牡丹皮药材规格等级初探

牡丹皮药材规格等级初探

张雨凤1， 王军2,3，方成武1,2,3，李静3,4，吴计划4,5

(1. 安徽中医药大学药学院，安徽 合肥230031；2. 亳州职业技术学院药学院，

安徽 亳州236800；3安徽省中医药科学院亳州中医药研究所，安徽 亳州236800；

4.亳州食品药品检验所，安徽 亳州236800；5.北京同仁堂安徽中药材有限公司，安徽 铜陵244000)

[摘要]目的探索牡丹皮中主要活性成分的积累量与根的粗细、根的组织结构之间的相关性，为评价牡丹皮质量及牡丹皮药材规格等级的划分提供科学依据。方法采集安徽省亳州栽培5年生凤丹根系，将根系中的根依据粗细、长度及部位分别进行划分。同时收集市场常见不同规格的牡丹皮商品。采用高效液相色谱法同时测定各样品中芍药苷和丹皮酚含量。结果在不同等级中，四等牡丹皮中芍药苷含量最高，一等牡丹皮中丹皮酚含量最高；芍药苷含量在主根中最少，在支根中最多；市场上连丹比刮丹中芍药苷含量高，刮丹比连丹中丹皮酚含量高。结论细的牡丹皮中芍药苷含量反而高，由此推测芍药苷在周皮中积累量较多。由于芍药苷和丹皮酚积累量的趋势相反，因此牡丹皮质量标准有待进一步研究。

[关键词]牡丹皮；凤丹根系；规格等级；芍药苷；丹皮酚

[中图分类号]R282[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.05.023

基金项目：国家“十二五”科技支撑计划(2011BAI04B05)；安徽省教育厅自然科学研究重点项目(KJ2015A388)；亳州市创新创业领军人才科研团队项目(亳组(2014)21)

作者简介：张雨凤(1991-)，女，硕士

收稿日期：(2015-04-10；编辑：张倩)

凤丹皮为芍药科多年生落叶小灌木凤丹(PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang)的干燥根皮[1]，始载于《神农本草经》，为历代常用中药之一，具有清热凉血、活血化瘀的功效。牡丹皮主产于安徽铜陵、南陵、亳州，山东菏泽，河南等地，其中安徽铜陵的凤丹皮为传统道地药材，而安徽亳州栽培面积近20万亩，所产凤丹皮在目前市场上流通量最大[2]。

2015版《中华人民共和国药典》仅将丹皮酚作为指标性成分用来控制牡丹皮质量[3]。牡丹皮中主要活性成分包括丹皮酚和芍药苷类[4]，芍药苷类是牡丹皮的一大类成分，具有多种生物活性，对心血管、中枢神经系统以及平滑肌等方面均有确定的药效[5-6]。目前，文献多以丹皮酚和芍药苷为指标研究牡丹皮及其相关制剂的质量[7-9]。

传统经验鉴别根类药材多以根条粗长者为佳，牡丹皮以根条粗长、皮厚、粉性足、香气浓、结晶状物多者为佳。《七十六种药材商品规格标准》[10]将牡丹皮主流商品按长度和粗度分为一等、二等 、三等、四等共4个等级，目前市场上的牡丹皮虽未严格按此标准划分等级，但根条粗长的牡丹皮价格相对较高。关于牡丹皮质量的研究，目前主要集中于不同产地、不同年限、不同炮制方法的牡丹皮中活性成分的含量比较及根的不同部位中活性成分的含量比较等方面[11-15]。尚未见系统性的牡丹皮规格等级与活性成分积累量之间相关性的研究。

通信作者：方成武，cwfang1961@sina.com

本研究采集安徽亳州栽培的5年生凤丹根系，以芍药苷和丹皮酚为指标，测定同一根系中不同规格等级的根以及同一根系中不同部位(主根、侧根、支根)根中两种成分的含量。同时，本研究还收集市场常见的不同规格的牡丹皮药材商品，通过测定其中芍药苷和丹皮酚的含量，探索牡丹皮中主要活性成分的积累与根的粗细、根的组织结构之间的相关性，以期为科学评价牡丹皮质量及牡丹皮药材规格等级的划分提供科学依据。

1　仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪：Agilent公司；AUW220D电子天平：日本SHIMADZU公司；超声波清洗仪：上海科导超声仪器有限公司；高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；一级色谱甲醇：天津市四友科技有限公司；分析甲醇：天津基准化学试剂有限公司；水为娃哈哈纯净水；丹皮酚和芍药苷均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为110708-200506、110736-201438。

2　样品制备

牡丹皮根系鲜品2014年10月采于安徽省亳州市十八里镇，经安徽中医药大学方成武教授鉴定为芍药科凤丹(PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang)根系。将根系堆置发汗，抖净泥土。取3株完整的根系，将每株根系中所有的根分别剥取根皮、除去木心后晒干，测量这些根的长度和中部粗度，然后分别将每株根系中的根划分为一等、二等、三等和四等4个等级(见表1)。另取3株完整的根系，分别将3株根系中的主根、侧根和支根分开(见表2)，剥取根皮、除去木心后晒干。将以上样品打粉过60目筛备用。

牡丹皮药材和饮片(见表3)购于安徽省亳州市药材市场，经安徽中医药大学方成武教授鉴定为芍药科凤丹(PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang).的干燥根皮。将样品打粉过60目筛备用。

3　方法与结果

3.1对照品溶液的制备精密称取芍药苷2.13 mg，置5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得芍药苷对照品溶液。精密称取丹皮酚6.58 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得丹皮酚对照品溶液。取以上两种成分的对照品溶液各1 mL，混合均匀，得混合对照品溶液，其中芍药苷和丹皮酚浓度分别为0.213、0.132 mg/mL。对照品溶液进样前用0.45 μm的微孔滤膜过滤。

3.2供试品溶液的制备精密称取牡丹皮粉末0.5 g，加甲醇50 mL，称质量，超声提取30 min，放冷，用甲醇补足质量，取续滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得供试品溶液。

3.3色谱条件Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相甲醇-水梯度洗脱：0～10 min，34%甲醇；10～12 min，34%～50%甲醇；12～32 min，50%甲醇；流速1.0 mL/min；柱温30 ℃；检测波长：0～20 min，230 nm；20～32 min，274 nm。混合对照品溶液及供试品溶液的高效液相色谱图见图1，两种物质与其他物质的分离度均大于1.5。

图1对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的高效液相色谱图(1.芍药苷；2.丹皮酚)

3.4线性关系考察精密吸取上述混合对照品溶液1.0、5.0、10.0、20.0、30.0 μL，分别注入液相色谱仪，测得峰面积积分值。分别以进样量(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标，绘制标准曲线，得芍药苷回归方程：y=1 333.1x-12.198，r=0.999 8；丹皮酚回归方程：y=3 836.8x+34.515，r=1.000。结果表明，芍药苷在0.213～6.390 μg，丹皮酚在0.132～3.948 μg时均与峰面积呈现良好的线性关系。

3.5精密度试验精密吸取同一供试品溶液10 μL，连续进样6次，测定芍药苷和丹皮酚的峰面积，并计算峰面积的RSD值，芍药苷和丹皮酚的RSD值分别为1.61%、0.66%，表明仪器精密度良好。

3.6稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、5、10、15、20 h检测。结果芍药苷和丹皮酚的峰面积RSD值分别为1.28%和1.08%，说明供试品溶液在20 h内稳定。

3.7重复性试验取同一牡丹皮样品粉末5份，按照样品溶液制备方法制备，并按照上述色谱条件进样，测定芍药苷和丹皮酚的含量，结果芍药苷和丹皮酚峰面积的RSD值分别为1.70%和1.86%，说明重复性良好。

3.8加样回收率试验平行称取已知含量的牡丹皮粉末0.25 g，共5份，每份分别加入芍药苷4.01、4.08、3.97、4.10、4.13 mg，丹皮酚4.00、3.98、4.03、3.91、4.12 mg，按“3.2”项下方法制备样品溶液，进样测定。芍药苷和丹皮酚的加样回收率分别为102.02%、98.30%，加样回收率的RSD值分别为1.61%、2.10%。

3.9样品测定按“3.2”项下样品溶液的制备方法操作，分别制成样品溶液。准确吸取样品溶液10 μL，按照“3.3”项下色谱条件进样，计算各样品中芍药苷和丹皮酚的含量。样品测定结果显示，芍药苷的含量在同一根系的一等品中含量最低，四等品中含量最高；而丹皮酚的含量在一等品中最高，四等品中最低。见表1。芍药苷的含量在主根中较少，在支根中较多；而丹皮酚的含量在主根中略高于支根。见表2。连丹比刮丹中的芍药苷含量高，刮丹比连丹中的丹皮酚含量高。见表3。

4　讨论

本研究选择相同年限(5年生)的凤丹根系，参照《七十六种药材商品规格标准》中牡丹皮的等级分类标准，将每一根系中的根分为4个等级；同时将根系中的根分为主根、侧根和支根，分别测定其中芍药苷和丹皮酚的含量。从结果中可以看出，随着等级的降低，芍药苷含量呈逐渐上升趋势，而丹皮酚含量却有逐渐降低的趋势。从同一牡丹根系中不同部位的芍药苷和丹皮酚含量结果可以看出，芍药苷在主根中含量较少，在支根中含量较多；而主根中的丹皮酚含量略高于支根。

表1　凤丹根系中不同等级牡丹皮中

表2　凤丹根系中不同部位牡丹皮中

表3　市场上主要商品规格牡丹皮中

注：选货，是指经过挑选的，大小、长短或质量相近的药材；统货，指没经过挑选的，大小、长短及质量不同的药材；刮丹是指刮去外皮的牡丹皮药材；连丹是指不刮去外皮的牡丹皮药材。

通过对药材市场的牡丹皮进行调查发现，牡丹皮商品规格主要有选货、统货、刮丹、连丹4种。选货一般个头较大，大小相近。统货个头有大有小，大小不一。从含量测定结果可以看出，连丹比刮丹中的芍药苷含量高，刮丹比连丹中的丹皮酚含量高，由此认为芍药苷在周皮中的积累量较多，这与已有研究结果一致[16]。而丹皮酚在韧皮部中的积累量较多。

2010版《中华人民共和国药典》中以丹皮酚作为牡丹皮的指标性成分，如果仅从丹皮酚的角度考虑，越粗的牡丹皮中丹皮酚含量越高，质量也就越好，这与当前牡丹皮经验鉴别一致。然而，芍药苷同为牡丹皮中主要活性成分，但随着粗度的增加，芍药苷含量反而下降。由于芍药苷和丹皮酚积累量的趋势相反，因此牡丹皮质量标准有待进一步研究。只有芍药苷和丹皮酚含量都相对较高，才是最佳品质的牡丹皮。

参考文献：

[1]谢宗万.中药材正名词典[M].北京:北京科学技术出版社,2012：412.

[2]刘信秋,方成武,张伟,等.亳州谯城区栽培牡丹现状调查[J].现代中药研究与实践,2013,27(6):19-21.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京:中国医药科技出版社,2015:172.

[4]张艳,范俊安.中药材牡丹皮研究概况Ⅲ：丹皮化学成分研究概况[J].重庆中草药研究,2008,58(2):24-31.

[5]郑世存,李晓宇,欧阳兵,等.芍药苷药理作用研究新进展[J].中国药物警戒,2012,9(2):100-103.

[6]龙世林,陈雅.牡丹皮药理作用及临床研究进展[J].中国药业,2007，16(3):63-64.

[7]龙全江,王晓阁,周宙,等.趁鲜切制法对牡丹皮饮片中丹皮酚含量的影响研究[J].中药材,2012,35(6):883-886.

[8]胡世林,刘岱,杨立新,等.不同产地白芍中芍药甙和丹皮酚的含量测定及比较[J].中国中药杂志,1994,19(6):328-330.

[9]曾伟贤.清热凉血方中芍药苷、丹皮酚的含量测定[D].北京：北京中医药大学,2014:1-2.

[10]国家中医药管理局,中华人民共和国卫生部.七十六种药材商品规格标准[M].北京：国家中医药管理局，1984:16.

[11]阳勇,彭福,莫宗成,等.HPLC测定不同产地牡丹皮5个化学成分的含量[J].中药材,2013,36(3):416-422.

[12]范旭航,马天成,沈旭,等.UPLC法测定不同产地不同部位牡丹皮中6种活性成分[J].中成药,2012,34(2):317-320.

[13]方成武,刘晓龙,周安,等.安徽南陵凤丹皮最佳采收期的考察[J].现代中药研究与实践,2006,20(5):21-24.

[14]胡煜雯,巢建国,谷巍,等.不同生长年限及采收期牡丹皮中药效成分HPCE分析[J].南京中医药大学学报,2013,29(1):63-65.

[15]丘志春,孙冬梅,张诚光.不同炮制方法对牡丹皮中丹皮酚及芍药苷含量的影响[J].医学研究杂志,2009,38(4):131-133.

[16]周刚,吕庆红.牡丹皮不同部位有效成分含量测定及指纹图谱化学成分研究[J].中国中药杂志,2008,33(18):2070-2073.