检测5q31-33片段的缺失，这也是导致本研究del(5q)发生率较低的一个重要原因。

目前NCCN指南将伴单独del(5q)细胞遗传学异常的MDS患者归为低危组，提示预后较好，但并未进一步探讨5q不同缺失形式与总生存是否存在统计学差异。Lukasz P等[14]分析了104例MDS 5q不同缺失形式与总生存的关系，中位随访42个月，5q-综合征组中位OS未达到，而伴其他5q缺失形式组中位OS为22个月(P≤0.001)；Lukasz P等[14]进一步探讨了其他5q缺失形式组伴或不伴有常见保留区域(Commonly retained regions; CRR)异常与OS的关系，结果伴CRR异常组和不伴有CRR异常组中位OS分别为32个月和14个月(P=0.04)；最后，Lukasz P等[14]探讨了伴单独del(5q)但不涉及CRR区域，且未被归为5q-综合征的患者与5q-综合征患者在OS上是否存在差异的问题，结果提示无统计学差异(P=0.25)。

目前多数文献综述认为[15,16]，del(5q)为中间段缺失，其高频断裂点有两处，即5q12-14(近端断裂点)和5q31-33(远端断裂点)；本研究应用5q31和5q33探针对5q缺失进行了检测，结果5q31和5q33存在共缺失，且均为杂合型缺失，并且两者在缺失细胞比例上基本一致，无统计学差异。综上，在检测5q31-33缺失时，仅需选择5q31或5q33两种探针中的一种即可。

参考文献：

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(收稿日期：2015-09-17)

文章编号：1007-4287(2016)03-0459-02

*通讯作者

基金项目：白求恩前沿交叉学科创新项目(2013105011)