P53在宫颈上皮内瘤样病变中的检测价值

P53在宫颈上皮内瘤样病变中的检测价值

田晓蕾钟颖

(深圳市西丽人民医院妇产科，广东深圳518000)

摘要〔〕目的探讨基因表达产物P53蛋白在正常宫颈上皮、各级宫颈CIN组织中的表达水平与CIN病理学及分级的关系。方法采用S-P免疫组化法对45例经病理诊断为宫颈上皮内瘤样病变患者进行检查，检测各级宫颈组织中P53表达水平，以正常宫颈上皮15例作为对照。结果P53蛋白阳性表达率在正常宫颈鳞状上皮、上皮内瘤样病变分别为0.00%、40.00%，两两比较差异显著(P<0.01)；在各分级中，P53 蛋白阳性表达率分别为30.00%，38.89%，47.06%。结论说明P53参与了宫颈上皮内瘤样病变的发生，在各组宫颈上皮组织中的表达呈负相关。

关键词〔〕P53；宫颈上皮内瘤样病变；免疫组织化学

中图分类号〔〕R73〔文献标识码〕A〔

基金项目：深圳市南山区科技计划项目(2013047)

通讯作者：钟颖(1973-)，女，硕士，主任医师，主要从事围产医学研究。

第一作者：田晓蕾(1982-)，女，硕士，主治医师，主要从事妇产科学的研究。

宫颈上皮内瘤样病变是一种宫颈癌前病变，它的外表可以是正常的，但细胞学或组织学检查有了异常增殖的改变〔1〕。在与宫颈癌有关的众多基因中，P53蛋白所发挥的生物学作用也日益受到人们重视〔2〕。大部分突变发生在第5～8外显子区域内。p53基因发生突变的肿瘤细胞存在于外周血中。采用灵敏的分子检测方法可特异性地血液样本中检测到微量的p53基因突变〔3〕。在结直肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌和头颈部癌患者的血液DNA中都已检测到了p53基因突变〔4〕。相关研究表明宫颈上皮内瘤变中P53表达增加，共同导致细胞凋亡减少，可能是宫颈上皮内瘤变向宫颈癌发生、发展的作用机制之一〔5〕。本实验通过检测P53在宫颈宫颈上皮内瘤样病变中的表达情况，探讨宫颈癌早期诊断依据及基因治疗方案。

1材料与方法

1.1对象纳入宫颈上皮内瘤样病变组织标本45例设为实验组，年龄40～62岁，均经病理证实的活检或手术切除得到证实，其中CINⅠ级10例，CINⅡ级18例，CINⅢ级17例。另外选取正常宫颈组织标本15例作为对照组，以上诊断均经病理证实。两组患者基线资料具有可比性，并对实验知情同意。诊断标准：根据其非典型增生的程度，宫颈上皮内瘤样病变分为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ三个不同的级别。CINⅠ级：相当于极轻度和轻度不典型增生；CINⅡ级：相当于中度不典型增生；CINⅢ级：相当于重度不典型增生和子宫颈原位癌。

1.2主要试剂鼠抗人P53单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒均购于(上海)化学试剂有限公司。

1.3实验方法免疫组化检测：标本用中性甲醛固定，石蜡切片脱蜡至水，5%～10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭，室温孵育10min。滴加一抗工作液，37℃ 孵育1～2h或4℃ 过夜，连续切片5份，厚3μm，1张常规苏木精-伊红染色，确定病理诊断及分组。用已有阳性切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定染色强度评分标准〔6〕：以细胞质和(或)核内出现棕黄色颗粒为阳性表达，阳性细胞数≤5%者0分，6%～25%者1分，26%～50%者2分，≥50%者3分。细胞染色黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。采用半定量积分法判定结果：染色强度评分与阳性细胞评分相加：≤1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～6分为阳性()，≥6分为强阳性()。

1.4统计学方法应用SPSS13.0软件进行χ2检验。

2结果

2.1P53表达在组织细胞中分布P53蛋白阳性表达于细胞核，以细胞核出现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，从正常宫颈-宫颈癌P53表达逐渐增加，颜色逐渐加重。见图1。

2.2P53蛋白在正常宫颈上皮、各级CIN中的表达P53在正常宫颈上皮(0%)、各级CIN阳性表达率〔CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级阳性率分别为3例(30.0%)、7例(38.89%)、8例(47.06%)〕随病变程度的加重依次升高，与对照组比较差异显著(χ2=13.25，P<0.01)，但P53阳性表达率在各级CIN中两两比较无显著性差异(P>0.05)。

2.3P53在正常宫颈组织、CIN中的表达情况对照组P53 0例阳性，观察组-9例，+7例，2例，27例。在对照组和实验组间差异显著(P<0.05)。

图1　P53表达在组织细胞中的阳性分布(S-P,×400)

3讨论

p53基因可参与细胞周期的调控，在维持细胞增长、抑制肿瘤增殖过程中起重要作用，是重要的细胞生长负调节因子，参与细胞周期调控，当细胞DNA损害时，P53蛋白激活P21基因表达，并与细胞周期蛋白结合形成复合体，抑制依赖细胞周期蛋白的激酶活性，阻止CDKs对Rb蛋白的磷酸化，使细胞修复损伤、恢复正常，常被称为“基因卫士”〔7〕。

相关研究显示，P53的表达强度与宫颈慢性炎症、宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞状细胞癌有关，两者在组织中表达的阳性单位对于区分宫颈炎性病变和上皮内瘤变，区分低级别和高级别上皮内瘤变，包括CINI和CINⅡ的区分，以及对于治疗方案的拟定均具有重要价值〔8〕。本实验结果提示，P53蛋白阳性表达与癌组织学类型、浸润深度、分化程度有关。

p53基因可分为野生型和突变型，前者为抑癌基因，后者为致癌基因，p53阳性率一般会随着临床期别增高和细胞分化程度变低而增高。Paquette等〔9〕研究发现P53基因功能的失活在宫颈癌发生中的作用异常显著，并认为宫颈癌约97%存在人乳头瘤病毒(HPV)感染。冯丽莉等〔10〕认为P53的过表达与宫颈癌的发生发展有关，其可作为宫颈癌早期诊断的有效指标；本实验结果与上述文献结果一致。

p53属于抑癌基因，正常情况下，p53基因外显子的核酸序列十分稳定，一旦发生改变即属于异常情况。其在宫颈病变发生、发展中的相关性研究已有文献报道，因此对p53基因的检测有利于癌症的早发现、早诊断、早治疗。

4参考文献

1SoyoolaE0，PattiloRA.PTEN/MMACImutationscorrelateinverselywithanalteredp53tumorsuppressorgeneingynecologictumors〔J〕.AmJObstetGynecol，2003；188(4)：S33-6.

2YoonaCH，LeeDS，LimbDS，et al.PKR，ap53targetgene，playsacrucialroleinthetumor-suppressorfunctionofp53〔J〕.ProcNatlAcadSciUSA，2009；106(19)：7852-7.

3林晓亮，姜云波，赵倩，等.携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达〔J〕.细胞与分子免疫学杂志，2013;29(10)：1082-6.

4JiangY，ChenH，JiaH，et al.AdenovirusAd-p53AIP1-mediatedgenetherapyanditsregulationofp53-MDM2interactions〔J〕.ExpTherMed，2010;1(2)：363-8.

5罗远材，郭路.P53对蛋白激酶R和宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响〔J〕.天津医药，2014;42(12)：1168-7.

6楼朝霞，梅丽娜.宫颈癌组织中突变型p53基因的表达及其临床意义〔J〕.海南医学，2013;24(9)：1272-4.

7Ruttkay-NedeckyB，Jimenez-JimenezAM，NejdlL，et al.Relevanceofinfectionwithhumanpapillomavirus：theroleofthep53tumorsuppressorproteinandE6/E7zincfingerproteins(Review)〔J〕.IntJOncol，2013;43(6)：1754-62.

8罗琼，邵少慰，刘曙光，等.宫颈病变Ki67和P53表达的定量分析及其临床意义〔J〕.中国体视学与图像分析，2013;18(3)：282-8.

9PaquetteRL，LeeYY，WilczynskiSP，et al.Mutationsofp53andhumanpapillomavirusinfectionincervicalcarcinoma〔J〕.Cancer，1993;72(4)：1272-80.

10冯丽莉，杨毓琴.p53蛋白在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达〔J〕.中国妇幼健康研究，2006;17(4)：260-2.

〔2015-03-21修回〕

(编辑袁左鸣)