血清脂联素、TNF-α、CRP联合检测在脓毒症患者中的临床应用价值

樊兵胥顺

·论著·

血清脂联素、TNF-α、CRP联合检测在脓毒症患者中的临床应用价值

樊兵1★胥顺2

目的探讨血清脂联素、肿瘤细胞坏死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）联合检测在脓毒症患者中的临床应用价值。方法选取2013年6月至2014年6月重庆市九龙坡区第五人民医院重症监护病房（intensive care unit，ICU）收治的40例脓毒症病例为观察组，另选随机抽取40例同期在本院行身体检查的正常体检者为对照组，应用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）测定两组血清脂联素、TNF-α水平，应用免疫比浊法测定两组CRP水平。结果观察组血清TNF-α、CRP水平均高于对照组（P＜0.05），而血清脂联素水平低于对照组（P＜0.05）。随着急诊脓毒症死亡风险（mortality in emergency department sepsis，MEDS）增加，患者血清TNF-α、CRP水平升高，而血清脂联素水平下降（P＜0.05）。结论联合检测血清TNF-α、CRP、脂联素能更加准确的预测脓毒症患者病情进展，具有一定的临床应用价值。

血清脂联素；肿瘤细胞坏死因子α；C反应蛋白；脓毒症

脓毒症［1］即感染（可能或已有的）感染引起的全身炎症反应，可导致器官功能障碍或组织灌注不足。脓毒症是重症监护病房（intensive care unit，ICU）病房中常见的危急重症，患者治疗不及时则可导致多器官功能衰竭而死亡［2－3］。其高发病率常导致ICU过度拥挤，危重患者停留时间延长，明显加大了医院负担及患者死亡风险。相关研究指出，脓毒症的发生与机体感染后产生大量炎症因子并作用于靶器官导致机体多器官功能衰竭有关［4－5］。炎症因子的被激活及大量释放是引起脓毒症的重要因素，通过控制及抑制炎症因子水平的释放将有助于脓毒症病情的改善［6－7］。脂联素是一种新近发现由脂肪细胞分泌的特异性蛋白，具有抗炎症的作用，介导促炎反应的作用［7－8］，其浓度水平与炎症因子分泌水平呈负相关。通过测定血清中脂联素水平可有效预测危重病患者病情进展情况，有助于尽早对患者病情作出准确的诊断。C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质［9－10］，当CRP水平增加时则预示着机体出现急性炎症反应［11］。肿瘤细胞坏死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）是由巨噬细胞分泌的炎症因子，正常水平的TNF-α可以调节免疫应答、抗感染、促进组织修复、引起肿瘤细胞凋亡等，但大量产生和释放则会破坏机体的免疫平衡，与其它炎症因子一起产生多种病理损伤［12］，其水平升高则预测着患者体内出现炎症［13］。酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法操作简单安全、灵敏度较高、特异性较好，可检测人血清APN及TNF-α含量。CRP的检测方法众多，本实验采用灵敏度和精确度较高且成本较低的比浊法。

本研究将通过联合检测脓毒症患者血清脂联素、TNF-α、CRP水平，并探讨这些指标对预测脓毒症患者病情进展的临床价值。

1 资料及方法

1.1 临床资料

自2013年6月至2014年6月连续收集重庆市九龙坡区第五人民医院ICU收治的40例严重脓毒症病例为研究对象（观察组）。纳入标准：（1）病例均符合美国危重病学会（Society of Critical Care Medicine，SCCM）对严重脓毒症的诊断标准；（2）病例均签署知情同意书；（3）均获得本院伦理委员会批准。同时排除肝肾功能不全、恶性肿瘤、严重心血管疾病、自身免疫性疾病及近期接受糖皮质激素治疗的患者。其中男性24例，女性16例，年龄22岁～78岁，平均年龄（48.96±3.45）岁；肺部感染12例，腹腔感染10例，泌尿感染5例，其他部分感染3例。另选随机抽取40例同期在本院行身体检查的正常体检者为对照组，男22例，女18例，年龄20岁～67岁，平均年龄（49.36±3.12）岁。两组性别、年龄无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 资料收集

记录观察组及对照组性别、年龄、入院时间、临床症状、生化指标、血常规、生命体征等情况，并记录患者感染部位及主诉症状。急诊脓毒症死亡风险（mortality in emergency department sepsis，MEDS）评分是2003年Shapiro等［14］通过前瞻性研究筛选出与病死率相关的9个独立危险因素而组成的一套评分系统，根据此系统进行评分（表1），其中MEDS≤4分：极低危；MEDS 5～7分：低危型；MEDS 8～12分：中危型；MEDS 13～15分：高危型；MEDS＞15分：极高危型。

1.2.2 血清TNF-α、CRP、脂联素测定

观察组入院后于次日清晨空腹抽取静脉血5 m L，体检者于体检当天空腹抽取静脉血5m L。以3 000 r／m in离心处理5min后，留取上清，并置于-20℃保存备用。应用ELISA测定2组样本血清脂联素、TNF-α水平。血清脂联素试剂盒由上海西唐生物技术公司提供，TNF-α试剂盒由北京紫金生物技术公司提供。CRP水平采用免疫比浊法测定，测试过程严格按照试剂盒及仪器说明书进行操作。ELISA法简要操作流程如下：标准品、待测样本及一抗加入反应孔内；37℃温育1 h；洗涤并用吸水纸拍干，重复此操作3次；加入80μL的辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（horseradish peroxidase conjugated streptavidin，HRP-Streptavidin），37℃温育30m in；洗涤并用吸水纸拍干，重复此操作3次；加入底物A、B各50μL，37℃温育10m in，避免光照；迅速加入50μL终止液，立即测定结果；在450 nm波长处测定各孔的光密度（optical density，OD）值。CRP的测定为两点终点法，试剂1＋样本在37℃保温2min～5m in，加入试剂2，分别于保温10 s和300 s后记录吸光度（absorbance，A）。

表1 MEDS评分标准Table 1 Mortality in emergency department sepsis（MEDS）score

1.3 统计学分析

采用SPSS17.0进行统计学分析。计量资料采用均数±标准差（±s）表示。组间计量资料比较采用t检验，不同MEDS评分患者血清脂联素、TNF-α、CRP水平分析应用方差分析，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组血清脂联素、TNF-α、CRP水平对比

观察组血清TNF-α、CRP水平均高于对照组（P＜0.05），而血清脂联素水平低于对照组（P＜0.05），结果详见表2。

表2 观察组与对照组血清脂联素、TNF-α、CRP水平对比（±s）Table 2 Comparison of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group and control group（±s）

表2 观察组与对照组血清脂联素、TNF-α、CRP水平对比（±s）Table 2 Comparison of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group and control group（±s）

组别观察组对照组例数40 40 t值P值血清脂联素（mg／L）4.25±1.35 8.86±2.45 5.978 0.000 TNF-α（ng／L）62.14±10.28 20.36±5.47 6.712 0.000 CRP（mg／L）47.12±6.78 8.02±1.32 8.125 0.000

2.2 不同MEDS评分血清脂联素、TNF-α、CRP水平分析

随着MEDS增加，患者血清TNF-α、CRP水平升高，而血清脂联素水平下降（P＜0.05），见表3。

3 讨论

本研究通过联合检测血清脂联素、TNF-α、CRP三种血清学标志物来对脓毒症患者病情进行评估鉴定。结果显示，观察组血清TNF-α、CRP水平均高于对照组（P＜0.05），而血清脂联素水平低于对照组（P＜0.05）。根据已有报道提示，脂联素可作为脓毒症治疗的调控靶标，且与血清CRP的表达呈负相关；也有研究［15］表明脂联素具有抗炎效应，采用脂联素刺激巨噬细胞能够显著抑制脂多糖诱导的TNF-α的表达，其浓度与致炎因子TNF-α水平呈反向变化，两者相互拮抗可能发挥抗炎作用［16］，说明血清脂联素水平降低可能是脓毒症发生发展的重要因素，提示脂联素在脓毒症病理生理过程中参与了炎症反应的调节［17］，这与本研究结论一致。而如果我们进行单个指标的检测，可能无法得出与脓毒症密切相关的有意义结论。同时，我们还发现，观察组中随着MEDS评分增加，患者血清TNF-α、CRP水平升高，而血清脂联素水平下降（P＜0.05），这也进一步支持了前面结论，从而提示通过测定TNF-α、CRP及脂联素水平将有助于临床对脓毒症患者病情的诊断，具有一定的临床

应用价值。

越来越多对TNF-α、CRP及血清脂联素水平进行联合检测的研究显示［7，18］，联合检测3种标志物对于脓毒症的判断是具有临床价值的，在脓毒症的病情分析、预后判断以及疗效评估中发挥了重要作用。在脓毒症患者过程中，还有其他的一些炎症因子也起着不可或缺的作用，因此，我们需要进一步对更多个指标进行联合检测来评价其临床应用价值。

表3 观察组不同MEDS评分血清脂联素、TNF-α、CRP水平分析（±s）Table 3 Analysis of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group w ith different MEDS score（±s）

表3 观察组不同MEDS评分血清脂联素、TNF-α、CRP水平分析（±s）Table 3 Analysis of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group w ith different MEDS score（±s）

a与≤MEDS 4分相比，P＜0.05；b与MEDS 5～7分相比，P＜0.05；c与MEDS 8～12分相比，P＜0.05；d与MEDS 13～15分相比，P＜0.05

MEDS评分（分）≤4 5～7 8～12 13～15＞15 F值P值例数7 8 8 1 0 7血清脂联素（mg／L）7.12±0.85 5.48±1.12a4.23±1.08ab3.10±0.98abc1.12±0.95abcd12.023 0.000 TNF-α（ng／L）23.45±3.28 35.16±5.485a46.98±6.825ab62.12±8.965abc72.86±9.635abcd9.686 0.000 CRP（mg／L）13.48±2.10 23.05±3.455a39.78±4.215ab52.63±3.785abc62.12±5.225abcd8.978 0.000

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Clinical application values of a combinational detection of serum adiponectin,TNF-α,CRP in patients w ith sepsis

FAN Bing1★,XU Shun2
(1.Clinical Laboratory of Jiulongpo District Fifth People's Hospital of Chongqing City,Chongqing,China, 401329；2.Darui Biotechnology Co.Ltd.,Guangzhou,Guangdong,China,510665)

Objective To investigate clinicalapplications value of a combinational detection of serum adiponectin,tumor necrosis factor-α(TNF-α),C-reactive protein(CRP)in patients w ith sepsis.Methods Serum sampleswere chosen as the observation group from 40 patientsw ith sepsis in intensive care unit(ICU).40 healthy persons were chosen as the control group.A ll 80 specimens were collected in Jiulongpo District Fifth People's Hospital from June 2013 to June 2014.Concentration of adiponectin and TNF-αweremeasured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).CRPweremeasured by immunoturbidimetry in both groups.Result s Both levels of TNF-α,CRP in the observation group were higher than that in the control group while the serum adiponectin was lower.The differences were statistically significant(P＜0.05).Moreover,w ith the risk of mortality in emergency department sepsis(MEDS)increased,the levels of TNF-αand CRP were elevated while adiponectin was decreased.The differences were statistically significant(P＜0.05),as well.Conclusion Themethod has certain clinical applications values.

Serum adiponectin；Tumor necrosis factor-α；C-reactive protein；Sepsis

国家高技术研究发展计划（863计划）（2012AA020205）

1.重庆市九龙坡区第五人民医院检验科，重庆401329 2.广州市达瑞生物技术股份有限公司，广东，广州510665

★通讯作者：樊兵，E-mail：767861243＠qq.com