益气扶正复方提取物对小鼠免疫功能及荷瘤生存时间的影响

益气扶正复方提取物对小鼠免疫功能及荷瘤生存时间的影响

梁健，梁楚燕，吴亚运，刘华桢，朱冬梅，侯少贞*

(广州中医药大学中药学院，广州 510006)

摘要：目的研究益气扶正复方提取物对小鼠免疫功能及荷瘤生存时间的影响。方法采用小鼠碳廓清法和鸡红细胞所致的血清溶血素抗体生成实验来观察益气扶正复方提取物对免疫的调节作用，通过检测S180腹水瘤小鼠生命延长率实验来测定药物对荷瘤小鼠的影响。结果益气扶正复方提取物低、中、高剂量组的脾脏系数,廓清指数K的值均大于醋酸泼尼松模型组(P<0.05);益气扶正复方提取物低、中、高剂量组及青春宝组的血清溶血素水平的值均大于空白组(P<0.01);益气扶正复方提取物低、中、高剂量组及氟尿嘧啶组的生命延长率均大于空白组(P<0.01)。结论益气扶正复方提取物具有提高机体免疫力和抗肿瘤作用。

关键词：益气扶正；免疫功能；荷瘤小鼠

DOI::10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.06.028

中图分类号：R285.5文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)06-0620-03

基金项目:国家自然科学

作者简介:梁健(1988-)，男，硕士研究生，主要从事中药保健品药物的研发。

收稿日期:(责任编辑：赵玉芝2014-08-24)

*通信作者:侯少贞，电话-(020)39358626，电子信箱-hsz0214@gzuce.edu.cn

Effect of Yiqi righting Compound extract on mice immune system

and the survival time of tumor-bearing mice

LIANG Jian,LIANG Chuyan,WU Yayun,LIU Huazhen,ZHU Dongmei,HOU Shaozhen*

(School of Chinese Pharmaceutical Science,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou,510006,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the effect of Yiqi righting Compound extract on mice immune system and the survival time of tumor-bearing mice.MethodsThe immunomodulatory effect of Yiqi righting Compound extract was assessed by determining the capacity of carbon particle clearance in normal mice and generation of hemolysin antibody induced by chicken red blood cell (CRBC).To determine the effect of drugs on tumor-bearing mice by detecting S180 ascites tumor in mice life prolonging rate.ResultsThe atrophy of mouse spleen and clearance index of Yiqi righting compound extract of low,medium and high dose groups have been increased,compared with the Prednisone Acetate model group (P<0.05).The level of serum hemolysin in Yiqi righting compound extract of low,medium and high dose groups and the Qingchunbao Group are higher than the blank group(P<0.01).The prolongation of life span of Yiqi righting compound extract and the fluorouracil group are longer than the blank group (P<0.01).ConclusionYiqi righting compound extract can enhance the immunity function and has antitumor action.

Keywords:Yiqi righting;immune function;tumor-bearing mouse

近年来，中药抗肿瘤和增强机体免疫功能的研究越来越受到人们的重视，中药复方作为中医临床用药的主要形式，体现了中医整体观和辨证论治的特色[1-2]。益气扶正复方主要由黄芪[3]、绞股蓝、丹参、野金柴这4种中药材按照一定比例配伍组成的复方制剂。本实验旨在探讨以补虚药物作为君药组成的益气扶正复方对小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤的作用。

1实验材料

昆明小鼠18～24 g，雌雄各半，广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号:SCXK(粤)2008-0020(0065103)。益气扶正复方提取物，广州中医药大学方剂教研室提供。氟脲嘧啶，由广州中医药大学肿瘤教研室惠赠。醋酸泼尼松，广东华南药业有限公司，批号：060301。氯化钠注射液，四川科伦药业股份有限公司生产，批号:T060305。青春宝，正大青春宝药业有限公司，批号:1009030。中华墨汁；UNICO722光栅分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司;隔水式电热恒温培养箱,上海跃进医疗器械厂；高速离心机，上海安亭科学仪器厂。

2实验方法

2.1益气扶正提取物对小鼠碳粒廓清指数的影响[4]昆明小鼠，雌雄各半,按体质量随机分成6个组，每组12只:即空白组、醋酸泼尼松组(25 mg/kg)、青春宝组(1 g/kg)、益气扶正复方提取物低剂量组(1.25 g/kg)、中剂量组(2.5 g/kg)、高剂量组(5 g/kg),灌胃给药体积为0.2 mL/10 g。每天灌胃给药1次，除空白组灌胃给予蒸馏水外，其余各组灌胃给予相应药物，连续给药7 d，第8天末次给药30 min后，尾静脉注射50%的墨汁生理盐水0.1 mL/10 g，注射后立即记时，于注射后2 min和12 min，于眼眶静脉丛取血2～3滴，吸20 μL溶于3 mL 0.1%碳酸钠溶液中摇匀，680 nm处测其吸光度A；取血后将小鼠处死，称体质量，取脾、胸腺,电子天平称重;计算脾、胸腺系数[5]和廓清指数K[6]。

2.2益气扶正提取物对小鼠溶血素抗体的影响[7]分组同2.1。除空白组灌胃给予蒸馏水外，其余各组灌胃给予相应药物，连续给药7 d，灌胃给药第1天(除空白组外)各组小鼠腹腔注射5%生理盐水鸡红细胞悬液0.2 mL，免疫7 d后，末次给药后1 h，取血，离心，取0.03 mL稀释至3 mL，取稀释血清1.5 mL，与5%生理盐水鸡红细胞混悬液0.1 mL、10%补体1 mL混合，在37 ℃保温30 min后，0 ℃终止反应。离心取上清液在540 nm处比色。以OD读数作为判断血清溶血素的指标，比较各组差异。

2.3益气扶正提取物对肿瘤的抑制作用[8]在无菌条件下抽取接种传代第8天的S180肉瘤小鼠腹水，用无菌生理盐水按1∶2的比例稀释。取昆明小鼠，腹腔注射稀释的瘤细胞悬液0.2 mL/只，24 h后随机分成5个组:空白组，阳性对照组(5-氟尿嘧啶组)(40 mg/kg)，益气扶正复方提取物低剂量组(1.25 g/kg)、中剂量组(2.5 g/kg)、高剂量组(5 g/kg)，每组12只，标记并称体质量。除空白组灌胃给予等容量的饮用水外，其余各组分别给予相应受试药物，灌胃给药体积为0.2 mL/10 g，1次/d，连续10 d。记录各组小鼠的生存时间，计算每组的平均生存时间。实验重复3次，计算3次结果平均值。 按公式计算：生命延长率[9](%)=(1-T/C)×100%

T、C分别表示给药组小鼠存活日数和模型对照组小鼠存活日数。

3实验结果

3.1益气扶正提取物对小鼠碳粒廓清指数的影响由表1可知,与空白对照组比较，醋酸泼尼松给药组出现胸腺、脾脏萎缩，脏器系数与空白组比较，P<0.01；与醋酸泼尼松免疫抑制剂组比较，青春宝及益气扶正复方提取物低、中、高剂量给药组能够改善小鼠胸腺、脾脏萎缩的程度及提高单核-巨噬细胞吞噬能力,脾脏脏器系数及吞噬指数K均显著高于泼尼松组，差异有统计学意义(P<0.05)；而青春宝给药组脾脏脏器系数显著高于泼尼松组，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1　益气扶正提取物对小鼠单核-巨噬细胞免疫功能的影响 ± s, n=10)

注：与空白组比较，##P<0.01；与醋酸泼尼松组比较，△P<0.05

3.2益气扶正提取物对小鼠溶血素抗体的影响由表2可知,与空白组相比，醋酸泼尼松及各给药组动物鸡血红蛋白的OD值均极显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)；与模型组比较，青春宝及益气扶正复方提取物低、中、高剂量组的OD均有升高，其中益气扶正复方提取物低剂量组作用效果最为显著，差异有统计学意义(P<0.05)。

组 别剂量/(g生药/kg)血清溶血素/OD空白组 —0.01±0.005 醋酸泼尼松组 —1.60±0.211## 青春宝组 1g提取物1.73±0.255## 益气扶正高剂量组51.80±0.202## 益气扶正中剂量组2.51.83±0.107## 益气扶正低剂量组1.251.84±0.114##△

注：与空白组比较,##P<0.01，与醋酸泼尼松组比较，△P<0.05

3.3对肿瘤的抑制作用 由表3可知，与空白组比较，氟尿嘧啶组、益气扶正高、中、低剂量组均能显著延长荷瘤小鼠的生存时间。

表3　益气扶正提取物对荷瘤小鼠生存时间的影响 ± s, n=12)

注:与空白组比较,##P<0.01，#P<0.05

4讨论

肿瘤的发生、发展、转移都与机体的免疫状态有着密切的关系，巨噬细胞吞噬能力、血清溶血素抗体水平分别反映了机体非特异性和体液免疫这两个方面。巨噬细胞[10]碳粒廓清指数K和吞噬指数A的大小可以反映内皮网状系统吞噬功能的强弱，当细菌、异物等抗原性物质进入机体后，可迅速被单核巨噬系统吞噬和清除。血清溶血素是衡量机体特异性体液免疫功能的重要指标[11-12]。本实验研究结果显示，益气扶正复方提取物能显著增强巨噬细胞吞噬功能，具有增强机体非特异性免疫的作用，能够增加血清抗体生成，从而增强体液免疫能力的作用，并能延长荷瘤小鼠的生存时间。因此，可以作为辅助药物用于调节肿瘤病人的体质。

黄芪素有“补药之长”之称，作为益气扶正复方的君药，体现了补药在复方中的主导作用，在复方中发挥主要疗效。近代药理研究[13]表明，黄芪具有增强和调节机体免疫功能和抗肿瘤的作用。

参考文献：

[1]刘晓,温瑞兴.中药抗肿瘤作用的研究进展[J].现代生物医学进展,2011,11(24):4978-4983.

[2]陈向涛,汪惠丽,李俊.中药复方药理研究概况[J].安徽医药,2002,6(1):3-6.

[3]国家药典委员会.《中华人民共和国药典》2010年版一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:283-284.

[4]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,1991:449-450.

[5]李丽芬,韩敬.药物实验与制剂[M].北京:中国科学技术出版社,2001:269.

[6]白黎明,杨秀清,张晓双.仙泰胶囊对小鼠免疫功能的影响[J].吉林中医药,2011,31(10):1026-1027.

[7]中药新药研究指南.中华人民共和国卫生部[M].北京:药政管理局,1993:179.

[8]杨培民,代龙,刘英,等.白花蛇舌草多糖对S180和H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究[J].西北药学杂志,2010,25(1):33-34.

[9]肖敏,季建美,张国铎,等.重楼复方对荷肝癌H22小鼠生长及生存时间的影响[J].中国肿瘤,2011,20(1):55-58.

[10]龚非力.医学免疫学[M].北京:科学出版社,2000:171.

[11]王玉凤,凤良元,鄢顺琴,等.楮实子对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响[J].中华中医药学刊,2008,26(5):1023-1025.

[12]史钧,晏利圣.鸡红细胞免疫吸附性能与白细胞数量关系[J].生物学杂志,2005,22(2):30-31,29.

[13]任美萍,刘明华,李蓉,等.黄芪多糖抗肿瘤活性研究[J].中国新药杂志,2010,19(3):221-224.