4种漱口液对白色念珠菌抑制效果的实验研究及临床观察

徐丽丽 ，王国权 ，葛永勤 ，李雪芬 ，刘 敏 ，吕 亚 ，何 君

（1.南京医科大学附属无锡妇幼保健院，江苏 无锡 214000；2.中国人民解放军第307医院，北京 100071；3.中国人民解放军军事医学科学院 病原微生物安全国家重点实验室，北京100071）

【论 著】

4种漱口液对白色念珠菌抑制效果的实验研究及临床观察

徐丽丽1，王国权2，葛永勤1，李雪芬1，刘 敏1，吕 亚1，何 君3

（1.南京医科大学附属无锡妇幼保健院，江苏 无锡 214000；2.中国人民解放军第307医院，北京 100071；3.中国人民解放军军事医学科学院 病原微生物安全国家重点实验室，北京100071）

目的探讨4种漱口液对白色念珠菌的抑菌效果；并观察漱口液对放化疗合并口腔白色念珠菌感染的肿瘤患者的临床疗效。方法实验以白色念珠菌为研究对象，实验组采用复方氯己定含漱液、0.02%醋酸氯己定溶液、0.5%聚维酮碘溶液、0.1%西吡氯铵含漱液，对照组采用生理盐水，观察4种漱口液的抑菌效果。选用抑菌效果最明显的2种漱口液，用于放化疗合并口腔白色念珠菌感染的60例肿瘤患者，并将其分成2组，每组各30例，观察其临床疗效。结果实验组的复方氯己定含漱液和0.5%聚维酮碘溶液的抑菌效果明显高于0.02%醋酸氯己定溶液和0.1%西吡氯铵含漱液，差异有统计学意义（P＜0.05）；复方氯己定含漱液与0.5%聚维酮碘溶液的抑菌效果比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。临床观察：0.5%聚维酮碘溶液组患者在疼痛持续时间、平均愈合时间方面，与复方氯己定含漱液组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论基础实验的数据说明，复方氯己定含漱液与0.5%聚维酮碘溶液和对白色念珠菌的抑菌效果最明显。临床试验的数据说明，0.5%聚维酮碘溶液组患者在疼痛持续时间、平均愈合时间方面优于与复方氯己定含漱液组的患者。

漱口液；白色念珠菌；抑菌效果；临床疗效

白色念珠菌 （Candida albicans,即白假丝酵母菌），是口腔正常微生物群的组分之一，也是口腔中重要的条件致病真菌[1]。据报道，白色念珠菌现已经成为恶性肿瘤患者口腔感染的重要致病菌之一，并有逐年上升的趋势[2]，严重影响患者的生存质量。因此，有效预防和治疗口腔白色念珠菌感染和加强对此类患者的护理尤为重要。本次实验，是以白色念珠菌为研究对象，目的是探讨临床常用的4种漱口液，复方氯己定含漱液、0.02%醋酸氯己定溶液、0.5%聚维酮碘溶液、0.1%西吡氯铵含漱液，对白色念珠菌的抑菌效果。并选用抑菌效果最明显的漱口液，应用于放化疗合并口腔白色念珠菌感染肿瘤患者，观察其临床疗效，以提高口腔护理质量。

1 资料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 漱口液 （1）复方氯己定含漱液，规格为200 mL/瓶，批号为201211，pH=7，由深圳南粤药业有限公司生产。（2）0.02%醋酸氯己定溶液，规格为250 mL/瓶，批号为101001；pH=7，由北京麦迪海药业有限公司生产。（3）0.5%聚维酮碘溶液 （艾力克,口腔型）,规格为 200 mL/瓶,批号为 101201，pH=6，由成都永安制药有限公司生产。（4）0.1%西吡氯铵含漱液，规格为 240 mL/瓶，批号为 110109，pH=6，由南京恒生制药厂生产。

1.1.2 实验菌株 白色念珠菌菌株代码为ATCC 10231，由军事医学科学院微生物菌种保藏中心提供。

1.1.3 实验材料和实验仪器 胰蛋白胨，由日本大五荣营养化学株式公社生产。LP0011型号琼脂粉及LP00211酵母粉，均由英国OXOID公司生产。氯化钠注射液，由军事医学科学院病原微生物实验室生产。氯化钠粉剂，由西陇化工股份有限公司生产。430-400E型生物安全柜，由NUAIR公司生产。1-13型离心机，由德国GSIGMA公司生产。比浊管，由中国药品生物制品鉴定所生产。TOMOS微量移液器，为20-200 μL，由TOMOS公司生产。恒温培养箱，由美国lab-line instruments,Inc公司生产。

1.1.4 临床试验资料 2012年9月—2014年6月，选取我院口腔白色念珠菌感染的肿瘤患者60例，建立入选标准和排除标准，入选标准为：有明确的使用化疗药物史和放疗史，及口腔溃疡表面分泌物培养为白色念珠菌感染者。排除标准为：（1）对漱口液过敏者；（2）伴有系统性疾病或其他严重全身感染者；（3）存在严重口腔疾病，如：口腔恶性肿瘤、牙根炎等；（4）带状疱疹病毒感染病史者；（5）影响疗效判断者，依从性差，具备上述之一者给予排除。将60例患者按照入院的先后顺序，单数入复方氯己定含漱液组，双数入0.5%聚维酮碘溶液组，2组患者年龄、文化、婚姻、疾病分型等差异均无统计学意义，见表1。

表1 2组临床试验患者一般临床资料比较（例）

1.2 实验方法 实验以白色念珠菌为研究对象，实验组采用复方氯己定含漱液、0.02%醋酸氯己定溶液、0.5%聚维酮碘溶液、0.1%西吡氯铵含漱液，对照组采用生理盐水，观察4种漱口液的抑菌效果。

1.2.1 菌悬液的制备 用生理盐水洗下培养24 h的新鲜菌苔，经形态学鉴定为纯培养物后，进行细菌比浊，即向样品管内定量的加入菌悬液，与标准的比浊管在比浊图片上目测、反复对比两管的清晰度，直到样品管和标准的比浊管在图片的清晰度相等，配制成工作浓度为1×108cfu/mL的菌悬液即用。

1.2.2 抑菌试验 取1 mL上述菌悬液，10 000 rpm/min离心收集，弃上清以漱口液悬浮3 min后，生理盐水洗涤2次，按照常规方法进行10倍系列稀释，依次取每个浓度的菌悬液0.1 mL涂布营养琼脂平皿，每个稀释度做3个平行样本[3]，同时设生理盐水对照组，在37℃培养24 h，试验重复3次，采用平板记数法来测定平板上的存活菌落数。

1.2.3 临床试验与评价 研究开始前，对参与研究的病区护理人员进行培训并分工。2组在使用漱口液前全面评估溃疡伤口的情况，并使用冷开水或淡盐水进行口腔清洗[4]，以提高漱口液的效果。漱口的方法，漱口液含漱时，让患者充分鼓动双腮，用舌在齿、颊、腭面搅动，反复冲击，并使头稍向后仰，使漱口液充分接触口腔各部位，如患者口腔溃疡严重，口腔疼痛张口困难时 ，可用吸管吸入漱口液。而且，要反复多次含漱，时间要达到3 min，每次含漱量约5～10 mL，分别于早、中、晚餐前后、睡前进行。用药时间平均为7 d，疼痛评价采用数字评定量表进行评估。在停药24 h后进行溃疡表面分泌物细菌、真菌培养。

1.2.4 统计学方法 将收集的数据，采用SPSS 17.0进行分析。由于菌落绝对数不成正态分布，因此，采用对数转化法使之基本符合正态分布。不同处理组之间是否有差异，采用单因素方差分析，两两比较采用Games-Howell法，患者一般临床资料比较采用χ2检验；疼痛持续时间、平均愈合时间采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4种漱口液之间及与对照组的两两比较 经单因素方差分析显示，不同处理组的平均菌落计数差异有统计学意义 （F=316.863，P=0.000），采用 Games-Howell法进行两两比较，4种漱口液组分别与对照组比较,差异均具有统计学意义（P＜0.05）；其中复方氯己定含漱液组与0.5%聚维酮碘溶液组之间差异无统计学意义（P＞0.05），但是此2种漱口液作用后的菌落计数明显低于0.02%醋酸氯己定溶液组和0.1%西吡氯铵含漱液组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表 2。

表2 4种漱口液作用3 min后平均菌落计数的比较

2.2 4种漱口液作用后活菌数量的变化 实验组中0.5%聚维酮碘溶液与复方氯己定含漱液作用后的活菌数量明显少于0.02%醋酸氯己定溶液和0.1%西吡氯铵含漱液，而对照组生理盐水作用后的活菌数量布满整个平皿，见图1。

图1 4种漱口液作用后活菌数量的变化

2.3 2组患者口腔溃疡疼痛持续时间与平均愈合时间的比较 临床试验表明，0.5%聚维酮碘溶液组患者在疼痛持续时间、平均愈合时间方面与复方氯己定含漱液组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 2组患者口腔溃疡疼痛持续时间与平均愈合时间的比较（±S，d）

表3 2组患者口腔溃疡疼痛持续时间与平均愈合时间的比较（±S，d）

组别 n 疼痛持续时间 愈合时间复方氯己定含漱液组 30 5.27±1.47 6.15±0.64 0.5%聚维酮碘溶液组 30 3.58±0.96 4.57±1.28 t 8.065 8.64 P 0.018 0.009

2.4 治疗后口腔溃疡表面真菌培养结果 停药24 h后口腔溃疡表面分泌物真菌培养结果表明0.5%聚维酮碘溶液组患者白色念珠菌阳性的构成比少于复方氯己定含漱液组，然而，差异无统计学意义（P＞0.05），见表 4。

表4 2组患者治疗7 d后口腔溃疡表面真菌培养结果

3 讨论

3.1 实验设计及实验菌种的选择 本研究按照随机、对照、重复的实验设计原则和要求，进行研究设计和实施。这样可以最大限度地减少非处理因素的影响，减少实验误差，使实验的结果具有科学的说服力。实验组与对照组同步进行试验，实验重复3次，可比性、重复性、科学性良好。实验菌种的选择，同种细菌对不同的漱口液有着不同的耐受性,故试验所选择的菌种应是有代表性的标准菌株,或者是有实际意义的菌株。目前，国内外实验对于口腔疾病或口腔黏膜感染所选择的菌株，大多为混合菌液或是抵抗力不强的细菌，如放线菌、变形链球菌、金色葡萄球菌等。2010年6月—2012年6月，通过对我院194例放疗或化疗的恶性肿瘤患者，送检的1 109份咽拭子标本，进行统计分析，得出口腔白色念珠菌感染居于恶性肿瘤患者口腔感染的第1位，与文献报道一致[2]。因此，本研究所选用的细菌为白色念珠菌，也是院内感染最常见的细菌，具有一定的代表性。

3.2 含漱液对白色念珠菌的抑菌效果 基础实验研究结果显示，实验组中的复方氯己定含漱液和0.5%聚维酮碘溶液（艾力克，口腔型）的抑菌效果最明显，优于其他2种漱口液。多项国内外研究结果表明采用氯己定进行口腔护理具有较好的抑菌作用[5]。0.5%聚维酮碘溶液(PVP-I)是聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和碘形成的络合物，具有很强的氧化作用，在接触黏膜时能逐渐分解，氧化细菌原聚蛋白中的活性基因，并与蛋白的氨基结合使其变性，从而达到杀菌目的[6]。Driguez-Caballero等认为口腔局部应用聚维酮碘是预防或治疗癌症放化疗患者口腔黏膜炎临床常用的方法[7]。

3.3 含漱液在口腔中的临床疗效 在放疗或化疗合并口腔感染的防治领域，我国尚缺乏将科研结论与临床经验相结合所获取的最佳证据，缺乏将最佳证据，科学地应用于临床。本研究就是将基础实验的科研结论与临床实践相结合，通过基础实验选用抑菌效果最明显的漱口液，用于放疗或化疗合并口腔白色念珠菌感染的60例肿瘤患者，结果显示，0.5%聚维酮碘溶液组患者在疼痛持续时间、平均愈合时间方面优于复方氯己定含漱液组的患者。虽然，复方氯己定含漱液能够抑制口腔内细菌的黏附和生长，并能杀灭多种致病菌，但因其有刺激性气味，吸收缓慢,易引起恶心呕吐,患者治疗依从性差[8]。停药24 h后口腔溃疡表面分泌物真菌培养结果表明，0.5%聚维酮碘溶液组患者白色念珠菌阳性的构成比明显少于复方氯己定含漱液组，从构成比来看有临床意义。然而，差异无统计学意义，这可能的原因是本研究因样本量较少，检出效能降低；在临床中，不可控制的因素较多。Madan等[9]通过临床试验证实，在减少口腔黏膜溃疡的严重性及推迟它的发生方面，聚维酮碘明显优0.12%氯己定。

综上所述，结合基础实验与临床试验的数据说明，复方氯己定含漱液与0.5%聚维酮碘溶液对白色念珠菌的抑菌效果最明显。0.5%聚维酮碘溶液组患者在疼痛持续时间、平均愈合时间方面优于复方氯己定含漱液组的患者。因此，根据本研究结果提示护理人员，对于放疗或化疗合并有口腔白色念珠菌感染的肿瘤患者，在口腔护理时，要有针对性地选择漱口液，以达到更有效的口腔护理，提高口腔护理质量。

[1]Segal B H,Almyroudisb N G,Battiwalla M,et al.Prevention and Early Treatment of Invasive Fungal Infection Inpaitients with Cancer and Neutropenia and in Stem Cell Transplant Recipients in the Ear of Newer Broad-Spectrum Antifungal Agents and Diagnostic Adjuncts[J].Clin Infect Dis,2007,44(3):402-409.

[2]Henry K W,Cruz M C,Katiyar S K,et al.Antagonism of Azole Activity Against Candida Albicans Following Induction of Multidrug Resistance Genes by Selected Antimicrobial Agents[J].Antimicrob Agents Chemother,1999,43:1968.

[3]徐丽丽,王国权,何 君,等.4种漱口液对铜绿假单胞菌抑制效果的实验研究[J].护理学报,2012,19(4A):10-12.

[4]王君芬,王信娟,黄盼盼,等.白血病患者咀嚼无糖口香糖预防口腔炎的效果观察[J].护理学报,2013,20(7A):22-23.

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[9]Madan P D,Sequeira P S,Shenoy K,et al.The Effect of Three Mouthwashes on Radiation-Induced Oral Mucositis in Patients with Head and Neck Malignancies:A Randomized Control Trial[J].J Cancer Res Ther,2008,4(1):3-8.

Clinical Observation on Bacteriostatic Effect of Four Kinds of Gargles on Candida Albicans

XU Li-li1,WANG Guo-quan2,GE Yong-qin1,LI Xue-fen1,LIU Min1,LV Ya1,HE Jun3
(1.Wuxi Women and Children’s Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Wuxi 214000,China;2.No.307 Hospital of PLA,Beijing 100071,China;3.National Key Laboratory of Pathogenic Microorganisms Safety,Academe of Military Medical Sciences,Beijing 100071,China)

ObjectiveTo investigate the bacteriostatic effect of four kinds of gargles on Candida albicans,and to observe clinical efficacy of gargles on cancer patients with oral Candida albicans infection undergoing chemoradiotherapy.MethodsFour kinds of gargles including compound chlorhexidine mouthwash,0.02%chlorhexidine acetate solution,0.5%povidone-iodine solution,and 0.1%cetylpyridinium chloride were applied in experiment group while physiological saline was applied in control group then the antibacterial effect of four gargles was observed.The antibacterial gargles with obvious effect were applied among two groups involving 60 cases of cancer patients with oral Candida albicans infection undergoing chemoradiotherapy.ResultsGood antibacterial effect was found in compound chlorhexidine mouthwash and 0.5%povidone-iodine solution when compared with that of 0.02%chlorhexidine acetate solution and 0.1%cetylpyridinium chloride and the difference was statistically significant(P＜0.05),but no statistical significance was found in the effect comparison between compound chlorhexidine mouthwash and 0.5%povidone-iodine solution (P＞0.05).Clinically,0.5%povidone-iodine solution group presented good effect in terms of duration of pain and average healing time when compared with compound chlorhexidine mouthwash, which indicated statistical significance (P＜0.05).ConclusionCompound chlorhexidine mouthwash and 0.5%povidone-iodine solution have good antibacterial effect while in terms of duration of pain and the average healing time,0.5%povidone-iodine solution performs even better.

mouthwash;candida albicans;bacteriostatic effect;clinical efficacy

R473.78；R97

A

10.16460/j.issn1008-9969.2015.17.006

2015-03-01

无锡市医管中心护理科研基金（YGZXH1306）

徐丽丽（1981-），女，安徽阜阳人，主管护师，硕士。

葛永勤（1968-），女，江苏无锡人，本科学历，副主任护师，E-mail：gyq4099@163.com。

陈伶俐]