抗心衰颗粒对DHF大鼠血浆ALD、PRA、AT-Ⅱ及心肌细胞TGF-β1的影响

抗心衰颗粒对DHF大鼠血浆ALD、PRA、AT-Ⅱ及心肌细胞TGF-β1的影响

麻京豫

(河南中医学院第一附属医院心血管内科，河南郑州450000)

摘要〔〕目的探讨抗心衰颗粒对舒张性心衰(DHF)大鼠血浆醛固酮(ALD)、肾素活性(PRA)、血管紧张素(AT)-Ⅱ及心肌细胞内转化生长因子 (TGF)-β1的影响。方法建立DHF大鼠模型，随机分为模型组，阳性药组(盐酸贝那普利)，抗心衰颗粒大、中、小剂量组和假手术组，采用放射免疫法(RIA)测定大鼠血浆ALD、PRA、AT-Ⅱ，免疫荧光染色法测定大鼠心肌细胞内TGF-β1蛋白表达水平。结果阳性药组及抗心衰颗粒大剂量组AT-Ⅱ均较模型组降低(均P<0.05)，且两组之间无统计学差异(P>0.05)；阳性药组及抗心衰颗粒大、中剂量组ALD均较模型组降低(均P<0.05)，且抗心衰颗粒大、中剂量组ALD与阳性药组均无统计学差异(P>0.05)；阳性药组及抗心衰颗粒各剂量组大鼠心肌细胞内TGF-β1的平均荧光强度均较模型组降低(均P<0.05)。结论抗心衰颗粒具有有效抑制DHF发生发展过程中肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的过度激活和抗心肌纤维化的作用，具有较好的临床应用价值。

关键词〔〕醛固酮；血管紧张素Ⅱ；肾素；转化生长因子β1；抗心衰颗粒；舒张性心力衰竭

中图分类号〔〕R541.4〔文献标识码〕A〔

第一作者：麻京豫(1969-)，女，硕士，副教授，副主任医师，主要从事心衰方面的研究。

目前研究〔1〕认为舒张性心力衰竭(DHF)的主要发生发展机制主要与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的过度激活和心肌纤维化有关，而心肌的纤维化则与心肌细胞内转化生长因子(TGF)-β1有着紧密联系。本研究通过建立DHF大鼠模型，观察分析抗心衰颗粒对DHF大鼠血浆醛固酮(ALD)、肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)及心肌细胞内TGF-β1的影响，为DHF的临床治疗提供新的思路。

1材料与方法

1.1动物模型的建立选择8周龄SD雄性大鼠120只，体重(200±10)g，郑州大学实验室动物中心提供(合格证号511020)，随机分为模型组(100只)和假手术组(20只)。采用腹主动脉缩窄法建立DHF大鼠模型，使大鼠腹主动脉直径减少35%～45%，在建模后8 w采用超声心电图和心导管等方法判断DHF大鼠模型是否建立成功。假手术组仅开腹暴露腹主动脉不做结扎缩窄，其余步骤和模型组相同。术后1 w内给每只大鼠腹腔注射青霉素10万单位/d。

1.2分组与给药将DHF大鼠模型随机分为模型组，阳性药组，抗心衰颗粒大、中、小剂量组和假手术组。其中抗心衰颗粒大、中、小剂量分别予以48.29、24.14、12.07 g/kg抗心衰颗粒(河南省中医院制剂部提供，批号：20130411)进行灌胃，阳性药组予以1.43 mg/kg的盐酸贝那普利(商品名：洛汀新，北京惠通医药有限公司提供，批号:C0005)进行灌胃，而模型组和假手术组则仅予以蒸馏水灌胃。给药8 w后，每组随机抽取6只大鼠进行测定。

1.3大鼠血浆ALD、PRA、AT-Ⅱ的测定采用放射免疫法(RIA)测定大鼠血浆ALD、PRA、AT-Ⅱ，所有试剂盒均由北京解放军总医院东亚免疫所提供。抽取大鼠颈总动脉血液，使用肝素抗凝，2 500 r/min离心10 min。

1.4大鼠心肌细胞内TGF-β1的测定采用免疫荧光染色法测定大鼠心肌细胞内TGF-β1蛋白表达水平，所有试剂盒均由南京凯基生物科技有限公司提供。将大鼠心室相同部位心肌进行冰冻切片染色及置片，用激光488 nm/530 nm激发20%发射后观察照相。

2结果

2.1抗心衰颗粒对DHF大鼠血浆ALD、PRA、AT-Ⅱ的影响模型组大鼠血浆PRA、ALD、AT-Ⅱ均较假手术组升高(均P<0.05)；抗心衰颗粒中剂量组PRA较模型组降低，差异具有统计学意义(P<0.05)，而阳性药组及抗心衰颗粒大、小剂量组PRA均与模型组无统计学意义(均P>0.05)；阳性药组及抗心衰颗粒大剂量组AT-Ⅱ均较模型组降低(均P<0.05)，且两组之间无统计学差异(P>0.05)；阳性药组及抗心衰颗粒大、中剂量组ALD均较模型组降低(均P<0.05)，且抗心衰颗粒大、中剂量组ALD与阳性药组均无统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1　抗心衰颗粒对DHF大鼠血浆ALD、

与假手术组比较：1)P<0.05；与模型组比较： 2)P<0.05

2.2抗心衰颗粒对DHF大鼠心肌细胞内TGF-β1的影响模型组大鼠心肌细胞内TGF-β1的平均荧光强度(60.12±12.32)较假手术组(15.62±2.19)升高(P<0.05)；阳性药组(18.21±2.41)及抗心衰颗粒大、中、小剂量组(19.47±2.86，31.32±7.96，41.32±8.78)均较模型组降低(均P<0.05)，其中阳性药组与抗心衰颗粒大剂量组无统计学差异(P>0.05)，而与抗心衰颗粒中、小剂量组存在统计学差异(P<0.05)。

3讨论

DHF是以心室肌舒张功能僵硬度升高及顺应性下降而心室肌收缩功能正常(射血分数>50%)为主要特征，临床表现为充血性心力衰竭症状与体征的一组临床症候群〔2〕。目前研究〔3〕认为RAAS在心血管系统功能的调节和维持方面具有重要的意义，近年的研究发现RAAS系统不仅参与调节大血管功能，而且在心力衰竭过程中心肌细胞的增殖与凋亡中也具有一定的促进作用，能够间接或直接导致心力衰竭的发生〔4〕。PRA可以使血管紧张素原水解成AT-Ⅰ，而血管紧张素转化酶(ACE)可以使AT-Ⅰ进一步转化成AT-Ⅱ，AT-Ⅱ不但能促进ALD在肾上腺皮质的分泌，而且同时还具有胶原转化等生物学作用〔5〕。近年来很多学者〔6～8〕从不同角度对构建了一系列心衰动物模型，这些模型有利于对心衰的全过程进行研究。DHF的病因多种多样〔6〕，目前研究发现高血压是造成DHF的主要疾病〔7〕。

抗心衰颗粒由黄芪、山萸肉、蒲黄及海藻等中草药组成，有益气滋阴、化痰利水、活血养血、软坚散结的功效〔8〕。其中黄芪为君药，具有增强心肌细胞缺血缺氧耐受力的能力；山萸肉可以提高受损心肌细胞内质网活性氧水平；蒲黄可以抑制血小板的聚集作用，延长复钙时间；海藻有调节血管收缩、抗动脉粥样硬化及保护心肌等作用〔9〕。

本研究结果与RAAS的过度激活理论一致。另外本研究可能与盐酸贝那普利不能直接作用于PRA，其可能直接通过抑制ACE使AT-Ⅱ的生成减少有关，这与苗梦露等〔10〕的研究结果一致。本研究还发现抗心衰颗粒可能对PRA具有最佳效应剂量，若需进一步确认，可以适当增加剂量组绘制剂量效应曲线。而且本研究提示抗心衰颗粒与盐酸贝那普利抗心衰的效果一致，抗心衰颗粒能抑制RAAS的过度激活，可以用于临床治疗DHF。

DHF的发展过程中，心肌细胞和间质细胞能够发生代偿性变化，造成心肌纤维化，使心肌发生重构〔11〕。RAAS的激活是造成心肌纤维化的主要原因，而同时细胞因子中最重要的促纤维化生长因子则为TGF-β1，其能促进细胞外基质mRNA的表达及蛋白质的形成，同时能抑制细胞外基质的降解〔12〕。本研究结果提示盐酸贝那普利和抗心衰颗粒均能抑制TGF-β1的表达，其抑制程度与抗心衰颗粒的剂量呈正相关关系。

综上所述，抗心衰颗粒具有有效抑制DHF发生发展过程中RAAS的过度激活和抗心肌纤维化的作用，临床应用抗心衰颗粒具有一定的有效性及理论依据。

4参考文献

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10苗梦露,李七一,严士海,等.抗心衰颗粒对舒张性心衰大鼠RAAS及心肌细胞内TGF-β1的影响〔J〕.南京中医药大学学报,2013;29(3):247-50.

11刘春霞.舒张性心力衰竭的发病机制和治疗进展〔J〕.心血管病学进展,2013;34(2):254-7.

12林楚伟,周胜华,戴海鹰,等.转化生长因子β1在大鼠骨髓间充质干细胞移植修复梗死心肌中的作用〔J〕.中国组织工程研究,2012;16(27):5039-45.

〔2014-11-17修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)