不同浓度姜黄素抑制人肝癌细胞增殖的实验研究※

王丹丹　汲　军

不同浓度姜黄素抑制人肝癌细胞增殖的实验研究※

王丹丹汲军

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用。方法将不同浓度的姜黄素作用于人肝癌细胞株HepG2，药物作用48 h后，利用四唑盐比色法（MTT）测定吸光度值，计算细胞增殖抑制率。结果不同浓度姜黄素（10、20、30、40、50 µg/ml）的抑制率分别为0.437、0.530、0.662、0.781、0.846。与空白对照组比较，姜黄素对人肝癌细胞HepG2有明显的抑制作用。结论姜黄素可以明显抑制HepG2的生长。

姜黄素；人肝癌细胞；四甲基偶氮唑盐

肝癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，在肿瘤发病率中列第3位[1]。肝癌一旦确诊，多数属于中晚期，常用的放化疗方法虽有一定疗效，但患者常因严重的不良反应而放弃治疗，目前抗肿瘤的热点集中于寻找高效低毒的中药制剂进行治疗。姜黄素是从姜黄中提取的有效成分，具有不良反应小、价格低廉等优点，以往研究表明，其对胃癌、皮肤癌、结肠癌等均有一定抑制作用[2]。本实验主要研究姜黄素在体外对人肝癌细胞HepG2的抑制效果，探讨姜黄素的抗肿瘤活性，以期为姜黄素的体内活性及临床应用研究提供理论依据。

1　材料与方法

1.1实验材料二氧化碳培养箱：美国Forma公司；Olympus倒置显微镜：日本 Olympus公司；Bio-RAD550全自动酶标仪：美国伯乐公司；台式高速低温离心机5810R型：美国Eppendorf公司；四甲基偶氮唑盐（MTT）：美国Sigma公司；RPMI-1640培养基：美国Gibco公司；小牛血清（FBS）：杭州四季青；无水二甲基亚砜（DMSO）、分析纯：美国Sigma公司；胰酶：美国Sigma公司；姜黄素（含量＞80%）：美国Sigma公司；人肝癌细胞株HepG2：上海生物制品研究所，液氮中冻存保种。

1.2方法

1.2.1细胞培养采用加入小牛血清(FBS)并含双抗的RPMI-1640培养基培养人肝癌细胞株HepG2，置于37.5 ℃、5% CO2饱和湿度的恒温培养箱中，72 h后细胞贴壁生长，用0.25%胰酶直接吹打法将贴壁生长的细胞传代，每1～2天更换1次培养基，取对数生长期的细胞进行实验。

1.2.2分组空白对照组：以RPMI-1640培养基和细胞（含0.1% DMSO）为对照；实验组：姜黄素粉剂用少量DMSO溶解，配制浓度分别为10、20、30、40、50 µg/ml，每孔加入含 0.1% DMSO的RPMI-1640培养基、细胞和相应浓度的姜黄素。

1.2.3细胞形态学观察加药培养48 h后，将各组的肝癌细胞HepG2在倒置显微镜下放大200倍观察细胞变化并拍照。

1.2.4MTT检测药物对细胞株增殖的影响按预实验结果，将HepG2细胞株以浓度为1×104个/ml的密度接种于96孔培养板中，于37 ℃、5% CO2饱和湿度的培养箱中，培养24 h后加入不同浓度的姜黄素溶液200 μl/孔，每组设6个平行孔。作用48 h后，每孔加入5 mg/mlMTT溶液20 μl，作用4 h，弃上清，加入DMSO溶液150 μl/孔振荡10 min。采用酶标仪于490 nm波长，空白孔调零，测定吸光度，并计算细胞生长抑制率IR=（1－实验组吸光度/对照组吸光度）×100%。

2　结果

2.1细胞形态学观察空白组细胞轮廓清晰，形态伸展，成对数生长，见图 1（1-1）。实验组细胞体积缩小呈圆形，与周围的细胞脱离，生长受到抑制。不同浓度姜黄素（10、20、30、40、50 ug/ml）对细胞影响见图1（1-2～1-6）。

2.2MTT法测定姜黄素对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制率姜黄素作用48 h后，用MTT法测定光密度后，计算药物对细胞的抑制率，结果见表 1，抑制曲线见图2。结果可见，不同浓度姜黄素（10、20、30、40、50 µg/ml）的抑制率分别为43.7%、53.0%、66.2%、78.1%、84.6%。与空白对照组比较，各实验组对肝癌细胞HepG2均有明显的抑制作用。

图1　细胞形态学观察

表1　姜黄素对HepG2细胞的抑制作用

图2　姜黄素对HepG2细胞的抑制曲线

3　讨论

目前，恶性肿瘤发病率极高，肿瘤药物在抑制肿瘤细胞生长的同时，机体也会受到药物的损害，因此寻找高效低毒的中药治疗势在必行[3]。本实验主要采用细胞形态学观察与 MTT法相结合，研究了姜黄素在体外对人肝癌细胞 HepG2的抑制效果。结果表明，姜黄素体外可明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖，并且这种抑制作用有量效关系，以上实验其结果为姜黄素这种低毒的中药成分用于体内的抗肿瘤活性研究提供了科学依据，是临床药物开发的基础研究。

[1] 刘允怡.肝癌治疗新进展[J].临床外科杂志,2007,15(1):2-5.

[2] 潘国凤.姜黄素抗肿瘤作用及其机制研究最新进展[J].中药药理与临床,2007,23(5):243-244.

[3] 胡惠军,陈新来,潘勇权,等.姜黄素对肝细胞生长因子诱导的前列腺癌细胞上皮细胞间质化的逆转作用[J].现代肿瘤医学, 2013,21(7):1425-1429.

Experimental Study of Different Concentrations of Curcumin Inhibits the Proliferation of Human Hepatocellular Carcinoma Cells

Wang DandanJi Jun

ObjectiveTo investigate the inhibitory effect of curcumin on human hepatocellular carcinoma cell line HepG2.MethodsThe effects of different concentrations of curcumin in human hepatocellular carcinoma cell line HepG2,the role of drugs after 48 h,using four tetrazolium colorimetric assay(MTT)determination of absorbance, calculate the inhibition rate of cell proliferation.ResultsDifferent concentrations of curcumin(10,20,30,40,50 μg/ml) inhibition rates were 0.437,0.530,0.662,0.781,0.846.Compared with the blank control group,curcumin has obvious inhibitory effect on hepatoma cell line HepG2.ConclusionCurcumin can inhibit the growth of HepG2.

Curcumi;Human hepatocellular carcinoma cell;MTT

R735.7

A

1673-5846(2015)02-0014-02

长春医学高等专科学校，吉林长春130031

※吉林省教育厅“十二五”科研规划项目（2014610号）

王丹丹（1981-），硕士学位，主要从事肿瘤药理学研究。E-mail：358595564@qq.com