内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与阴虚体质型缺血性卒中的关系 ※

内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与阴虚体质型缺血性卒中的关系※

韩媛媛李雪青△

(河北省唐山市中医医院普外科，河北唐山063000)

【关键词】卒中；一氧化氮合酶；基因；多态性，单核苷酸；阴虚；体质学说

doi：10.3969/j.issn.1002-2619.2015.06.018

【中图分类号】R743.302.5；R394.33；R363.26

【文献标识码】A

【文章编号】1002-2619(2015)06-0850-03

通讯作者：△河北联合大学中医学院针灸推拿教研室，河北唐山063000

作者简介：韩媛媛(1971—)，女，副主任护师。研究方向：卒中的中医体质研究。

收稿日期：(2014-02-08)

※项目来源：河北省中医药管理局2013年度中医药类科研计划课题(编号：2013073)

脑血管病是中老年人常见病、多发病、疑难病，以其高发病率、高致残率、高死亡率受到国内外重视，成为中西医治疗研究的热点。缺血性卒中约占全部卒中的70%[1]。我国调查显示，缺血性卒中年发病率为109.7～217/10万，患病率为719～745.6/10万，死亡率116～141.8/10万[2-3]。流行病学研究表明，体质相关基因在缺血性卒中发病中具有重要作用[4]。缺血性卒中除少数人是由于单基因病引起外，大部分是由体质、遗传等因素共同作用导致的复杂性疾病。

体质因素决定着个体生理反应的特异性及其对某种致病因子的易感性和所产生病变类型的倾向性。因此在很大意义上，纠正体质偏颇是临床研究的方向[5]。有统计显示[6]，在168例以60~70岁为主的缺血性卒中患者中，阴虚体质占20.2%。近年来研究表明，内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性可能与缺血性卒中的发生密切相关。但是关于eNOS基因多态性与阴虚体质导致缺血性卒中之间关系，国内外未见报道。阴虚体质、阴虚体质缺血性卒中基因表达的差异研究将有助于从基因水平阐明缺血性卒中的发病机制，并进行有效的早期干预。

1资料与方法

1.1病例选择

1.1.1诊断标准阴虚体质依据王琦《中医体质分类判定标准》[7]确诊。缺血性卒中依据第四届全国脑血管病学术会议修订的“各类脑血管疾病诊断要点”确诊[8]。

1.1.2排除标准排除心源性卒中、动脉炎、脑血管畸形或脑肿瘤等其他病因及不明原因导致的缺血性卒中；年龄<45岁，>70岁；短暂性脑缺血发作、可逆性神经功能缺损；伴有心血管、肝肾、造血系统等严重原发性疾病；资料不全者；非阴虚体质者。

1.2一般资料选取2012-06—2014-06在河北联合大学附属医院神经内科380例及河北省唐山市中医医院神经内科212例住院患者及体检人员592例，依据诊断分为2组，即阴虚体质组290例(符合阴虚体质诊断标准，且无缺血性卒中)及阴虚体质缺血性卒中组302例。2组一般资料比较差异无统计学意义，具有可比性(P>0.05)(见表1)。

表1　2组一般资料比较

1.3研究方法取2组研究对象外周静脉血5 mL，根据血细胞脱氧核糖核酸(DNA)快速提取法提取基因DNA。采用探针荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术扩增eNOS基因中含有G894T多态性的核苷酸序列(参照文献[9]eNOS基因的DNA序列，利用引物设计软件Primer Premier)。采用两步法PCR扩增程序：预变性95 ℃ 10 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 32 s，40个循环。将扩增产物与生物素标记的eNOS基因探针进行杂交，经显色后判断多态性结果。

2结果

2组eNOS基因G894T多态性位点基因型和等位基因分布频率见表2。

表2　2组eNOS基因G894T多态性位点基因型和

由表2可见，阴虚体质缺血性卒中组eNOS基因G894T突变位点基因型和等位基因分布频率与阴虚体质组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

3讨论

缺血性卒中属中医学“中风”范畴，起病急骤，“如矢石之中的，若暴风之疾速”，与“风”之“善行而数变”的特征相似，由多种因素长期作用而致。《灵枢·刺节真邪》载：“虚邪偏客于身半，其入深，内居营卫，荣卫稍衰，则真气去，邪气独留，发为偏枯。”认为邪踞正损是中风发生的根本。《素问·生气通天论》曰：“阳气者，大怒则形气绝，而血菀于上，使人薄厥。”卒中的发生一个量变到质变的过程，我们往往只看到质变，而忽视了最为重要的量变。从长期阴虚体质偏颇到亚健康状态，再到二者长期交互作用出现体内阴阳失衡，并逐渐消耗体内正气，导致正气亏虚，在某种特殊条件下，“阳气暴走于上”而突然发病。体质取决于先天而难以改变，但是可以改变由于体质偏颇导致的对某种疾病发生的易感性，这是卒中的一个研究方向。

目前，对于多个关于基因变异与心脑血管疾病的关系已有报道，但一氧化氮(NO)为心脑血管发病机制的探讨开辟了新的研究领域。研究发现，至少有 3 种一氧化氮合酶(NOS) 同功酶，分别为神经元型 NOS(nNOS)、诱导型 NOS(iNOS) 和eNOS。人eNOS含有1 203个氨基酸。NOS 3位于内皮细胞的细胞膜上，某些生理活性物质与内皮细胞膜上的相应受体结合后，NOS 3催化L-精氨酸生成内皮细胞衍生性NO。近年来研究较热的一个多态性位点是第8号外显子处的G894T(rs1799983)突变，从而使得298位编码蛋白的谷氨酸被天冬氨酸取代。此位点是外显子8上第894位核苷酸存在的G→T变异[10]。Markus等[11]对G894T多态性与缺血性卒中的关系研究发现，GG、GT、TT 3种基因型频率在病例组和对照组G894T等位基因频率分布均无显著性差异。法国Elbaz对460病例对照研究发现[12]，GG基因型在无脑血管病对照组中的分布频率为35.4%，脑梗死患者为46.1%，而腔隙性脑梗死患者中更高，说明G894T多态性与缺血性卒中，尤其是腔隙性脑梗死发病有关。有关eNOS基因G894T多态性与脑血管疾病之间的关系虽然研究颇多，但尚无定论。

本研究结果发现，eNOS基因G894T多态性基因型和等位基因在阴虚体质人群和阴虚体质导致的缺血性卒中患者中分布频率差异无统计学意义(P>0.05)，说明该多态性与阴虚体质导致缺血性脑卒中发病无关。

参考文献

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[2]Meretoja A，Tatlisumak T.Thrombolytic therapy in acute ischemic stroke-basic concepts[J].Curr Vasc Pharmacol，2006，4(1)：31-44.

[3]魏岗之.脑梗死现代治疗的热点与展望[J].中国脑血管病杂志，2004，1(5)：193-195.

[4]Flossmann E，Schulz UG，Rothwell PM.Systematic review of methods and results of studies of the genetic epidemiology of ischemic stroke[J].Stroke，2005，35(1)：212-227.

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[11]Markus HS，Ruigrok Y，Ali N，et al.Endothelialnitric oxide synthase exon 7 polymorphism，ischemic cerebrovascular disease，and carotid atheroma[J].Stroke，1998，29(9)：1908-1911．

[12]Elbaz A，Poirier O，Moulin T，et al．Association between the Glu298Asp polymorphism in the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene and brain infarction[J].Stroke，2000，31(7)：1634-1639．

(本文编辑：曹志娟)

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