外阴白色病变组织中cyclin D1、p16和CD34表达情况及其与血清cAMP和cGMP含量的关系
2015-12-07肖雪莲赵建武梁文通吴倩
肖雪莲,赵建武,梁文通,吴倩
(贵州省人民医院妇科,贵州 贵阳 550002)
·论著·
外阴白色病变组织中cyclin D1、p16和CD34表达情况及其与血清cAMP和cGMP含量的关系
肖雪莲,赵建武,梁文通,吴倩
(贵州省人民医院妇科,贵州 贵阳 550002)
目的分析外阴白色病变组织中cyclin D1、p16和CD34表达情况及其与血清cAMP和cGMP含量的关系。方法选择在该院接受治疗的外阴白色病变患者36例作为观察组对象,另取同期在该院进行体检的健康女性35例作为对照组,比较观察组患者外阴病变组织及非病变组织中cyclin D1、p16和CD34的表达情况,观察组及对照组的血清cAMP和cGMP含量。结果观察组患者病变组织皮肤的cyclin D1和CD34表达高于正常组织,p16表达明显低于正常皮肤组织(P<0.05)。观察组患者的血清cAMP含量及cAMP/cGMP低于对照组、cGMP含量高于对照组(P<0.05)。观察组患者的血清cAMP含量与病变组织cyclin D1和CD34表达呈负相关,与p16表达呈正相关;血清cGMP含量与病变组织cyclin D1和CD34表达呈正相关,与p16表达呈负相关。结论外阴白色病变组织中cyclin D1和CD34表达增高,p16表达降低,同时患者血清cAMP和cGMP含量变化与病变组织中的各调控因子表达呈直接相关关系。
外阴白色病变;cyclin D1;p16;CD34;cAMP;cGMP
外阴白色病变指女性外阴皮肤发生变性及色素改变的一系列慢性疾病,临床症状包括外阴瘙痒、灼痛、病变区域皮肤色素减退甚至变白,皮肤粗糙和溃疡等。该病反复发作、迁延不愈,给患者的正常生活带来巨大困扰[1]。外阴白色病变发病机制尚不明了,临床治疗较差,成为妇科多见及难治性疾病。本次研究主要分析外阴白色病变组织中cyclin D1、p16和CD34表达情况及其与血清cAMP和cGMP含量的关系。现报道如下:
1 资料与方法
1.1一般资料
选择2012年6月-2014年11月在本院接受治疗的外阴白色病变患者36例作为观察组对象。其中,鳞状上皮增生20例,硬化性苔藓16例;年龄25~69岁,平均(43.81±9.62)岁;病程3个月~11年,平均(7.28±1.53)年。每例患者在接受治疗干预前于病变部位取材1次,同时取外阴正常皮肤作为对照。所有标本经10%福尔马林固定,常规石蜡切片(厚度为4μm)。选择同期在本院进行健康体检、外阴无病变的女性35例作为对照组,年龄28~62岁,平均(42.17±8.75)岁。两组女性的基线资料差异无统计学意义,具有可比性。
1.2检测方法
1.2.1Western blot检测取观察组患者病变皮肤组织及正常皮肤组织,分别加入RIPA蛋白裂解液1 ml抽提蛋白用于下一步Western blot检测。检测时,按照配方配置4%的浓缩胶和10%的分离胶,加入蛋白样本和marker后进行垂直电泳(90 V、20 min,120 V、80 min)和电转膜(100V、90 min);取出NC膜置于5%脱脂牛奶封闭1~2 h,TBST洗5 min×3遍后,根据抗体说明书预测的蛋白分子量裁剪NC膜,分别孵育cyclin D1、p16、CD34第一抗体,过夜后取出NC膜并用TBST洗5 min×3遍,加入HPR标记的第二抗体孵育1~2 h,TBST洗15 min×2遍后进行显影。用Image J软件分析蛋白条带灰度值,按照目的基因灰度值/actin灰度值作为蛋白含量,设置对照组肿瘤组织中目的基因蛋白含量为100,计算观察组肿瘤组织基因的蛋白含量。
1.2.2ELISA法抽取观察组与对照组患者的空腹外周静脉血,分离得血清后采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定cAMP和cGMP含量。
1.3统计学方法
采用SPSS 18.0软件录入和分析数据,计量资料的两组间比较采用t检验、4组间比较采用方差分析,相关性分析采用多元线性回归,P<0.05差异有统计学意义。
2 结果
2.1cyclin D1、p16和CD34表达情况
观察组患者病变组织皮肤的cyclin D1和CD34表达高于正常组织,p16表达明显低于正常皮肤组织(P<0.05)。具体见附图。
附图 cyclin D1、p16及CD34的蛋白含量比较
2.2cAMP和cGMP含量
观察组患者的血清cAMP含量及cAMP/cGMP低于对照组、cGMP含量高于对照组(P<0.05)。具体见表1。
表1 两组患者的血清cAMP、cGMP含量比较(±s)
表1 两组患者的血清cAMP、cGMP含量比较(±s)
组别cAMP/(ng/ml)cGMP/(ng/ml)cAMP/cGMP观察组10.82±1.158.59±0.881.17±0.38对照组19.72±1.676.05±1.053.32±0.21 t值7.295.386.93 P值0.0150.0210.019
2.3相关性
观察组患者的血清cAMP含量与病变组织cyclin D1、CD34表达呈负相关,与p16表达呈正相关;血清cGMP含量与病变组织cyclin D1和CD34表达呈正相关,与p16表达呈负相关。具体见表2。
表2 观察组患者病变组织cyclin D1、p16及CD34表达与血清cAMP和cGMP含量的相关性
3 讨论
外阴白色病变是发生在女性外阴的皮肤和黏膜良性病变,以外阴瘙痒及色素减退为临床特征,属于皮肤和黏膜非赘生性上皮病变,恶变率约为2%~5%[2]。根据病理表现不同可以将外阴白色病变分为外阴鳞状上皮增生、硬化性苔藓和硬化性苔藓合并鳞状上皮增生。外阴白色病变原因不明,可能与多种细胞周期调控因子表达异常、自身免疫异常等相关。
细胞周期是一个精密调控的过程,其控制位点在调控细胞分裂增殖过程中发挥十分重要的作用,这些因子主要包括细胞周期蛋白cyclin、cyclin依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDK)及一些抑癌基因如Rb和p16蛋白产物[3]。目前认为cyclin D(主要是D1)在细胞周期由G1期进入S期的调控中起到关键作用。Cyclin D与CDK4和CDK6结合可激活其活性并磷酸化Rb,释放转录因子E2F,启动某些基因转录,推动细胞周期从G1向S期转化,启动细胞分裂增殖周期的进程[4]。P16是CDK抑制蛋白(CDK inhibitor,CKI)的一种,可以直接抑制CDK活性,与cyclin一起参与CDK的活性调节。P16蛋白特异性与CDK4、CDK6结合,可以抑制其活性,从而维持抑癌基因Rb活性状态。目前已经将cyclin D1定义为癌基因,其局部扩增或者易位至强启动子下游,导致cyclin D1蛋白过度表达,可以诱发多种人类肿瘤。很多肿瘤组织中因p16基因突变或者启动子甲基化,可以使p16基因功能丧失。上述研究结果显示外阴白色病变患者的病变皮肤组织中cyclin D1表达增加,p16表达降低,提示患者存在细胞增殖过程过度激活、抑癌基因活性不足[5]。
有研究显示外阴白色病变的发病可能与局部自身免疫物质沉积、微循环缺陷有关。CD34是一种单链穿膜蛋白,被认为是抗原特异性最高的血管内皮细胞的标志物,可以显示较小的不成熟的为血管内皮细胞,可反映组织血管情况并进一步提示组织微循环状况[1]。上述研究结果显示外阴白色病变患者的病变皮肤组织中CD34表达均增加,说明局部血管过度增生是外阴白色病变的发病原因之一[6]。
以往的研究证实,外阴白色病变的发生与表皮及真皮的代谢功能紊乱、细胞异常增殖相关。cAMP和cGMP在许多信号通路中起到重要的“第二信使”作用,可以利用改变蛋白构象的机制,实现调节受体、离子通道、酶及结构蛋白的功能。已知cAMP抑制细胞增殖,而cGMP促进细胞有丝分裂,正常细胞生长增殖依赖促进及抑制因子的相互平衡,若是两者含量及比例失衡可能导致上皮组织增殖与分化异常,进而引起一系列疾病[4]。上述研究显示观察组患者的血清cAMP含量及cAMP/cGMP低于对照组、cGMP含量高于对照组(P<0.05),提示其比值失调可能是患者局部细胞增殖过速的主要生化基础之一。在进一步对患者血清cAMP和cGMP含量与病变组织cyclin D1、p16和CD34表达相关性进行分析发现:观察组患者的血清cAMP含量与病变组织cyclin D1和CD34表达呈负相关,与p16表达呈正相关;血清cGMP含量与病变组织cyclin D1和CD34表达呈正相关,与p16表达呈负相关[7]。
综上所述,得出以下结论:外阴白色病变组织中cyclin D1和CD34表达增高,p16表达降低,同时患者血清cAMP和cGMP含量变化与病变组织中的各调控因子表达呈直接相关关系,对于临床病情评估及治疗具有一定指导价值。
[1]HORN LC,BAUERFEIND UK,STRAU HG,et al.Vulval intestinal/enteric heterotopia with a 10-yr follow-up:a case report and review of the literature[J].Int J Gynecol Pathol,2014,33(3): 258-262.
[2]MATOSO A,ROSS HM,CHEN S,et al.Squamous neoplasia of the scrotum:a series of 29 cases[J].Am J Surg Pathol,2014,38 (7):973-981.
[3]FLEURY AC,JUNKINS-HOPKINS JM,DIAZ-MONTES T.Vulvar basal cell carcinoma in a 20-year-old:Case report and review of the literature[J].Gynecol Oncol Case Rep,2011,2(1): 26-27.
[4]SHACO-LEVY R,BEAN SM,VOLLMER RT,et al.Paget disease of the vulva:a study of 56 cases[J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2010,149(1):86-91.
[5]陈阳阳,李楷滨,张利群,等.CD34在外阴白色病变组织中的表达及临床意义[J].中国妇幼保健,2013,28(7):133-135.
[6]高建宏,高金荣,杨雅琴,等.聚焦超声治疗前后外阴白色病变组织中VEGF、bFGF和CD34表达的检测及其意义[J].吉林大学学报,2011,37(1):130-132.
[7]CASTIGLIONE F,BERGAMINI A,RUSSO A,et al.Inhibition of phosphodiesterase 4 enhances clitoral and vaginal blood flow responses to dorsal clitoral nerve stimulation or PGE1 in anesthetized female rats[J].J Sex Med,2013,10(4):939-950.
(张立芳 编辑)
Expressions of cyclin D1,p16,CD34 in vulvar white lesion and their relationship with serum content of cAMP and cGMP
Xue-lian XIAO,Jian-wu ZHAO,Wen-tong LIANG,Qian WU
(Department of Gynecology,Guizhou People's Hospital,Guiyang,Guizhou 550002,P.R.China)
【Objective】To analyse the expressions of cyclin D1,p16,CD34 in vulvar white lesion and their correlation with serum content of cAMP and cGMP.【Methods】Thirty-six patients with vulvar white lesions received treatment in our hospital were enrolled in observation group,35 cases of healthy women received physical examination in the same period were enrolled in control group.Then the expressions of cyclin D1,p16,CD34 in vulvar white lesion tissue and normal tissue of observation group patients,serum content of cAMP and cGMP in observation group and control group were compared.【Results】In lesion tissue of observation group patients,cyclin D1,CD34 expressions were higher than in normal tissue,p16 expression was significantly lower than in normal tissue(P<0.05). Serum cAMP,cAMP/cGMP levels of observation group patients were lower than those of control group patients,and cGM P contents of observation group patients were higher than those of control group patients(P<0.05).Observation group patients'serum contents of cAMP showed a negative correlation with cyclin D1,CD34 expression in diseased tissue,and had a positive correlation with p16 expression.Serum content of cGMP was positively correlated with cyclin D1,CD34 expression in diseased tissue,and negatively correlated with p16 expression.【Conclusion】Cyclin D1,CD34 expressions increase in vulvar white lesion,p16 expression reduces,at the same time patients'serum cAMP and cGMP contents have a direct relationship with regulatory factor expression in diseased tissue.
white lesions of vulva;cyclin D1;p16;CD34;cAMP;cGMP
R711.1
A
1005-8982(2015)25-0050-03
2015-01-17