血小板源性生长因子D基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

高静，陈玉东,刘相飞

(胜利油田中心医院，山东东营257034)



血小板源性生长因子D基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

高静，陈玉东,刘相飞

(胜利油田中心医院，山东东营257034)

摘要：目的分析血小板源性生长因子D(PDGF-D)基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法疑诊冠心病患者349例，其中经冠脉动脉造影确诊冠心病237例(观察组)、排除冠心病112 例(对照组)，观察组确诊后行血管内超声检查判断斑块稳定性，两组均采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测PDGF-D rs7950273位点基因型。结果观察组rs7950273位点CC、GG基因型频率分别为26.2%、18.1%，C等位基因频率为54.1%；对照组分别为14.2%、34.8%、39.7%，P均<0.05。观察组易损斑块者CC基因型、C等位基因频率分别为31.5%、57.9%，混合斑块者分别为31.3%、58.4%，均高于稳定斑块者的12.3%、43.1%(P均<0.05)，易损斑块与混合斑块者比较P均>0.05。结论冠状动脉粥样硬化斑块越不稳定，PDGF-D rs7950273位点CC基因型频率和C等位基因频率越高；PDGF-D rs7950273位点C等位基因可能是冠状动脉粥样硬化斑块不稳定的遗传易感基因。

关键词：血小板源性生长因子D；基因多态性；冠心病；动脉粥样硬化斑块

冠状动脉粥样硬化斑块(以下简称斑块)破裂和血栓形成是导致急性心血管事件的病理基础。血小板源性生长因子D(PDGF-D)是血清中的一种强有丝分裂原分子，与其受体结合后促进血管平滑肌细胞(VSMC)增生、迁移，促进新生血管形成[1]。研究表明，冠心病患者血清PDGF-D水平明显升高，是ACS发生的独立预测因素[2]。PDGF-D基因多态性与冠状动脉斑块稳定性是否存在关联，尚未见报道。2013年1月～2014年12月，我们检测了PDGF-D rs7950273位点基因多态性，分析其与冠状动脉斑块稳定性的关系。

1资料与方法

1.1临床资料选择我院同期收治的并久居本地的疑诊冠心病患者349例，其中经冠脉动脉造影(CAG)确诊冠心病237例(观察组)，男158例、女79例，吸烟78例，高血压病128例，糖尿病76例；排除冠心病112 例(对照组)，男75例、女37例，吸烟37例，高血压病61例，糖尿病35例。所有研究对象排除严重肝肾功能不全、肿瘤、吸毒或酗酒、既往血运重建、存在导致预期寿命≤6个月的严重疾病。

1.2斑块稳定性检查方法CAG确诊冠心病后行血管内超声(IVUS)检查，根据血管内超声虚拟组织学成像技术(VH-IVUS)将斑块分为稳定斑块、易损斑块、混合斑块[3]。

1.3PDGF-D基因多态性检测方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法。入院后即刻EDTA抗凝管采集3 mL静脉血于-80 ℃冰箱备用，用血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA。采用Oligo 6.0软件设计并合成PDGF-D rs7950273位点上、下游引物，分别为5′-GCCACA-TTTAGCCATTCT-3′、5′-TGTTGGGATGAAGAAAGG-3′，PCR扩增片段长度是320 bp。取PCR扩增产物，用限制性内切酶BsmAⅠ进行酶切。用3%琼脂糖凝胶电泳对酶切后的PCR扩增产物进行分离，凝胶成像仪器进行拍照，进而得到基因型。CC基因型出现320 bp 1条条带，GG基因型出现192、128 bp 2条条带，杂合子CG基因型出现320、192、128 bp 3条条带)。

1.4 统计学方法采用SPSS17.0统计软件。各基因型频率及等位基因频率分布差异行χ2检验，用 Hardy-Weinberg遗传平衡定律进行等位基因确认。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1斑块稳定性检查结果 观察组中，稳定斑块65例、易损斑块89例、混合斑块83例。

2.2PDGF-D基因多态性及其与冠状动脉斑块稳定性的关系两组PDGF-D rs7950273位点的基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡，无统计学差异。两组PDGF-D基因rs7950273位点基因型及等位基因分布比较，见表1。

表1　两组PDGF-D基因rs7950273位点基因型

注：与对照组比较，*P<0.05；与观察组易损斑块、混合斑块比较，#P<0.05。

3讨论

遗传因素在冠心病的发生、发展过程中居于极其重要的地位,其在冠心病发病中的贡献可达50%[4～7]。目前认为，冠心病是遗传-遗传、遗传-环境因素共同作用的结果。单核苷酸多态性(SNP)主要表现为基因组核苷酸水平上的变异导致DNA序列多态性，在人类遗传学研究中有重要意义[8]。自2002年开始[9]，以SNP为基础的全基因组相关分析成为冠心病遗传易感性研究的主流方法。与以往的候选基因研究及家系研究相比，其研究范围更广，所获结果更可靠，且不同研究所得数据可实现共用，进一步提高了检验效力[10，11]。

RPDGF-D是由平滑肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、巨噬细胞等分泌后，从无活性酶原形式经水解形成同源二聚体PDGF-DD，再与细胞表面的受体结合，导致自身和受体磷酸化反应，参与多种信号转导通路，从而促进成纤维细胞、平滑肌细胞及血管内皮细胞和神经元等细胞增殖与分化，在动脉粥样硬化、动脉损伤后的修复、纤维增生性疾病和恶性肿瘤的发生中起重要作用[12～14]。研究已证实，PDGF-D参与动脉粥样硬化的发生、发展过程，而动脉粥样硬化是冠心病重要的发病机制，提示PDGF-D可能是诱发冠心病的候选基因。Awazu等[14]对PDGF-D rs3809021、rs7950273位点与脑卒中的关联性及功能进行了研究，但未见PDGF-D与冠心病的相关性研究。本研究发现，PDGF-D rs7950273位点的CC基因型和C等位基因频率观察组显著高于对照组，观察组易损斑块和混合斑块者均显著高于稳定斑块者，提示PDGF-D rs7950273位点基因多态性与冠心病的发病和斑块不稳定可能相关，该位点C等位基因可能是冠状动脉斑块不稳定的遗传易感基因。其具体机制可能与 C 等位基因干预了PDGF-D 基因rs7950273蛋白翻译效率，影响PDGF-D的表达有关。

参考文献：

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收稿日期：(2015-08-12)

通信作者：陈玉东

基金项目：山东省医药卫生科技发展计划项目(2011HW075)。

中图分类号：R541.4

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2015)46-0066-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.46.029