PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与非酒精性脂肪性肝病易感性的Meta 分析

张少君，董小林

湖北医药学院附属人民医院健康体检中心，湖北 十堰442000

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是常见的肝脏疾病之一，部分可发展为肝癌［1］。NAFLD 是代谢综合征(metabolic syndrome，MS)的表现特征之一，往往与糖尿病、血脂异常、高胰岛素血症等MS 症状并存。虽然NAFLD 的病因尚不明确，环境、遗传和生活方式等多种因素在其发生、发展过程中发挥一定作用［2］。

过氧化物酶增殖生物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ，PPAR-γ)是核受体超家族成员之一，能调节体内多个脂肪细胞特异性基因的转录，参与调控脂肪细胞分化、脂类代谢等过程［3-4］。PPAR-γ 基因多态性在肥胖、胰岛素抵抗、2 型糖尿病的发生过程中起重要作用［5］。本文对8 个病例-对照研究［6-13］进行Meta 分析，系统评价PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与NAFLD 易感性的相关性。

1 材料与方法

1.1 检索方法 计算机检索PubMed、Web of Science、万方数据库、中国知网(CNKI)、维普数据库，检索时间均为建库至2014 年8 月30 日，无语种限制。研究对象为人类。英文以“peroxisome proliferator activated receptor-γ 或PPAR-γ 或peroxisome proliferator activated receptor gamma 或PPAR-gamma 和genetic polymorphism 或polymorphisms 或variant 和non-alcoholic fatty liver disease 或NAFLD”为搜索关键词。中文以“过氧化物酶增殖生物激活受体、PPAR-γ、基因多态性、非酒精性脂肪性肝病、NAFLD”为搜索关键词。

1.2 纳入和排除标准

1.2.1 纳入标准:(1)NAFLD 诊断明确:超声和/或CT 提示肝脏弥漫性脂肪改变;当影像学检查诊断不确定时进行肝活检。实验组和对照组均排除以饮酒(男性每日摄入＞30 g，女性每日摄入＞20 g)为病因的研究，排除病毒性、自身免疫性和药物性或遗传所致肝脏疾病，其他合并严重疾病如严重的心脏、肺部、脑或肾脏疾病也被排除;(2)研究是关于Pro12Ala 多态性与NAFLD 风险之间的关系;(3)为病例-对照研究;(4)文献中数据完整，或能直接或间接提供统计指标OR值及95%CI。

1.2.2 排除标准:(1)非病例-对照研究、病例报道、综述等文献;(2)重复发表或信息不全的文献;(3)以酒精性脂肪肝或其他肝病作为对照组的研究。

1.3 资料提取 由2 位研究者独立进行文献资料提取，内容包括:作者、发表年份、国家、种族、年龄、性别、诊断方法、病例组和对照组总数及各基因型分布情况、及对照组H-W 平衡检验值(P 值)。在资料提取过程中，如有争议，通过讨论协商解决。

1.4 统计学分析 采用RevMan 5.2 对纳入研究进行异质性检验(采用Q 检验和I2统计量)，当各研究间无异质性时(P ＞0.1 或I2＜50%)，采用固定效应模型进行合并分析，如存在统计学异质性时(P ＜0.1 或I2＞50%)，则采用随机效应模型进行分析。合并效应量选用比值比(OR)及其95%CI。分别计算显性遗传模型(Pro/Ala + Ala/Ala vs Pro/Pro)、隐性遗传模型(Ala/Ala vs Pro/Ala + Pro/Pro)、共显性遗传模型(Pro/Ala vs Pro/Pro 及Ala/Ala vs Pro/Pro)的OR 值，然后基于种族进行分层分析。敏感性分析为依次排除单个文献后重新进行Meta 分析，估计研究结果的稳定性。应用Stata 12.0 软件进行Begg、Egger 分析对发表偏移进行分析(P ＜0.05 认为存在发表偏倚)。利用χ2检验对每项研究中对照组的基因型分布进行H-W遗传平衡检验。

2 结果

2.1 文献检索结果 根据检索策略，初筛出20 篇相关文献，根据纳入及排除标准，排除12 篇文献，最终共有8 篇［6-13］文献纳入本研究，包含1 697 例NAFLD 患者和2 427 名对照者。其中有5 篇［6-7，10，12-13］研究涉及亚洲人群，3 篇［8-9，11］涉及白种人群。除2 篇研究［6，10］外，其余研究均符合H-W 平衡。各个纳入研究的基本特征如表1 所示。

2.2 Meta 分析结果 研究结果显示PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与NAFLD 风险的相关性无统计学意义［显性模型(OR =0. 93，95%CI:0. 63 ～1. 38，P =0.72);Pro/Ala vs Pro/Pro (OR=0.91，95%CI:0.64 ～1.30，P=0.61);Ala/Ala vs Pro/Pro (OR =1.52，95%CI:0.39 ～5.93，P =0.54);隐性模型(OR =11.54，95%CI:0.45 ～5.22，P =0.49)］(见图1)。在对亚洲人和白种人种族分析也得出相同结果(见表2、图2)。2.3 敏感性分析 首先，剔除不符合H-W 平衡的文献［6，10］后，各遗传模型合并效应量无明显改变(见表2);依次单独剔除其他1 篇文献后，各遗传模型合并效应量仍无明显改变。

2.4 异质性检验 在4 种遗传模型中，总体人群比较发现研究间都存在异质性［显性模型:I2=76%，P =0.0001;Pro/Ala vs Pro/Pro:I2= 70%，P = 0. 001;Ala/Ala vs Pro/Pro:I2=72%，P =0.006;隐性模型:I2=66%，P=0.020］。基于种族进行亚组分析时，在白种人群中研究间仍存在异质性，而在亚洲人群中，在纯合子比较模型和隐性模型中，研究间异质性消失［Ala/Ala vs Pro/Pro:I2=0，P =0. 340;隐性模型:I2=0，P=0.370］(见表2)。

2.5 发表偏倚分析 Begg 漏斗图结果显示未见发表偏倚(见图3)。Egger 回归法量化检测也未见发表偏倚，Egger 回归法结果显示:显性模型:P=0.972，Pro/Ala vs Pro/Pro:P =0. 822;Ala/Ala vs Pro/Pro:P =0.716;隐性模型:P=0.688。

3 讨论

近年来，基因多态性与NAFLD 易感性之间的关系已引起广泛关注，如PNPLA3、TNF-α、APOE、adiponectin 和PPAR-γ 等。然而除了PNPLA3 和TNF-α 基因多态性与NAFLD 风险性已被大量证实［14-16］外，其余基因多态性是否与NAFLD 发病风险相关仍存在争议。研究表明PPAR-γ 可通过调节脂肪细胞因子的表达来改善胰岛素敏感性，减少TNF-α、瘦素和抵抗素生成，促进脂联素的表达［17］。PPAR-γ 多态性影响脂肪细胞因子的表达。

目前已有多篇Meta 分析系统评价了PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与多种疾病风险的关系，如肿瘤［18］、炎症性肠病［19］等。本研究对PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与NAFLD 风险性的关系进行系统评价，共包含8 个病例-对照研究(4 124 例)。研究结果提示Pro12Ala 多态性与NAFLD 的风险性无关，为避免不同种族引起的异质性，我们将纳入的研究分成亚洲人和白种人2 个亚组进行分析，然而在不同人群中也未发现PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与NAFLD风险性有关。产生上述结果可能原因为:(1)Pro12Ala多态性与NAFLD 的风险性之间可能确实关系不大;(2)可能与其他基因存在交互关系;(3)基因-环境等因素的影响;(4)人群的种族背景、年龄、性别及行为方式不同。

表1 纳入病例-对照研究的基本特征Tab 1 Characteristics of studies included in the Meta-analysis

表2 各遗传模型Meta 分析主要结果Tab 2 Summary of ORs for the Pro12Ala polymorphism of PPAR-γ gene and the susceptibility of NAFLD

图1 PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与NAFLD 风险相关性的Meta 分析(显性模型)Fig 1 Meta-analysis of the association between Pro12Ala polymorphism of PPAR-γ gene and susceptibility of NAFLD (dominant model)

图2 基于人群亚组PPAR-γ 基因Pro12Ala 多态性与NAFLD 风险相关性的Meta 分析(显性模型)Fig 2 Meta-analysis of the association between Pro12Ala polymorphism of PPAR-γ gene and susceptibility of NAFLD in different subgroups (dominant model)

图3 Begg'漏斗图分析(显性模型)Fig 3 Begg's funnel plot for publication bias (dominant model)

在总人群中，4 种遗传模型经异质性检验均存在异质性，我们通过敏感性分析和亚组分析寻找异质性，结果发现，在白种人群中研究间仍存在异质性，而在亚洲人群中，在纯合子比较模型和隐性模型中，研究间异质性消失，提示针对不同人群的研究可能会导致异质性。另外，H-W 遗传平衡是遗传学研究中的基本定律，我们对纳入的文献进行H-W 平衡检验，结果发现有2 项研究不符合H-W 平衡，而剔除该研究后，结果无明显改变。我们采用Begg 漏斗图和Egger 检验分别定性和定量评估发表偏倚，发现4 个遗传模型均无显著的发表偏倚，以上结果提示本研究结论较可靠。

与其他Meta 分析一样，本研究也存在一定的局限性:(1)纳入文献较少，且纳入的文献为英文和中文，可能还有其他语种的文献未纳入;(2)纳入的文献不包括未公开发表的文献，可能存在选择偏倚;(3)本研究未进行年龄、性别、饮食等因素的分层分析;(4)诊断NAFLD 方法的差异可能会对结果产生影响。

总之，本Meta 分析提示在亚洲人群和白种人群中Pro12Ala 多态性与NAFLD 的风险性均无相关性。由于研究涉及地域广且文献较少，仍需更多大样本研究结果证实。

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