骨桥蛋白及基质金属蛋白酶-9在胰腺癌中的表达及作用

骨桥蛋白及基质金属蛋白酶-9在胰腺癌中的表达及作用

王孪妹杨瑞雪赵辉王立红刘一娜

(大庆油田总医院，黑龙江大庆163001)

摘要〔〕目的探讨不同分级胰腺癌患者癌组织及癌旁组织中骨桥蛋白(OPN)及基质金属蛋白酶(MMP)-9表达及血清中OPN和MMP-9含量及其在胰腺癌进展中的作用。方法46例胰腺癌患者手术切除的癌组织及癌旁组织，采用免疫组织化学方法检测OPN和MMP-9分布及表达；ELISA方法检测血清OPN和MMP-9浓度。结果不同分级胰腺癌组织内OPN、MMP-9阳性细胞百分数明显高于癌旁组织(P<0.05)，且随着病情的逐级加重，OPN、MMP-9阳性细胞数明显增加。胰腺癌血清中OPN、MMP-9浓度明显高于胰腺炎和正常组(P<0.05)；OPN与MMP-9存在正相关。结论血清及组织中OPN和MMP-9的表达变化能反映胰腺癌进展程度，对胰腺癌的早期诊断及病情评价具有指导意义。

关键词〔〕骨桥蛋白；基质金属蛋白酶-9；胰腺癌

中图分类号〔〕R735.9〔文献标识码〕A〔

第一作者：王孪妹(1978-)，女，主管护师，主要从事临床护理工作。

胰腺癌发病隐匿，多数患者确诊时已属中晚期而无法进行手术，预后较差，目前临床上缺乏特异有效的检测指标。骨桥蛋白(OPN)在细胞的黏附与迁移、组织修复、细胞的信号转导中具有重要作用，参与人体多种肿瘤的转化、侵袭、转移过程，在一定程度上能够反映肿瘤的恶性程度〔1〕。基质金属蛋白酶(MMP)-9与肿瘤侵袭和转移密切相关，参与肿瘤生长和进展〔2〕。目前关于OPN和MMP-9在胰腺癌侵袭转移中相互作用的研究尚少。本研究通过检测OPN和MMP-9在胰腺癌患者组织和血清中的表达，分析其与胰腺癌发生发展的关系，为胰腺癌的早期诊断及预后评价提供依据。

1材料与方法

1.1病例资料收集2011～2013年在大庆油田总医院普通外科就诊并进行胰腺癌手术的患者46例，留取癌组织和癌旁组织。按Hemrick CT分级将胰腺癌患者分为4级，Ⅰ级10例：胰腺肿块，无周围血管或脏器侵犯；Ⅱ级9例：癌细胞侵犯周围组织(如肠系膜血管、腹腔动脉、主动脉、门静脉、胃和十二指肠等)；Ⅲ级12例：局部淋巴结转移；Ⅳ级15例：肝或其他脏器转移。同时收集胰腺癌患者(46例)、胰腺炎患者(26例)、正常人血清(20例)冻存待检。

1.2免疫组化分析癌组织与癌旁组织中OPN及MMP-9的表达癌组织固定于10%中性甲醛溶液中，石蜡包埋、切片，免疫组织化学染色检测OPN及MMP-9的表达，按照试剂盒(福建迈新生物技术公司)说明书进行操作。镜下染成棕黄色的细胞为阳性细胞，蓝色的细胞为阴性细胞。以PLPS-2014彩色细胞分析系统进行图像分析，随机选择5个视野，计数200个细胞，计算阳性细胞百分数(阳性细胞数/细胞总数×100)。

1.3ELISA方法检测血清中OPN及MMP-9的含量空腹抽取肘前静脉血10 ml，加柠檬酸钠抗凝后，低温离心(3 000 r/min)20 min，搜集上层血清-80℃冰箱保存待检。实验按照ELISA试剂盒(福建迈新生物技术公司)说明书进行。

2结果

2.1胰腺癌组织和癌旁组织OPN与MMP-9的表达及相关性免疫组织化学染色结果显示，OPN阳性细胞主要分布在胰腺导管周围，各分级胰腺癌组织内OPN阳性细胞百分数明显高于癌旁组织，且随分级程度而增强(P<0.05)。MMP-9阳性细胞沿胰腺导管集中分布，胰腺癌组织内MMP-9阳性细胞百分数与癌旁组织相比具有显著差异(P<0.05)，其变化趋势与OPN相似。相关性分析显示OPN与MMP-9之间呈正相关(r=0.724 6，P<0.05)。见图1，图2，表1。

图1　胰腺癌组织和癌旁组织OPN的表达(SP，×400)

图2　胰腺癌组织和癌旁组织MMP-9的表达(SP，×400)

组别nOPNMMP-9Ⅰ级1014.75±2.541)8.96±1.641)Ⅱ级923.67±1.041)19.26±4.351)2)Ⅲ级1234.62±7.591)2)37.62±5.771)2)3)Ⅳ级1549.58±9.821)2)3)4)42.62±6.231)2)3)4)癌旁组织270.65±0.231.22±0.56

与癌旁组织比较:1)P<0.05；与Ⅰ级比较:2)P<0.05；与Ⅱ级比较:3)P<0.05；与Ⅲ级比较:4)P<0.05

2.2血清中OPN和MMP-9的含量及相关性分析不同分级的胰腺癌患者血清中OPN、MMP-9浓度明显高于胰腺炎患者和正常人，并且胰腺癌血清中OPN、MMP-9浓度随着胰腺癌临床分级的恶化而逐步升高(P<0.05)。经过相关性分析，OPN与MMP-9呈正相关(r=0.835 7，P<0.01)。见表2。

表2　血清样品OPN和MMP-9检测结果

与正常组比较：1)P<0.05；与Ⅰ级比较：2)P<0.05；与Ⅱ级比较：3)P<0.05；与Ⅲ级比较：4)P<0.05

3讨论

通过对众多肿瘤的研究(乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肝癌和胃癌等)，多数学者对OPN在肿瘤发生发展过程中的作用已经达成共识，确认OPN是重要的肿瘤转移基因。OPN通过增强肿瘤细胞自身的黏附性、减少肿瘤细胞迁移阻碍、促进血管形成等机制参与肿瘤进展〔3〕。本实验免疫组织化学结果显示，不同分级的胰腺癌细胞内OPN阳性颗粒明显多于癌旁组织，提示胰腺癌病变过程中，肿瘤细胞内异常表达OPN蛋白，进而与受体结合，促进肿瘤侵袭与转移，加速胰腺癌的发病过程。同时发现，OPN随着胰腺癌病理分级的逐步加重，表达随之增加，说明OPN变化反映胰腺癌分级程度。MMPs存在于细胞质中，被激活后能消化细胞外的基质与基底膜，与肿瘤转移密切相关。MMP-9是MMP家族中一种最重要的酶，对Ⅳ、V型胶原和明胶构成的细胞基质进行降解和破坏，促进肿瘤细胞的黏附能力，加快肿瘤内血管向细胞间质中浸润生长，促进肿瘤的进一步增长并向其他部位的转移〔4〕。本研究结果显示，胰腺癌组织内MMP-9阳性表达趋势也随着胰腺癌病理分级的逐步加重。并且其变化与OPN呈正相关。

对OPN和MMP-9在肿瘤的相互关系也有一些相关报道。杨丽君报道了OPN和MMP-9在结直肠癌中的高表达，两者呈正相关，在结直肠癌的发生、浸润、肝转移可能具有协同作用〔5〕；OPN可以通过与整合素ανβ3受体的结合，提高MMP-9的表达和激活，促进基质细胞浸润，从而导致肿瘤的形成〔6〕；OPN和MMP-9也可能通过旁分泌效应改变周围基质的微环境，促进肿瘤的远处转移；也有报道OPN通过PI3K/Akt信号途径激活核转录因子(NF-κB)，提高尿激酶型纤溶酶激活物分泌，使MMP-9活性增强，使肿瘤发生浸润和转移〔7〕。本研究显示，OPN与MMP-9表达随病情分级逐步变化，两者存在正相关，证明OPN与MMP-9可以作为胰腺癌评价的重要指标，反映胰腺癌进展程度。此外发现，胰腺炎血清中OPN与MMP-9表达与正常血清无显著差异，提示OPN与MMP-9的异常表达可以排除炎症的影响。

综上所述，通过对不同分级的胰腺癌患者组织中和血清中OPN和MMP-9进行检测和分析，发现组织中的OPN和MMP-9的分布程度与肿瘤的恶性程度相一致，而血清中的含量与组织中的表达相似，证明OPN和MMP-9的含量变化能够灵敏地反映胰腺癌病变程度，对于胰腺癌的早期诊断和病情评判具有重要意义。

4参考文献

1杨少奇，李西梅，何芳，等.OPN、MMP-9在胰腺癌及其侵袭转移中的表达〔J〕.宁夏医学杂志，2009；31(12)：1092-5.

2王璐，张丽红，李玉林，等.基质金属蛋白酶-9及其mRNA在胃癌中的表达与血管新生的关系〔J〕.中华医学杂志，2003；83(9)：782-6.

3Lo YL，Leoh TH，Xu LQ，etal.Short-segment nerve conduction studies in the localization of ulnar neuropathy of the elbow：use of flexor carpi ulnaris recording〔J〕.Muscle Nerve，2005；31(5)：633-6.

4Vargo-Gogola T，Crawford HC，Gingleton B，etal.Identification of novel matrix metalloproteinase-7(matrilysin) cleavage sites in morine and human Fas ligand〔J〕.Arch Bioehem Biophys，2002；408(2)：155-61.

5杨丽君，陈钟.OPN和MMP-9在结直肠癌中的表达及其与肝转移的相关性〔J〕.当代医学，2012；18(12)：7-9.

6Rangaswami H，Bulbule A，Kundu GC.Nuclear factor inducing kinase plays crucial role in osteopontin induced MAPK/IKK dependent nuclear factor kappa B-mediated promatrix metalloproteinase-9 activation〔J〕.J Boil Chem，2004；279(37)：38921-35.

7李震，刘洪锋.胰腺癌中AQP-1和MMP-9的表达及临床意义〔J〕.医药论坛杂志，2013；34(9)：64-5.

〔2014-07-09修回〕

(编辑袁左鸣)