恩施土家族胃溃疡患者MIF-173G/C 基因多态性表达

邓银芝，吴明珠，罗和生，贺建华

1.恩施土家族苗族自治州中心医院消化科，湖北 恩施445000;2.武汉大学人民医院检验科;3.武汉大学人民医院消化内科

胃溃疡是一种消化道较为常见的疾病，其临床特征与幽门螺杆菌感染所致胃黏膜损伤有关，多表现为上腹部反复隐痛甚至出现上消化道大出血、幽门梗阻、穿孔等并发症。近年来采取根除H. pylori，抑制胃酸以及胃黏膜保护药物的综合方案对胃溃疡进行治疗，临床效果令人满意，然而少数患者临床疗效较差，患者胃黏膜上皮细胞肠上皮化生和非典型增生最终演变为胃癌［1］，严重影响广大人民群众的身体健康。现已经明确胃溃疡发病与机体免疫紊乱、遗传、感染等因素密切相关。临床上胃溃疡呈现出一定的家族聚集性，提示胃溃疡是一种与遗传因素密切相关的疾病［2-4］。鉴于炎症和遗传因素在胃溃疡发病中的作用，本文探讨恩施地区土家族胃溃疡患者巨噬细胞移动抑制因子(migration inhibitory factor，MIF)表达水平，分析MIF-173G/C 多态性与胃溃疡易感性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取恩施土家族苗族自治州中心医院2013 年2 月-2014 年2 月收治胃溃疡患者145 例，男71 例，女74 例，年龄19 ～85 岁，平均年龄(48.6 ±12.9)岁。选取120 名土家族健康体检者为对照组，男55 例，女65 例，年龄20 ～80 岁，平均年龄(47. 2 ±11.3)岁，所有受试对象为恩施地区土家族，在进入本研究之前告之患者，须取得患者同意。排除标准:所有纳入研究人员无明显免疫风湿性疾病、无高血压、糖尿病、严重肝肾疾病、恶性肿瘤、慢性消耗性疾病、严重感染性疾病，近3 个月无服用免疫抑制剂、激素史及无其他胃镜检查禁忌证。

1.2 方法

1.2.1 MIF 水平测定:抽取胃溃疡患者及正常对照者静脉血3 ml 分离血清，血清贮藏于-20 ℃冰箱以备统一检测，采用上海依科赛生物制品有限公司MIF 试剂盒，用ELASA 方法检测血清MIF 水平，严格按照说明书操作。

1.2.2 MIF-173 位点单核苷酸多态性的检测:在经患者或其家属同意并签署知情同意书后，取患者肘静脉血2 ml，采用DNA 提取试剂盒(上海泛柯生化试剂公司)提取DNA，并于-20 ℃保存。按照文献设计MIF-173G/C 引物及基因型分析［5］PCR 上游引物:5＇-ACTAAGAAAGACCCGAGG-3＇;下游引物:5＇-TGGCAGAAGGACCAGGAGAC-3＇，PCR 产物为330 bp。扩增条件为变性95 ℃5 min 变性95 ℃30 s 退火54 ℃40 s 延伸72 ℃45 s，共34 个循环。利用SNaPshot SNP 分型技术对MIF-173G/C 位点进行分型。

1.3 统计学处理 基因型与等位基因型频率采用频率计数法计算，研究对象基因型与Hardy-Weinberg 平衡检验、组间基因型与等位基因频率的比较采用χ2检验。计量资料用±s 表示，两组间比较采用t 检验;胃溃疡患者不同基因型患者MIF 血清浓度比较采用方差分析，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MIF-173G/C 多态性的分布与比较 MIF-173G/C 的3 种基因型频率分别为GG:0. 428、GC:0.400、CC:0.172;对照组3 种基因型频率分别为GG:0.617、GC:0.317、CC:0.067。进行Hardy-Weinberg 平衡定律的吻合度检验，差异有统计学意义(χ2=12.79，P=0.016，见表1)。

表1 MIF-173G/C 多态性频率在胃溃疡组与对照组的分布比较Tab 1 The distribution of MIF-173G/C genotypes in gastric ulcer group and control group

2.2 两组血清中MIF 的比较 胃溃疡患者血清中MIF 浓度(823.25 ±61.45)pg/ml 明显高于正常对照组(345.49 ±56. 96)pg/ml，差异有统计学意义(t =6.07，P=0.001)。

2.3 不同173G/C 基因表型胃溃疡患者血清中MIF含量的比较 GG、GC、CC 三种基因型患者MIF 表达量比较，差异有统计学意义(F =28.60，P =0.041)，3种基因型血清浓度最大者为GC(993. 27 ± 54. 49)pg/ml，最小者为GG(537.95 ±71.66)pg/ml。

3 讨论

研究表明炎症介质相关基因及表达的蛋白在胃溃疡的发生、发展过程中起到至关重要的作用［5-6］。MIF是一个关键的前炎症因子，含有115 个氨基酸残基，其相对分子量约为125 kDa，其编码基因位于22 号染色体长臂(22q11.2)的保守区［7］。正常情况下机体垂体及单核巨细胞也会分泌少量的MIF［8-9］。MIF 具有众多生物学效应，其主要效应有免疫调节功能、促进血管新生、酶学活性［10］。近年来，随着对MIF 研究的深入，国内外学者发现MIF 在细胞增殖及分化调节方面发挥重要作用，还参与细胞恶性肿瘤发生［11-12］。

张双霞等［13］在研究慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF 蛋白表达时发现慢性胃炎和胃溃疡组织中MIF 阳性率明显高于正常组织，这一结果提示MIF 在胃溃疡发生及发展中发挥着重要作用。基于MIF 分子主要生物效应可能在胃溃疡发生、发展中起潜在作用，本研究旨在探讨恩施地区土家族胃溃疡患者MIF-173G/C多态性与胃溃疡发病关联性MIF 基因173G/C 基因型和等位基因频率在两组间分布差异有统计学意义，这一结果提示MIF-173G/C 可能是恩施地区土家族胃溃疡易感基因，目前为止，尚不明确MIF-173G/C 多态性影响胃溃疡等疾病发病分子机制。本研究发现，胃溃疡组MIF 水平明显高于对照组。同时也发现MIF-173G/C 基因型的胃溃疡患者血清中MIF 含量差异有统计学意义，在胃溃疡组3 种基因型血清浓度最大者为GC，最小者为GG，而胃溃疡组GC 基因频率高于对照组，而胃溃疡GG 基因频率小于对照组。上述结果提示血清MIF 浓度增高在胃溃疡发生、发展中发挥着重要作用，且MIF-173G/C 的基因多态性直接影响着MIF 分泌，该发现与既往研究MIF-173G/C 的基因多态性影响其表达水平类似［14-15］。基因多态性与疾病的相关性近来成为基础医学领域的一个研究热点，MIF 基因存在多个位点基因多态性，其中MIF 的cDNA 序列中第173 位碱基单核苷酸多态性研究较为广泛。国外学者发现MIF-173G/C 多态性与其他系统性红斑狼疮、炎性肠疾病等免疫性疾病有关［16-17］。

本研究提示MIF 基因变异可能参与了胃溃疡的发生、发展，其对胃溃疡的早期筛查、基因型诊断、早期治疗可能有一定的辅助作用，但其确切分子机制尚需进一步研究。本研究还存在一些不足，流行病学研究发现发病年龄、职业与环境因素是影响胃溃疡发病的相关因素，本研究的研究对象在发病年龄、环境因素与职业等方面资料不全，而且本研究的样本量较小，需进一步扩大样本量，完善相关背景资料以进一步深入探讨MIF 基因的遗传多态性在胃溃疡发生、发展过程中可能的生物学机制。

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