肝龙胶囊和美洲大蠊脱脂膏对正常大鼠胆汁分泌的影响

夏盟恺，曾　菁，牛春丽，彭　芳

（大理学院药学与化学学院，云南大理　671000）

肝龙胶囊和美洲大蠊脱脂膏对正常大鼠胆汁分泌的影响

夏盟恺，曾菁，牛春丽，彭芳*

（大理学院药学与化学学院，云南大理671000）

目的：研究肝龙胶囊和美洲大蠊脱脂膏对正常大鼠胆汁分泌的影响。方法：取80只大鼠随机分组，各组均按20 mL∕kg进行灌胃给药，1次∕d，连续给药7 d。采用大鼠胆汁流量实验、胆汁成分分析观察受试药的利胆作用。结果：肝龙胶囊无利胆作用，对胆汁成分无影响；而美洲大蠊脱脂膏具有利胆作用，其胆汁流量与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05），使胆汁中TBL、DBL、IBL的含量降低（P＜0．05）。结论：肝龙胶囊对正常大鼠无利胆作用；美洲大蠊脱脂膏则有利胆作用。

肝龙胶囊;美洲大蠊脱脂膏；利胆作用

［DOI］10．3969∕j．issn．1672-2345．2015．02．002

胆汁淤积是由于胆汁生成障碍或流动障碍所造成的一种临床综合征。无论何种原因所致的胆汁淤积均可导致肝脏损伤和慢性胆汁淤积性肝病。胆汁淤积通常伴随有血清碱性磷酸酶升高、黄疸和高胆固醇血症，并逐步发展为肝硬化甚至肝功能衰竭〔1〕。

肝龙胶囊是国家食品药品监督管理局正式登记在案的抗肝炎中药新药。已有众多文献证明肝龙胶囊有显著的抗乙型肝炎疗效〔2-3〕。现研究发现，肝龙胶囊还有一定的抗脂质过氧化能力〔4〕，对酒精性肝损伤以及化学试剂造成的急性肝损伤有一定的修复能力，延缓或抑制损伤因素对肝脏造成的炎症反应〔5-6〕，以及控制和调节肌肉收缩的能力〔7〕。

美洲大蠊脱脂膏是将美洲大蠊干燥虫体粉碎后，用15倍量95%乙醇冷浸提取3次，所得乙醇液合并，浓缩得提取浸膏。所得到的浸膏，上聚酰胺柱，依次用水及不同比例的含水甲醇洗脱，定量收集，分别浓缩。其中某一划段成分经冷冻干燥后即为所用样品。通过计算，所提取物占生药的比率为0．2%。康复新液是根据云南大理白族人民应用蜚蠊治疗恶疮的有效经验，从美洲大蠊药材提取液中分离、精制而成的生物制剂，其成分复杂，含有18种氨基酸，其中丙氨酸最多，还含有动物油脂、蛋白质、多元醇类及肽类活性物质，其中康复新液主要成分美洲大蠊浸膏的浓度为0．04 mg∕mL。

上述研究结果提示肝龙胶囊具有一定的抗肝损伤作用，如能进一步探索美洲大蠊来源的系列产品是否影响胆汁的分泌，这对美洲大蠊更好地改善消化系统消化吸收功能及如何减轻炎症发生具有重要的指导意义。

1　实验材料与方法

1．1动物标准SD健康大鼠80只，雌雄各半，体重250～300 g，由昆明医科大学动物中心提供，合格证号：SCXK（滇）2008-0003。

1．2实验试剂及药品肝龙胶囊（昆明赛诺制药有限公司，批号：国药准字Z20050113）；康复新液（昆明赛诺制药有限公司，批号：国药准字Z53020054）；美洲大蠊脱脂膏（大理学院药学与化学学院刘光明教授提供）。

1．3器材AE240电子分析天平（瑞士梅特勒有限公司）；1．0R型低温高速离心机（德国Heraeus公司）；7180型全自动生化分析仪（日本Hitachi公司）。

1．4样品及所用药物的配制肝龙胶囊样品用生理盐水配制为3个浓度：0．125%、0．25%、0．5%；美洲大蠊脱脂膏样品用生理盐水配制为3个浓度：0．25%、0．5%、1%。

1．5肝龙胶囊对正常大鼠胆汁分泌的影响取体重250～300 g大鼠80只，雌雄各半，随机分为8组，肝龙胶囊高剂量组（100．00 mg∕kg）、中剂量组（50．00 mg∕kg）、低剂量组（25．00 mg∕kg）；美洲大蠊脱脂膏高剂量组（200．00 mg∕kg）、中剂量组（100．00 mg∕kg）、低剂量组（50．00 mg∕kg）；阳性组（康复新）（0．36 mg∕kg），对照组（生理盐水）。肝龙胶囊、美洲大蠊脱脂膏组、对照组、康复新组均按20 mL∕kg对大鼠进行灌胃给药，1次∕d，连续给药7 d。实验前12 h禁食不禁水，实验前每鼠腹腔注射20%乌拉坦（0．5 mL∕100 g）后，行腹部手术，仰位固定于固定板上，沿腹正中线切开2 cm，打开腹腔，在十二指肠降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管，在其下穿2根丝线，结扎乳头部，向肝脏方向作V形切口，插入1 mL塑料管，用小烧杯收集胆汁。手术后用止血钳夹闭腹壁，以盐水纱布覆盖。待稳定20 min后，收集大鼠给药后所分泌4 h胆汁，每30 min换一个小烧杯收集，共收集8次。记录胆汁流量。实验结束测定4 h的胆汁分泌总量，计算胆汁的体质量系数〔8-11〕。并测定胆汁中的总胆固醇（Total cholesterol，TC），总胆红素（Total bilirubin，TBL），直接胆红素（Direct bilirubin，DBL），间接胆红素（Indirect bilirubin，IBL）和总胆汁酸（To⁃tal bile acid，TBA）。

胆汁的体质量系数=胆汁重量（g）÷体重量（g）× 100%

2　实验结果

2．1肝龙胶囊对正常大鼠胆汁流量的影响对胆汁分泌量的影响：与对照组比较，康复新液组胆汁分泌量显著性增多（P＜0．01），美洲大蠊脱脂膏中剂量组增多（P＜0．05）；与康复新液组比较，肝龙胶囊高、中剂量组显著性减少（P＜0．01），肝龙胶囊低剂量组、美洲大蠊脱脂膏3个剂量组胆汁分泌量与康复新液组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。对胆汁系数的影响：与对照组比较，康复新液组胆汁系数显著性增大（P＜0．01），美洲大蠊脱脂膏中剂量组增大（P＜0．05）；与康复新液组比较，肝龙胶囊高、中剂量组显著性减小（P＜0．01），肝龙胶囊低剂量组、美洲大蠊脱脂膏3个剂量组胆汁系数与康复新液组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。胆汁分泌量与胆汁系数成正比，胆汁分泌量越多，胆汁系数越大。见表1。

表1　肝龙胶囊对正常大鼠4 h胆汁流量的影响（，n=10）

表1　肝龙胶囊对正常大鼠4 h胆汁流量的影响（，n=10）

注：与对照组比较*P＜0．05，**P＜0．01；与阳性组比较##P＜0．01。

胆汁系数∕% 0．46±0．25 0．36±0．21##0．45±0．17##0．61±0．24 0．56±0．10 0．67±0．09* 0．53±0．17 0．76±0．22**组别对照组肝龙胶囊高剂量组肝龙胶囊中剂量组肝龙胶囊低剂量组美洲大蠊脱脂膏高剂量组美洲大蠊脱脂膏中剂量组美洲大蠊脱脂膏低剂量组康复新液组剂量∕（mg∕kg）—100．00 50．00 25．00 200．00 100．00 50．00 0．36胆汁分泌量∕mL 1．16±0．62 0．90±0．52##1．13±0．43##1．51±0．61 1．40±0．25 1．66±0．21* 1．32±0．42 1．89±0．54**

2．2肝龙胶囊对正常大鼠胆汁主要成分的影响

美洲大蠊脱脂膏3个剂量组对TBL、DBL、IBL均有下降作用，但结果未出现浓度依赖性。其中美洲大蠊脱脂膏中剂量组的胆红素与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0．05），美洲大蠊脱脂膏低剂量组的TBL、IBL与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05），康复新的IBL、TC与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。见表2。

3　讨论

胆汁是胆道中流动的一种特殊液体，75%由肝细胞分泌，25%由胆管细胞分泌。胆汁的成分中97%是水，水中溶解许多成分，除了钙、钠、钾、碳酸氢盐等无机成分之外，还包括胆色素、TC、胆盐、TBA等有机成分。

表2　肝龙胶囊对正常大鼠胆汁主要成分的影响（，n=10）

表2　肝龙胶囊对正常大鼠胆汁主要成分的影响（，n=10）

注：与对照组比较*P＜0．05，**P＜0．01；与阳性组比较#P＜0．05。

组别对照组肝龙胶囊高剂量组肝龙胶囊中剂量组肝龙胶囊低剂量组美洲大蠊脱脂膏高剂量组美洲大蠊脱脂膏中剂量组美洲大蠊脱脂膏低剂量组康复新液组剂量∕（mg∕kg）—100．00 50．00 25．00 200．00 100．00 50．00 0．36 TBL∕（μmol∕L）138．13±68．12 144．18±37．43#115．80±36．41 99．31±19．12 115．84±29．31 67．01±10．09* 72．33±30．62* 79．35±17．26 DBL∕（μmol∕L）109．99±57．38 121．79±27．47#97．71±30．28 84．45±15．75 101．08±23．86 58．21±10．37* 63．54±26．89 68．68±13．67 IBL∕（μmol∕L）28．05±9．98 22．39±6．28#18．09±6．49 14．86±6．10 14．76±5．58 8．80±0．81** 8．79±4．01** 10．68±3．13* TC∕（mmol∕L）TBA∕（μmol∕L）0．32±0．08 0．31±0．04#0．34±0．08#0．27±0．08 0．32±0．02#0．30±0．03#0．31±0．07#0．24±0．04* 153．11±23．70 147．71±36．79 156．33±12．39 145．64±30．89 169．73±17．66 152．45±36．55 171．55±42．97 137．68±23．13

TBA是胆汁的重要组成和功能部分，除了促进脂肪酸吸收的作用之外，它还具有两个重要的功能：抑制TC沉淀形成胆结石、通过向胆汁的主动运输促进水分和溶质的输出。胆红素是体内铁卟啉化合物的主要代谢产物，也是临床上判断黄疸的重要依据，而且是肝功能的重要指标。

实验结果表明，美洲大蠊脱脂膏中剂量组胆汁分泌量与对照组比较有较大的增加，且差异具有统计学意义（P＜0．05）；康复新液组与对照组比较胆汁分泌量增加明显，差异具有统计学意义（P＜0．01），提示美洲大蠊脱脂膏中剂量组、康复新液组对大鼠胆汁分泌有不同程度的促进作用。美洲大蠊脱脂膏低剂量组对TBL、IBL均有降低作用，美洲大蠊脱脂膏中剂量组对TBL、DBL、IBL均有降低作用，2个剂量组IBL含量与对照组比较降低明显，差异具有统计学意义（P＜0．01），提示美洲大蠊脱脂膏可能通过降低胆红素来减少胆汁淤塞以及其它肝胆疾病的发病率；康复新液对IBL、TC也有降低作用（P＜0．05），提示康复新液可能是通过降低IBL、TC来促进胆汁的分泌及改善机体的消化功能。本次实验中各组TBA含量与对照组比较差异没有统计学意义（P＞0．05），提示康复新液、美洲大蠊脱脂膏促胆汁分泌作用可能与TBA含量变化无关。

实验中肝龙胶囊各剂量组胆汁分泌量、胆汁系数与对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05），肝龙胶囊高剂量组TBL、DBL、IBL含量与对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05），与康复新液组比较有所增多（P＜0．05）；肝龙胶囊高、中剂量TC含量与对照组比较差异无统计学意义，与康复新液组比较亦有所增多（P＜0．05）。肝龙胶囊低剂量组胆汁流量、胆红素含量及TC含量与康复新液组比较差异无统计学意义（P＜0．05），而高、中剂量组胆汁流量、胆红素含量及TC含量与康复新组比较差异具有统计学意义（P＜0．05），提示实验可能受大鼠个体因素、剂量设计等因素的影响。综上所述，肝龙胶囊并无利胆作用，与康复新液组比较，出现了胆汁流量减少、胆红素及胆固醇含量升高等效果。

从美洲大蠊脱脂膏组胆汁各成分变化来看，美洲大蠊脱脂膏可能为水利胆剂，除了降低胆红素浓度并未改变其它成分在胆汁中的浓度。本次实验中因为考虑实验中取血对大鼠术后生存的影响以及麻醉对血清胆红素成分的影响，并未进行血清胆红素的评估，故无法判断胆汁中胆红素降低是否产生了对肝脏的保护效果以及减少黄疸发生的作用，有待进一步研究。

从实验结果中我们发现，肝龙胶囊、美洲大蠊脱脂膏的3个剂量组并未呈现明显的量效关系，肝龙胶囊低剂量组胆汁流量、胆汁系数与对照组比较虽未出现统计学差异，但出现了流量增加、系数增大的趋势，效果比肝龙胶囊高、中剂量组好；美洲大蠊脱脂膏中剂量促胆汁分泌的效果比高剂量好，美洲大蠊中、低剂量组对胆红素的降低效应也较高剂量组明显，分析可能的原因为药物剂量设计不好，提示用药原则应以选择较小剂量、长期应用。

由于研究还处于初期阶段，未能对胆汁中其它成分的变化进行测定，故可能存在尚未研究出来美洲大蠊脱脂膏促胆汁分泌的机制，有待进一步深入研究。

〔1〕余丰，梁飞立，邓梅花，等．肝内胆汁淤积性肝病的中西医论治〔J〕．现代中西医结合杂志，2013，22（9）:1019-1021．

〔2〕杜一民，陈鸿珊，李树楠，等．治疗乙型肝炎新药肝龙胶囊的药效学初步研究〔J〕．时珍国医国药，2006，17（8）: 1369．

〔3〕谢荣慧，刘云华，赵玉蓉．肝龙胶囊治疗慢性乙型肝炎疗效分析〔J〕．中西医结合肝病杂志，2003，13（16）:336．

〔4〕张成桂，焦春香，何正春，等．肝龙不同有效部位体外抗氧化活性的分析〔J〕．时珍国医国药，2011，22（1）:69-71．

〔5〕张旭强，何旭，陈俊雅，等．肝龙胶囊CⅡ-3对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用〔J〕．大理学院学报，2011，10（12）:1-5．

〔6〕甘平，张旭强，何旭，等．美洲大蠊醇提物对小鼠急性肝损伤的保护作用〔J〕．现代药物与临床，2011，17（8）:123-128．

〔7〕何正春，刘光明．美洲大蠊神经肽的研究进展〔J〕．天然产物研究与开发，2008，20（7）：180-186．

〔8〕孙付军，陈慧慧，王春芳，等．柴胡、黄芩药对利胆作用研究〔J〕．中成药，2011，33（8）:1418-1420．

〔9〕明海霞，陈彦文，黄世佐，等．甘肃金银花对实验动物胆汁分泌及胆囊平滑肌的影响〔J〕．中医药学报，2014，42（1）:65-67．

〔10〕张帆，庞雪冰．溪黄草浸膏对动物胆汁分泌及免疫功能的影响〔J〕．中国药师，2012，15（4）:575-576．

〔11〕田静，蒋小琴，潘旭旺，等．复方茵柏颗粒对大鼠急性肝损伤的保护作用及对胆汁分泌的影响〔J〕．中华中医药学刊，2012，30（12）:2761-2763．

（责任编辑李杨）

Effect of Ganlong Capsule and Periplaneta americana Skimmed Cream on Bile Secretion of Normal Rats

Xia Mengkai,Zeng Jing,Niu Chunli,Peng Fang*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To investigate the effect of Ganlong capsule and Periplaneta americana skimmed cream on bile secretion of normal rats．Methods:80 rats were randomly divided into groups．After seven consecutive days of intragastric administration of 20 mL∕kgonce a day to each group,the effect was observed by the bile flow experiment and the analysis of bile composition．Results: Ganlong capsule had no choleretic effec,and no effect on bile compositon．Periplaneta americana skimmed cream had choleretic effect, and compared with NS group,the difference in the bile flow was statistically significant(P＜0．05),and the content of TBL,DBL and IBL in bile decreased(P＜0．05)．Conclusion:Ganlong capsule had no choleretic effect;Periplaneta americana skimmed cream had choleretic effect．

Ganlong capsule;Periplaneta americana skimmed cream;choleretic effect

R965．1

A

1672-2345（2015）02-0004-04

2014-08-02

2014-12-05

夏盟恺，硕士研究生，主要从事药理学研究．

彭芳，教授．