金针菇多糖抑菌作用的研究

黄琼，马仲文，赖腾强

（福建农业职业技术学院，福建福州350007）

金针菇多糖抑菌作用的研究

黄琼，马仲文，赖腾强

（福建农业职业技术学院，福建福州350007）

采用纸片扩散法研究金针菇多糖对8种细菌和真菌的抑菌效果，测试了金针菇多糖对细菌、真菌的抑菌圈大小、最小抑菌浓度。结果表明：金针菇多糖对真菌的抑制作用强于对细菌的抑制作用。最小抑菌浓度MIC在31 g/L～500 g/L之间。同时金针菇多糖对食品防腐具有一定的作用。

金针菇多糖；抑菌作用；细菌；真菌

金针菇（Flammulina velutipes）富含蛋白质、碳水化合物、矿物质元素、维生素和粗纤维，含脂肪较低，是一种不可多得的高营养食品[1]。由于其含有多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、火菇素、倍半萜等多种生物活性物质[2]，而被认为具有很高的药用价值。金针菇多糖是金针菇的主要活性成分之一，具有抗肿瘤和免疫调节作用。

近年来，由于天然提取物的安全优势，开发和利用天然防腐剂已成为发展趋势。同时由于食品种类繁多，微生物性状各异，现有防腐剂还不能满足食品工业迅速发展的需求，因此寻求广谱、高效、低毒的新型防腐剂是目前食品科学研究之一[3-4]。

多糖是构成生命的四大基本物质之一，具有抗疲劳、抗肿瘤、抗白血病作用，抗衰老，延长寿命，提高机体的免疫力[5]。研究表明[6-7]，多糖具有抑菌作用，目前国内外关于金针菇多糖研究报道主要集中在金针菇多糖的提取，而对金针菇多糖抑菌活性的研究尚未见相关报道。本试验通过研究金针菇多糖对细菌、真菌的抑菌作用，旨在开发一种天然的食品添加剂。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

优质金针菇：福建农业职业技术学院食用菌基地提供，后用蒸馏水清洗，自然晾干，粉碎。

细菌：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylosocus aureus）；真菌：木霉菌（Trichodermaspp）、青霉菌（Penicillium）、毛霉（Mucor）、镰刀菌（Fusarium）。

菌株由福建农业职业技术学院微生物实验室提供。培养细菌用牛肉膏蛋白胨培养基[8]，真菌用PDA培养基[8]。

乙醇：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

YXQ-SG46-280A手提式压力蒸汽灭菌锅：上海博迅实业有限公司医疗设备厂；UV-2800型紫外可见分光光度计：尤尼克（上海）仪器有限公司；LGR10-4.2高速冷冻离心机：上海安亭科学仪器厂；HZP-250型全温振荡培养箱：上海新诺仪器设备有限公司；RE-52A旋转蒸发仪：上海天呈科技有限公司；BOXUN超净工作台：上海优浦科学仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 金针菇多糖样品的制备

金针菇经过粉碎后，采用微波协同酶法提取[9]3次，离心分离后合并上清液，用Sevag法[10]多次脱蛋白至蛋白质除尽为上，透析，旋转蒸发浓缩，加4倍体积95%乙醇沉淀，离心，沉淀物用无水乙醇洗涤纯化，冷冻干燥得金针菇多糖粗品。

1.3.2 供试菌株活化[11]及菌悬液的制备

将所有供试菌种接入斜面培养基，细菌置于37℃恒温培养箱内培养24 h，真菌于28℃培养48 h后。然后分别挑取1环已活化好的菌种放入9mL无菌水中，振荡摇匀，制成一系列菌悬液，菌浓度约为106CFU/mL～108CFU/mL，备用。

1.3.3 金针菇多糖抑菌活性测定

采用滤纸片法[12]。用打孔器将滤纸打成直径8mm圆片，滤纸经高压灭菌后，置于500 g/L多糖及无菌水浸泡30min。倒入各种菌种的固体培养基，待其完全冷却凝固后，再分别移取各菌悬液0.4mL，用涂布器涂布均匀。每个平板放4个实验样片，1片阴性对照样片，用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的边缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，细菌置37℃培养24 h，真菌28℃培养48 h后，观察并测量抑菌圈的直径，分别测定3次。以无菌水为空白对照。

1.3.4 金针菇多糖最小抑菌浓度（MIC）测定

采用二倍稀释法，用无菌水配制成不同质量浓度的溶液，依次为500、250、125、62、31 g/L。向平皿中分别移取不同浓度的稀释液各1.0mL，然后每平皿中倒入各种菌种相应的温度在45℃左右的培养基约14 mL，混匀，完全冷却凝固后，每皿分别移取各菌悬液0.4m L，涂布均匀，同时做溶剂空白对照。在适宜温度下培养，每个质量浓度作3个重复。以完全无菌生长的浓度为最小抑菌浓度。

1.3.5 防腐试验

猪肉、茄子、豆腐切成小块煮熟，分别用金针菇多糖溶液（浓度为500 g/L）浸泡10min后，分装于经过灭菌的培养皿中，置于30℃下培养48 h，观察食品感官变化情况。用无菌水作空白对照。

2 结果与分析

2.1 金针菇多糖抑菌效果

2.1.1 抑菌圈大小（质量浓度为500 g/L）

按1.3.3测得金针菇多糖对细菌和真菌抑菌圈大小如表1。

表1 金针菇多糖的抑菌圈直径Table1 Inhibitory zone diameters of Flammulina velutipes polysaccharides against different microorganism

表1结果表明，金针菇多糖对真菌的抑菌作用优于细菌，对细菌的抑菌圈直径最大的是31.9mm，而对真菌的抑菌圈直径最大的是43.1mm，多糖对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌效果的差别不明显，对真菌的差别也不明显。金针菇多糖对8种菌的抑制作用大小依次为青霉菌＞毛霉＞镰刀菌＞沙门氏菌＞木霉菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠杆菌＞枯草芽孢杆菌。

2.1.2 最小抑菌浓度（MIC）

按1.3.4测得金针菇多糖最小抑菌浓度（MIC）如表2。

表2结果表明，金针菇多糖对青霉菌的MIC最低，为31 g/L，表明金针菇多糖对青霉菌的抑菌效果最好；对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的MIC最高，为500 g/L，对革兰氏阳性菌和阴性菌的MIC不存在明显的差别，对真菌的MIC普遍低于细菌，说明金针菇多糖对真菌的抑菌作用优于细菌。

2.2 金针菇多糖对食品的防腐作用

金针菇多糖对食品的防腐作用见表3。

表3结果表明，经金针菇多糖处理过的胡萝卜、豆腐和猪肉，其质地、色泽和气味无明显变化，表面无菌斑；但未经金针菇多糖处理的胡萝卜、豆腐和猪肉都腐败变质，表面有菌膜，有酸臭味。因此金针菇多糖对食品防腐具有一定作用。

表3 金针菇多糖对食品的防腐作用Table3 The effects of Flammulina velutipes polysaccharides on food preservation

3 结论

金针菇多糖对细菌、真菌具有一定的抑制作用。不同浓度金针菇多糖的抑菌活性存在极显著差异，以浓度为500 g/L的多糖溶液的抑菌作用比较明显。金针菇多糖对不同细菌和真菌的抑制活性存在显著差异。金针菇多糖对真菌的抑制活性强于细菌。同时金针菇多糖对食品防腐具有一定的作用。因此，金针菇多糖抑菌作用在食品防腐保鲜中的应用研究具有广阔的前景。但对于金针菇多糖的抑菌机理还有待于进一步研究。

[1]郑义,李超,王乃馨．金针菇多糖的研究进展[J]．食品科学,2010,31 (17):425-427

[2] Ishikawa N K,Yamaji K,Tahara S,et al.Highly oxidized cuparene-type sesquiterpenes from a mycelial culture of Flammulina velutipes[J].Phytochemistry,2000,54(8):777-782

[3] 马庆一,卫军,池银珠．天然色素作为防腐剂的筛选及应用研究(一)[J]．食品科学,2002,23(5):121-124

[4]马庆一,卫军,池银珠．天然色素作为防腐剂的筛选及应用研究(二)[J]．食品科学,2002,23(6):78-80

[5]唐诘．植物多糖生物功能活性的研究进展[J]．营养健康,2006,27 (6):130-132

[6]何余堂,潘孝明,王兵兵．玉米花多糖的分离与抑菌研究[J]．食品研究与开发,2010,31(4):119-121

[7] 张唐伟,杨乐,柳青海,等．地木耳多糖的抗氧化性与抑菌作用[J]．食品与生物技术学报,2011,30(6):868-873

[8] 沈萍,范秀容,李广武．微生物学实验[M]．北京:高等教育出版社, 1999

[9]黄琼,丁玲．微波协同酶法提取金针菇多糖工艺的优化[J]．食品与机械,2013,29(1):128-130,166

[10]吴东儒．糖类的生物化学[M]．北京:高等教育出版社,1993

[11]周德庆．微生物试验手册[M]．上海:上海科学技术出版社,1983

[12]卫生部卫生执法与监督司．消毒技术规范[M]．北京:中国人民共和国卫生部,2002:83-93

Primary Antibiotic Investigation of Flammulina velutipes Polysaccharides

HUANG Qiong，MA Zhong-wen，LAI Teng-qiang
（Fujian Vocational College of Agriculture，Fuzhou 350007，Fujian，China）

The inhibitory effects of Flammulina velutipes polysaccharide extracts against 8 species of microorganisms were studied by means of disk agar diffusion method.In other words，the antimicrobial circle and MIC were tested.The results showed：the inhibition effect of fungi is greater than bacteria.The minimal inhibitory concentrations（MIC）varied from 31 to500g/L.And Flammulina velutipes polysaccharides has certain effects on food preservation.

Flammulina velutipes polysaccharides；antimicrobial effect；bacteria；fungi

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.01.004

2013-12-14

福建省农业职业技术学院院级课题（14-ZS-01）

黄琼（1976—），女（汉），讲师，硕士，主要从事天然产物开发与利用方面的科研与教学工作。