电针对前列腺增生模型大鼠前列腺组织B c l－2、Bax基因表达的影响

范海青

（福建中医药大学附属第二人民医院，福建 福州350003）

电针刺激背部肾俞、会阳能有效治疗前列腺增生（benignprostatichyperplasia，BPH），鉴于前列腺增生与细胞凋亡的密切关系，在探求电针对BPH的机制研究中，我们选取与BPH的发生密切相关的线粒体凋亡通路进行研究，对凋亡相关因子Bcl－2、Bax表达进行检测，探讨电针治疗B P H的作用靶点，从分子水平阐明电针治疗前列腺增生的机理。

1 材料与方法

1.1 动物选择 3月龄雄性S D大鼠25只，体质量（250±20）g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。

1.2 动物分组 将S D大鼠饲养1周以适应环境后，随机取5只作为手术但不去势组（假手术组），其余20只采用去势后注射丙酸睾酮造模，即在无菌操作下，手术切除双侧睾丸，待大鼠苏醒后将其随机分为4组：模型组、针刺肾俞、会阳穴组（针刺组）、保列治组（西药组）、电针肾俞、会阳穴组 （电针组），每组5只。去势第8天起，每只大鼠皮下注射丙酸睾酮酮1m g／（300g／d），同时给予相应的处理，连续4周。

1.3 大鼠饲养 饲养期间观察大鼠毛色、食欲、活动、体质量变化。

1.4 实验治疗 ① 分组治疗：术后第8天起，假手术组每天抓取1次，并皮下注射注射用水0.l m L／只，固定30min。模型组每天抓取1次，皮下注射丙酸睾酮后，固定30min。针刺组皮下注射丙酸睾酮后，针刺1次，留针30min。电针组皮下注射丙酸睾酮后，电针肾俞、会阳穴1次，留针30min。西药组注射丙酸睾酮后，保列治1.67 m g／k g，临用前用蒸馏水配制成0.167 m g／m L的混悬液，灌胃，连续4周。实验期间，每7天称体质量1次，以调整给药量。②针刺方法：针刺组、电针组取双侧肾俞穴、会阳穴，用75%酒精消毒，用30号0.5寸毫针，肾俞斜刺向脊柱方向6mm，会阳稍向内前斜刺6mm。电针组接电针，同侧相连，正极在上，负极在下，疏密波刺激，H1为2H z，H2为100H z，电压为2V，强度以见鼠尾稍摆动而无明显挣扎为宜，留针30min。每日1次，5d为1个疗程。疗程后休息2d，共进行4个疗程。③ 取材：在末次给药、针刺24h后，所有大鼠称体质量，然后以3%戊巴比妥钠1 m L／k g腹腔注射麻醉，剖开腹部，迅速摘取前列腺于冰袋上。

1.5 检 测

1.5.1 主要试剂①Trizol试剂盒（上海生工生物工程技术服务有限公司）；②β－actin、Bc1－2、Bax引物（上海生工生物工程技术服务有限公司合成）；③RT－PCR试剂盒（上海生工生物工程技术服务有限公司）。

1.5.2 主要仪器①PCR基因扩增仪（美国PE生物系统公司）；②化学发光成像系统（美国Bio－rad公司）；③64R型低温高速离心机（美国Beckman公司）。

1.5.3 β－actin、Bc1－2、Bax引物β－actinmRNA：sense：5－TTGGCACCACACTTTCTACA－3’；antisense：5’－TCACGCACGATTTCCCTCTCA－3’；扩增片段长度442bp。Bc1－2mRNA：sense：5’－CCATGTGTCCATCTGACC－3’；antisense：5’－GCCATATAGTTCCACAAA－3’；扩增片段长度330bp。BaxmRNA：sense：5，－CTAGCAAACTGGTGCTCAAGG－3’：antisense：5’－CGAAGTAGGAGAGGAGGCCT－3’；扩增片段长度147bp。

1.5.4RT－PCR检测各组基因Bcl－2、BaxmRNA表达总RNA的提取：取10mg低温保存的前列腺组织块加lmL酚、异硫氰酸胍的均相溶（Trizo1），机械匀浆，吹打混匀；将匀浆液转至1.5mL灭菌管中，室温静置15min；加0.2mL氯仿，轻摇震荡15s，室温静置2min；4℃、12000r／min离心15min，取上清液；将上清水相（约1mL）移入新的EP管，加异丙醇0.5mL，混匀，室温静置10min；4℃、12000r／min离心10min，弃上清；加入75%乙醇1mL，清洗EP管，吹打混匀，4℃、7500r／min离心5min，弃上清，重复1次；所得RNA用紫外分光光度法定量，并于－70℃保存备用。

PCR扩增：50mL反应体系中含有2×RT－PCRBuffer25μL，模板RNA×1μL，β－actin、Bc1－2和Bax上下游引物各1μL，RT／TaqMix1μL，其余体积为DEPC水。循环参数：β－actin为94℃2min，94℃50s，55℃50s，72℃1min，35个循环，72℃5min；Bcl－2为94℃2min，94℃30s，50℃30s，72℃1min，35个循环，72℃5min；Bax为94℃2min，94℃30s，59℃45s，72℃45s，30个循环，72℃5min。以上均采用热启动方式，预变性后，于72℃条件下加入TaqDNA聚合酶。

1.5.5 PCR产物电泳鉴定RT－PCR后的DNA产物加入染料后离心1000r／min×30s，充分振荡，取10μL于115%琼脂糖凝胶电泳，100V，1h，E B染色，紫外灯下拍照。

1.5.6 图像分析用化学发光成像系统测定PCR产物电泳密度，各基因mRNA表达强度以其PCR产物电泳密度值与β－actin的比值来表示。

2 结 果

实验结果 见表1、表2。

表1 5组Bcl－2mRNA表达比较（±s）

表1 5组Bcl－2mRNA表达比较（±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05；与针刺组比较，2）P＜0.05。

55.792±1.356假手术组 51.021±0.808针 刺 组 54.387±1.2421）电 针 组 53.45±1.1211）2）西 药 组 53.632±0.7221）2）B c l－2mR NA模型组分 组 大鼠／只

表2 5组B a x mR NA表达比较（±s）

表2 5组B a x mR NA表达比较（±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05；与针刺组比较，2）P＜0.05。

50.912±0.221假手术组 52.686±0.525针 刺 组 51.720±0.4521）电 针 组 52.222±0.57421）2）西 药 组 52.131±0.7461）2）B a x mR NA模型组组 别 大鼠／只

3 讨 论

研究认为B c l－2过度表达可抑制细胞凋亡，从而使细胞增殖和凋亡失去平衡，导致细胞数量的相对增多。B a x基因是B c l－2基因家族中的一个凋亡促进基因，B a x与B c l－2作用相反，能够促进凋亡［1］。K y p r i a n o u等［2］发现 B c l－2在前列腺增生组织中表达较前列腺正常组织明显升高。本实验结果表明：模型组前列腺细胞B c l－2高表达，给予治疗干预后，针刺组、电针组、西药组明显低于模型组，电针组、西药组明显低于针刺组，电针组虽低于西药组，但无明显差异；模型组前列腺细胞B a x呈低表达，给予治疗干预后，针刺组、电针组、西药组明显高于模型组，电针组、西药组明显高于针刺组，电针组虽高于西药组，但无明显差异。电针治疗B P H的机制是通过降低B c l－2基因表达，提高B a x基因的表达，使B c l－2／B a x比值恢复到平衡状态，通过调节凋亡基因的平衡抑制前列腺的增生。

［1］赵建新，田元祥，谷世喆 .电针对脑缺血再灌注损伤小鼠海马神经元凋亡及B c l－2、B a x表达的影响［J］.中华中医药杂志，2007，22（4）：235－237.

［2］顾方六.现代前列腺病学［M］.北京：人民军医出版社，2002：63.