奥美拉唑对小鼠胸腺、脾脏免疫功能的影响

齐东江，徐阿曼，2

(1.安徽医科大学第四附属医院普外科，安徽合肥 230032;2.安徽医科大学第一附属医院普外科，安徽合肥 230022)

奥美拉唑(omeprazole，OME)是一类治疗胃食管反流病、慢性胃炎、消化性溃疡等疾病的重要药物，并普遍用于根除幽门螺杆菌(helicobacter pylori，Hp)感染，其作用机制是阻断胃壁细胞分泌管上H+/K+-ATP酶的活性从而阻断刺激因素引起的胃酸分泌。近年来有研究显示长期使用OME可引起一系列的不良反应［1-3］，如:胃壁细胞增生、腺囊肿、高胃泌素血症及胃底腺息肉、胃癌等。目前对OME对溶酶体膜上Ⅴ-ATP酶是否具有抑制作用的研究较少。本研究通过长期给予小鼠OME，观察其是否会抑制小鼠溶酶体膜上的Ⅴ-ATP，从而影响小鼠的免疫功能，以期为临床合理用药提供理论依据。

1 实验动物与试剂

清洁级昆明种小鼠，雄性，30只，体质量24～26 g，购自安徽医科大学实验动物中心(动物合格证号SCXK(皖)2005-001号)。奥美拉唑由山东新时代药业有限公司提供，批号:009131003。酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)ELISA 检测试剂盒、N-乙酰-β-D-氨 基 葡 萄 糖 苷 酶 (N-acetyl-β-D-glucosaminidase，NAG)ELISA检测试剂盒购自苏州卡尔文生物科技有限公司，批号分别为 E20141031A、E20141031A;TDZ42WS低速台式离心机购自长沙湘仪离心机仪器有限公司;FA2204B电子天平购自上海精科天美科学仪器有限公司;Sunrise-Basic tecan酶标仪购自瑞士Tecan公司。

2 试验方法

2.1 动物模型建立与分组 小鼠饲养聚丙烯笼内标准条件下饲养，温度维持在24℃，自由进食饮水。30只小鼠随机分为对照组、OME低剂量组、OME高剂量组。OME低剂量、高剂量组小鼠每天给予OME灌胃，低剂量组为(6 mg·kg-1·d-1)、高剂量为(30 mg·kg-1·d-1)。每周称量体质量1次，24周后处死小鼠，收取标本，处死前小鼠禁食24 h。

2.2 小鼠脾重量指数测定 小鼠称量体质量后脱颈椎处死，取出小鼠脾脏，滤纸吸干残留血液，分析天平称重。计算脾重量指数，脾重指数=脾脏重量(mg)/体质量(g)。

2.3 小鼠胸腺重量指数测定 小鼠称量体质量后脱颈椎处死，取出小鼠胸腺，滤纸吸干残留血液，分析天平称重。计算脾重量指数，胸腺重指数=胸腺重量(mg)/体质量(g)。

2.4 小鼠血清中ACP及NAG含量测定 小鼠眼眶取血，离心后取上清，-80℃冻存备用。采用ELISA法测定血清及组织中ACP和NAG含量，实验步骤严格按照操作说明书操作，450 nm处测定吸光度值。

2.5 统计方法 采用SPSS17.0软件包进行数据分析。观测资料均为计量资料，以均数±标准差表示(±s)，均通过正态性检验。多组间比较采用one-way ANOVA，两两多重比较为LSD-t检验。以P＜0.05为显著性差异意义。

3 结果

3.1 OME对小鼠脾重量指数的影响 各组小鼠体重和脾重指数见图1。从图1可见，长期使用OME均导致小鼠脾重指数下降(F=11.848，P＜0.01)。与对照组相比，OME组小鼠脾重指数均呈现下降趋势，其中OME高剂量组与对照组相比小鼠脾重指数明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。

3.2 OME对小鼠胸腺指数的影响 各组小鼠胸腺指数见图2。图2可见，长期使用OME均可导致小鼠胸腺指数下降(F=2.804，P ＜0.01)。与对照相比，OME低剂量组小鼠脾重指数下降，但差异无统计学意义，OME高剂量组小鼠脾重指数下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。

3.3 OME对小鼠血清中ACP及NAG含量影响OME组给药24周后小鼠血清中ACP及NAG含量均减少(F=2.959，P ＜ 0.01;F=13.984，P ＜0.01)。与对照组相比，OME低剂量组ACP及NAG含量均有下降的趋势，但差异无统计学意义，OME高剂量组与对照组相比明显降低，差异有统计学意义(P ＜0.05)(见图3，4)。

4 讨论

溶酶体是一种参与细胞分解代谢的酸性细胞器(pH 4.5～5.5)，普遍存在于哺乳动物的各种细胞中，除了成熟的红细胞［4］。在细胞免疫中T细胞抗原呈递、T淋巴细胞清除病原微生物、受损的细胞及肿瘤细胞以都需要溶酶体酶的参与［5-6］。细胞自噬发挥其正常的功能同样也需要溶酶体及其蛋白酶的参与，因此它在人体防御及免疫反应中扮演重要的角色［7］。溶酶体蛋白水解酶的活性需要高酸环境来维持(pH在4.5到5.0之间)。溶酶体通过一种质子泵V-ATP酶消耗ATP将H+逆电子梯度转入溶酶体内，从而形成和维持pH梯度的稳定［8］。

ACP及NAG均是溶酶体内水解酶，而且ACP又是溶酶体的特征性酶，分析两者的含量可以直接反应溶酶体酶的含量。本实验中发现OME组小鼠血清中ACP及NAG水平均较对照组低，并呈现一种剂量依赖性。这提示小鼠体内溶酶体呈一种抑制状态，这可能是OME抑制溶酶体膜上的V-ATP酶，破坏了溶酶体内的高酸环境，抑制溶酶体内蛋白酶的活化。抑制V-ATP酶的活性同时也会损坏细胞的内吞作用和自噬，甚至是溶酶体酶功能的丧失［9］。

本研究同时显示长期使用OME组小鼠脾脏指数及胸腺指数较对照组均呈现下降趋势，其中高剂量组脾脏指数及胸腺指数下降明显。胸腺及脾脏是重要免疫器官，胸腺是T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官，能诱导胸腺细胞分化成熟为功能不同的T细胞亚群;脾脏是体内最大的免疫器官，是具有免疫活性的T细胞和B细胞依据和接受抗原刺激产生免疫应答的重要场所［10］。因此脾脏指数及胸腺指数可直接体现机体的免疫水平并可衡量药物对免疫器官的抑制作用。说明长期高剂量服用OME对小鼠的免疫存在一定的损伤。机体的免疫功能状态是影响肿瘤治疗转归的重要因素［11］，对提高肿瘤患者的生存率、改善生活质量具有重要作用，它与肿瘤的发生、发展有关系密切。因此，长期使用OME可能是通过抑制溶酶体功能从而引起系统性的免疫功能损伤，这可能也是其导致胃癌发生一个主要因素。

目前临床医师对质子泵抑制剂(proton pump inhibitors，PPIs)使用指征把握不准和大量不规范用药导致奥美拉唑使用泛滥。在澳大利亚、爱尔兰和英国使用PPIs的患者中，分别有63%、33%和67%的患者没有按照标准使用该药［12］。武航海等［13］统计所属医院2011—2012年 OME使用情况发现10 000张含OME的处方，其中1 752张为不合理处方。因此，对于需要长期使用OME的患者，建议定期完善相关检查，如胃镜等。同时本研究存在一定的不足，实验样本量较小，有待大样本实验近一步探索研究。本研究对于合理、规范化使用PPIs具有一定的临床指导意义。

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