乙型肝炎表面抗原定量检测技术与乙型肝炎病毒DNA相关性研究进展

柯柳华(综述)，马兴璇,覃彦平(审校)

(1.柳州市中医院检验科,广西 柳州 545001； 2.柳州市红十字会医院检验科，广西 柳州 545001)



乙型肝炎表面抗原定量检测技术与乙型肝炎病毒DNA相关性研究进展

柯柳华1(综述)，马兴璇1,覃彦平2※(审校)

(1.柳州市中医院检验科,广西 柳州 545001； 2.柳州市红十字会医院检验科，广西 柳州 545001)

摘要：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒(HBV)感染的标志，HBsAg定量能监控和预测患者抗病毒治疗的疗效。 HBV DNA是检测HBV有无复制及传染性最直接、特异性强和灵敏性高的指标。临床往往通过监测HBsAg和(或)HBV DNA定量水平，评估抗病毒疗效，指导、调整治疗方案。目前有关HBsAg与HBV DNA的相关性报道较多，该研究重点阐明在不同因素影响下HBsAg与HBV DNA的变化情况及关联性。

关键词：慢性乙型肝炎；乙型肝炎表面抗原定量；乙型肝炎病毒 DNA

定量检测乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)是目前监控和预测抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)治疗的一种新工具，能更准确地预测患者抗病毒治疗的短期和长期疗效。血清HBV DNA可直接反映HBV复制活动和传染性，在监测和评估急性和慢性乙型肝炎抗病毒疗效及预后具有重要意义。但由于HBV DNA检测受到试剂价格、实验室要求等的限制,存在须经过专门的培训人员才能操作、检测方法缺乏统一性和标准化、各种试剂有不同的线性范围、不易普及等不足之处。相对而言，定量检测HBsAg则具有操作简便、快捷、试剂成本低、检测价格及对实验场地的要求相对不高、较易开展的优势。因此，定量检测HBsAg 替代HBV DNA检测的研究，近年来已成为一个热点。现对HBsAg定量和血清HBV DNA之间的关联性进行综述。

1关于HBsAg

1965年澳大利亚科学家Blumberg首次报道澳大利亚抗原,后来研究表明澳大利亚抗原即是HBV表面的膜蛋白颗粒，因此将澳大利亚抗原改称为HBsAg[1]。HBsAg是病毒的外膜结构蛋白多肽，人体感染HBV后4～7周就能从血清内检测到HBsAg，虽然HBsAg本身没有传染性，但它是HBV感染后最早出现的病毒抗原，与HBV复制模板——共价闭合环状DNA水平有一定的相关性，故具有非常重要的临床意义。

在临床上，乙型肝炎患者最接近治愈的状态是HBsAg转阴或血清转换，这是因为HBsAg转阴或血清转换是宿主免疫控制的实现标志，代表了患者的HBV复制得到持续控制，肝组织炎症显著减轻，疾病进展缓慢，肝癌和肝硬化的发生率显著降低。

因此，HBsAg的检测在HBV感染诊断方面和抗病毒治疗的疗效监测方面都有重要意义。

2定量HBsAg检测技术与发展

HBV感染的主要标志物是血清HBsAg，因此血清HBsAg广泛应用于乙型肝炎初筛和诊断。目前常用血清HBV检测方法有定性及定量两种方法。定性法有酶联免疫吸附法。定量法根据检测原理分为两种，其中应用荧光免疫测定技术的方法为时间分辨免疫荧光法、微粒子酶测定法等；应用化学发光测定技术的方法有化学发光微粒子免疫分析法和电化学发光免疫分析法等。

定量检测法各有特点和应用优势。时间分辨免疫荧光法是以镧系元素铕(Eu)等作为荧光标志物，具有敏感性高、线性范围广、精密度好等优点；是目前临床治疗药物检测最常采用的方法之一[2]。化学发光微粒子免疫分析法是以吖啶酯作为标记发光剂，具有特异性强、敏感性高、重复性好、无放射性危害等优点[3]。电化学发光免疫分析法是一种电化学电极表面的特定的化学发光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌标记，根据电极发出光的强度对HBsAg定量检测，其检测范围很广泛，检测灵敏度达pg水平[2]。

3定量检测HBsAg的临床意义

欧洲肝脏研究学会提出，慢性乙型肝炎理想的治疗终点是:无论是乙型肝炎e抗原(hepatitis B e-antigen,HBeAg)阳性还是HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者，经过有效的抗病毒治疗，持续HBsAg转阴或血清学转换，不论哪种抗病毒治疗的代偿性肝病患者达到此终点即可停止治疗[4]，可见定量检测HBsAg主要用于慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗疗效、决定疗程及预测血清学转换。Kohmoto等[5]对20例慢性乙型肝炎患者进行拉米夫定治疗前、后血清比较，发现抗病毒药物治疗期间，除了可使用HBV DNA水平监测血清HBV外，血清HBsAg 浓度的监测也可评估拉米夫定的治疗，并有助于早期发现耐药菌株。卢建溪等[6]在慢性乙型肝炎HBsAg水平与HBV DNA病毒复制的相关性分析中，证实在以干扰素为基础的慢性乙型肝炎治疗期间，HBsAg定量水平与HBV DNA显著相关，动态监测HBsAg水平对治疗有一定的指导意义。Kittner等[7]研究了接受聚乙二醇干扰素治疗的慢性乙型肝炎患者，发现HBeAg阳性患者在治疗过程中，HBsAg水平持续下降，24周时HBsAg血清转换。Wang等[8]对242例慢性乙型肝炎患者进行了抗原抗体的治疗性疫苗和安慰剂的Ⅱb期临床试验，结果表明HBeAg血清转换患者与HBeAg非转换、使用安慰剂组患者相比，HBsAg、HBV DNA和丙氨酸转氨酶水平持续减少。分析表明，HBeAg的血清转换是接种疫苗治疗的理想终点。另外，HBsAg定量检测还可预测新生儿是否发生免疫失败。邓新清等[9]分析了178例新生儿，其母亲均为HBsAg和HBeAg阳性，研究发现孕妇血清高滴度HBsAg与其新生儿疫苗接种免疫失败有关。

4HBsAg与HBV DNA定量关系

4.1HBsAg与HBV DNA的相关性对于HBsAg水平与HBV DNA定量的相关性，国内外学者报道不尽一致。任伟宏等[10]对HBsAg阳性的135例患者采用化学发光法定量检测其血清中HBsAg、HBeAg，同时采用实时荧光定量聚合酶链反应检测其血清中HBV DNA。发现HBsAg和HBeAg浓度值与HBV DNA载量的相关系数(r)分别为0.583(P<0.01)、0.550(P<0.01),证实血清HBsAg浓度与HBV DNA载量及HBeAg浓度均呈高度正相关。陆向东等[11]研究了892例未经抗病毒治疗的HBsAg阳性孕妇,使用雅培Architect i2000分析仪检测其血清HBsAg和HBeAg，并用雅培全自动实时荧光定量系统m2000定量检测HBV DNA水平。检测表明不同载量HBV DNA组,HBsAg差异有统计学意义(P<0.01)，随HBV DNA水平增加而增加,呈正相关(r=0.53，P<0.01)，证实在未经抗病毒治疗的HBsAg阳性孕妇中HBV DNA载量与HBsAg、HBeAg滴度均呈正相关,HBsAg可以较好地反映HBV复制水平。Ozaras等[12]探讨了18例治疗过程中的慢性乙型肝炎患者HBsAg定量值和HBV DNA水平的相关性，患者经过聚乙二醇干扰素±拉米夫定52个月的治疗，在0、4、8、24、48、52和76周分别采集血清。采用荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA，化学发光微粒子免疫法检测HBsAg定量值，两者表现出显著相关性(r=0.85)。

另有研究却显示相反的结果。刘琼等[13]将316例慢性HBV感染者进入研究，其中慢性乙型肝炎119例,肝硬化99例，慢加急性肝衰竭(acute on chronic liver failure,ACLF)98例，HBsAg定量采用罗氏电化学发光法，HBV DNA定量采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测，结果表明慢性乙型肝炎、肝硬化和ACLF组患者组间HBsAg和HBV DNA的总体水平差异无统计学意义。Ganji等[14]对伊朗97例慢性乙型肝炎患者HBsAg与HBV DNA水平进行相关性分析，HBV DNA采用实时聚合酶链反应检测，血清HBsAg采用罗氏电化学发光法检测，结果显示HBsAg和HBV DNA水平之间无显著相关性(r=0.606和r=0.53)。李明慧等[15]探讨α干扰素治疗期，228例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清HBsAg，HBeAg和HBV DNA水平的变化，使用实时荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA及ARCHITECH i 2000测量HBsAg，HBeAg水平，结果显示在干扰素治疗前、后，HBsAg和HBeAg和HBV DNA水平之间没有显著的相关性。

4.2影响HBsAg和HBV DNA之间相关性的主要因素

4.2.1HBeAg状态Gupta等[16]将166例乙型肝炎患者纳入研究，结果显示HBV DNA和HBsAg呈弱相关性(r=0.443，P<0.05)，分层分析发现HBeAg阳性组的相关性较好(r=0.402，P<0.05)，HBeAg阴性组却无相关性(r=0.193，P=0.05)。Thompson等[17]收集149例治疗初期的慢性乙型肝炎患者(HBeAg阳性71例；HBeAg阴性78例)，检测了HBeAg和HBsAg定量、HBV基因型、血清HBV DNA，在HBeAg阳性慢性乙型肝炎组中，HBsAg与血清HBV DNA和肝组织中共价闭合环状DNA水平及总HBV DNA呈正相关(r=0.69，0.71，0.76，均P<0.01)。在HBeAg阴性慢性乙型肝炎组中，HBsAg与血清HBV DNA的相关性较差(r=0.28，P=0.01)，与肝内共价闭合环状DNA水平及总HBV DNA没有相关性。Ganji等[14]对伊朗97例慢性乙型肝炎患者采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测HBV DNA及电化学发光免疫分析法检测血清HBsAg，结果显示HBV DNA在同一水平时，HBeAg阳性和阴性的患者之间的HBsAg滴度差异有统计学意义(P=0.001)，HBeAg阴性患者有较高水平的HBsAg，但HBV DNA的水平较低。

4.2.2HBV感染的阶段不同裴彦祯等[18]为研究HBV感染的不同期HBsAg与HBV DNA水平的相关性，将47例慢性乙型肝炎患者(乙型肝炎组)，72例乙型肝炎肝硬化患者(肝硬化组)及54例肝癌患者(肝癌组)纳入研究，使用雅培化学发光法定量检测HBsAg，荧光定量聚合酶链反应法检测HBV DNA，证实HBsAg定量与HBV DNA水平在乙型肝炎组(r=0.297，P<0.05)、肝硬化组(r=0.346，P<0.05)、肝癌组(r=0.452，P<0.05)呈正相关。黎美祥等[19]将慢性乙型肝炎患者119例和HBV相关ACLF患者98例纳入研究，采用罗氏电化学发光法检测血清HBsAg和HBeAg，荧光定量聚合酶链反应法检测血清HBV DNA水平。发现HBeAg阴性患者血清HBsAg与血清HBV DNA水平及生化指标无显著相关性(P>0.05)，不同HBV DNA水平ACLF患者中不同HBsAg水平患者的比例比较差异无统计学意义(P>0.05)，证实了HBV相关ACLF患者血清HBsAg水平与HBV DNA水平及病情的严重程度无直接平行关系。Kim等[20]研究645例韩国未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者不同HBV感染期[免疫耐受期(IT，n=56)、HBeAg阳性慢性乙型肝炎(EPH，n=150)、非活动期(IC,n=274)、HBeAg阴性慢性乙型肝炎(ENH,n=165)]的HBsAg滴度与HBV DNA水平关系，得出在IT，EPH和IC组HBsAg滴度与HBV DNA水平均相关(r=0.664，r=0.541，r=0.505，均P<0.001)，但在ENH组无相关(r=0.093，P=0.321)。Lee等[21]从565例HBsAg较高水平(HBsAg>250 IU/mL)乙型肝炎患者中采集的血清,测定HBsAg 和HBV DNA定量值，结果显示HBsAg和HBV DNA定量之间有非常弱的相关性。分层分析发现，慢性肝炎乙型肝炎患者组和肝癌患者中两者也为弱相关，在肝硬化患者组却无相关。

4.2.3HBV基因型的不同HBV存在各种基因型，其对乙型肝炎患者的自然病程、临床结局、抗病毒治疗等具有影响[22]，Tuaillon等[23]发现虽然HBsAg定量不受HBV基因型影响，不过在基因型A慢性乙型肝炎患者的HBsAg和HBV DNA水平之间的有关联性(r=0.44，P=0.02)，而在HBV基因型D的患者中两者却没有关联性(r=0.29，P=0.15)。HBsAg和HBV DNA的关系与HBV基因型有关。Ganji等[14]和 Jaroszewicz等[24]也证实HBV基因型会影响HBsAg和HBV DNA的关系。

5结语

综上所述，在某些情况下，高载量的HBV DNA与HBsAg定量水平有相关性，可反映患者体内病毒的复制水平及传染性。但在不同的HBV感染期、HBeAg状态、HBV感染的不同阶段及基因型等综合因素下，其HBsAg定量与HBV DNA水平亦显示无相关或弱相关性，因此，HBV DNA载量与HBsAg定量在疾病过程中的平行关系仍需进一步研究，如能进一步证实在哪些具体条件下可用HBsAg替代HBV DNA定量检测，将会大大减少患者的医疗开支。

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Research Progress of HBsAg Quantitative Detection Technology and Hepatitis B Virus DNAKELiu-hua1，MAXing-xuan1,QINYan-ping2. (1.DepartmentofClinicalLaboratory,LiuzhouHospitalofTraditionalChineseMedicine,Liuzhou545001,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,iuzhouRedCrossHospital,Liuzhou545001,China)

Abstract:Hepatitis B surface antigen(HBsAg) is a sign of hepatitis B virus(HBV) infection,HBsAg quantitatification can be used to monitor and predict the curative effect of antiviral therapy.HBV DNA is the most direct index to detect HBV replication and infectivity,with high specificity and sensitivity.In clinical antiviral efficacy was assessed by detecting HBsAg and HBV DNA level to guide and adjust the therapy plan.There are a number of reports about the correlation of HBsAg and HBV DNA,and the study is to elucidate different factors affecting the change of HBsAg and HBV DNA and the relevance.

Key words:Chronic hepatitis B； Hepatitis B surface antigen quantitative； Hepatitis B virus DNA

收稿日期：2014-11-03修回日期：2015-08-22编辑：相丹峰

基金项目：广西柳州市科学研究与技术开发计划(2014JC0202 自)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.19.042

中图分类号：R446；R575

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)19-3569-04