两种梨水提取物的体外抑菌试验研究

项铁男，敬思群

（1.吉林工程职业学院，吉林四平136001；2.新疆大学生命科学与技术学院，新疆乌鲁木齐830046）

两种梨水提取物的体外抑菌试验研究

项铁男1，敬思群2

（1.吉林工程职业学院，吉林四平136001；2.新疆大学生命科学与技术学院，新疆乌鲁木齐830046）

采用新疆库尔勒梨，绿梨水提取物对埃希氏大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌进行抑菌实验。结果表明：库尔勒梨水提取浓缩物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌没有抑菌作用。绿梨水提取物均对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌没有抑菌作用，均没有出现抑菌圈，但对枯草芽孢杆菌有抑菌作用，对枯草芽孢杆菌最小抑菌浓度为50%（原液密度为1.23 g/mL），最小杀菌浓度为1/1的浓度（原液）。

新疆库尔勒梨；新疆绿梨；抑菌实验

新疆库尔勒梨在汉唐时期就通过“丝绸之路”传入印度，被誉为“西域圣果”。库尔勒香梨营养价值高，含糖、氨基酸、维生素、各种碳水化合物达14%，水汁为86%。其中含糖量10%，酸0.03%，灰分0.12%，每100克香梨含VC约4.3mg，含有葡萄糖、果酸及多种微量元素，可食部分达83.6%。库尔勒香梨不仅可以生食，而且可以做梨酒、梨膏等相关食品，并有润肺、凉心、消痰、消炎、止咳、解疮毒酒毒等医疗作用，维吾尔医、蒙医常把它作为食疗佳品。

新疆绿梨在新疆来源丰富，并且民间用绿梨治疗感冒，咳嗽。近几年的研究证实，各种天然物质如大蒜、芦荟、茶叶等的提取物都具有不同程度的抑菌作用，与传统化学抑制剂相比，这类天然抑菌物质来源广泛，加工低廉，且可作为辅助成分改变产品的风味。本研究主要对两种梨体外抑菌试验进行探索，提供对埃希氏大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌进行抑菌试验。确定最佳的体外抑菌浓度。

1 材料

1.1 材料与试剂

库尔勒梨、绿梨：市场购买。

埃希氏大肠杆菌（Escherichia col）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）：新疆大学微生物实验室提供。

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；革兰氏染色液；5% NaOH溶液、5%HC1溶液。

1.2 主要仪器

LHP-160L恒温恒湿培养箱：常州恒睿仪器设备制造有限公司；DSX-280KB24手提式压力蒸汽灭菌器：上海申安医疗器械厂；YJ-HS-2型双人水平超净工作台：无锡一净净化设备厂；BXP-102普通型双目生物显微镜：上海茶明光学仪器有限公司；NB-XZ10L旋转蒸发仪：郑州南北仪器设备有限公司；HHWY2112大型双层恒温摇床：上海华邻实业有限公司。

2 方法

2.1 试验用品的制备

2.1.1 提取物的制备[2]

取500 g新疆库尔勒梨放入盛有适量稀碱液中浸泡30min除去果皮中蜡质。切碎，加100mL水打浆，加热至煮沸1 h～2 h，残液旋转蒸发至60m L，再进行杀菌。用无菌蒸馏水稀释为1∶2、1∶4、1∶6、1∶8等不同浓度备用。取800 g新疆绿梨用水洗净切碎，加100mL水打浆，加热熬2 h。用5层纱布过滤，滤液用4 000 r/min离心机离心。取上清液用旋转蒸发仪浓缩至150mL，灭菌后用无菌蒸馏水稀释为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4 4种不同浓度备用。

2.1.2 细菌的复壮及培养

枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌于牛肉蛋白胨液体培养基，37℃恒温摇床中复壮24 h。将纯化后的枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，37℃培养24 h，革兰氏染色法初步鉴定后，3种菌分别接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，每24小时更换一次。

2.1.3 纸片法[1]

取4个不同浓度的梨汁浓缩液15mL，放入Φ6mm灭菌滤纸片（10片为1组）40片，浸泡2 h。待其自然干燥后，用紫外线照射灭菌10min～15min。取灭菌后的琼脂培养基15mL倾入已灭菌的平皿内，冷却凝固，每个平皿划分为4区，用移液管吸取0.1mL菌液于平皿内，用玻棒涂匀，然后贴上含有梨汁浓缩液的纸片，用生理盐水做对照，置37℃培养箱中培养24 h，用游标卡尺测定抑菌圈直径，取平均值。

2.2 最小抑菌浓度的测定[2]（MIC）

采用二倍稀释法，用灭菌蒸馏水将梨浓缩液稀释为1∶1、1∶2、1∶4、1∶8 4个浓度。取试管6支，每管加相应的液体培养基3mL，然后分别加入九个不同浓度的梨浓缩液各0.5mL，菌液0.5mL，混匀。各管的梨浓缩液终浓度分别为1∶1、1∶2、1∶4、1∶8，含菌量为3.9×107CFU/mL；同时每组设不含梨浓缩液只含等量菌液的阳性对照管，以及不含梨浓缩物也不含菌的阴性对照管各一支。放入37℃恒温培养箱中培养36 h。取出后根据试管内梨浓缩液菌液的混浊度判断菌体生长情况。对于药液混浊肉眼无法判断的试管，做进一步平板涂布，37℃培养24 h，以无菌生长的最小梨浓缩液浓度为梨浓缩物对该菌的最小抑菌浓度。

2.3 最小杀菌浓度的测定（MBC）

将MIC浓度及高于MIC浓度的各管在无梨浓缩液平板上涂布，37℃培养48 h，以菌落少于10个的相应梨浓缩液浓度为梨浓缩物对该菌种的最低杀菌浓度。

2.4 判定标准

纸片法判定标准：抑菌直径≥20mm为极敏，在15mm～19mm之间为高敏，在10mm～14mm之间的为中敏，直径在10m L以下的为低敏。无抑菌圈为钝敏试管。二倍稀释法判定标准：培养液完全清亮，表示无细菌生长，记为（-）；培养液混浊，表示有细菌生长，记为（+）。

3 结果

3.1 库尔勒梨水提取浓缩物的抑菌实验结果[3-5]

库尔勒水提取浓缩物对枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌没有抑菌作用，均没有抑菌圈出现。具体情况见表1。

表1 库尔勒梨浓缩液对试验菌的抑菌作用Table 1 Inhibitory effect Korla pear concentrate on test bacteria

3.2 绿梨水提取物的抑菌实验结果

绿梨水提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均没有出现抑菌圈，无抑菌作用。但是对枯草芽孢杆菌有抑菌作用，出现大小不同的抑菌圈，抑菌结果为中敏。具体情况见表2。

表2 绿梨浓缩液对试验菌的抑菌作用Table2 Inhibitory effect of green pear concentrate on the test bacteria

3.3 绿梨水提取物对枯草芽孢杆菌最小抑菌浓度（MIC）

采用二倍稀释法，用灭菌蒸馏水将梨浓缩液稀释为1∶1、1∶2、1∶4、1∶8 4个浓度，含菌量为3.9× 107CFU/m L。将制备好的试管放入37℃恒温培养箱中培养36 h。从表3可见，绿梨水提取物浓缩液对枯草芽孢杆菌最小抑菌浓度为50%（原液密度约为1.23 g/m L）。

3.4 绿梨水提取物对枯草芽孢杆菌最小杀菌浓度（MBC）

将MIC浓度及高于MIC浓度的各管在无梨浓缩液平板上涂布，37℃培养48 h，以菌落少于5个的相应梨浓缩液浓度为梨浓缩物对该菌种的最低杀菌浓度。因此，选择1/1和1/2浓度的试管进行涂布培养48 h，培养温度为37℃。结果浓度1/1的培养皿上长菌落数为8个、7个、9个。绿梨水提取物对枯草芽孢杆菌最小杀菌浓度为1/1的浓度。

表3 绿梨浓缩液对枯草芽孢杆菌最小抑菌浓度Table3 Green pear concentrate on the minimum inhibitory concentration of Bacillus subtilis

4 结论

库尔勒水提取浓缩物对枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌没有抑菌作用。绿梨水提取物均对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌没有抑菌作用，均没有出现抑菌圈。但是对枯草芽孢杆菌有抑菌作用，对枯草芽孢杆菌最小抑菌浓度为50%（原液密度为1.23 g/mL），菌最小杀菌浓度为1/1的浓度（原液）。

[1] 刘慧.现代食品微生物学实验技术[M].北京:中国轻工业出版社, 2006:121

[2] 苗子健.腰果梨抑菌活性物质提取工艺优化[J].食品科学,2010, 31(24):1-7

[3] 张瑞其,马廉兰.苦瓜叶的抑菌试验[J].赣南医学院学报,2003,23 (3):272-273

[4]陶大勇,应璐.塔里木盆地36种植物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验[J].中兽医医药杂志,2005(5):23-25

[5]李凤兰,李智呈.需氧芽孢杆菌对大肠杆菌体外抑菌试验[J].上海畜牧兽医通讯,2009(1):43-44

[6] 喻大昭,柯志国.植物真菌的抑菌活性研究[J].湖北农业科学, 2001(5):49-51

Study On Two Kinds of Pear Water Extract in Vitro Bacteriostasis Experiment

XIANG Tie-nan1，JING Si-qun2
（1.Jilin Engineering Vocational College，Siping 136001，Jilin，China；2.XinJiang University College of Life Science and Technology，Urumqi830046，Xinjiang，China）

In this paper，Xinjiang Korla Pear and Green pear extract on Escherichia coli，Bacillus subtilis，Staphylococcus aureus fungistasis.The results show：Korla Pear water extract concentrate had no inhibitory effect on Bacillus subtilis，Staphylococcus aureus，Escherichia.Green pears water extract also had no inhibitory effect on Escherichia coli，Staphylococcus aureus，but it had antibacterial effects on Bacillus subtilis.Bacillus subtilis minimum inhibitory concentration of 50%（Liquid density was about 1.23 g/mL），The minimum bactericidal concentration of bacteria concentration of1/1（stock solution）.

Xinjiang Korla pear；Xinjiang green pear；fungistasis

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.01.009

2014-08-19

项铁男（1968—），男（汉），副教授，硕士研究生，研究方向：食品工程与检验。