承德产黄芩植株不同部位野黄芩苷含量分析*

杨 丽，赵桂琴，张晓峰

（承德医学院中药研究所，河北承德　067000）

承德产黄芩植株不同部位野黄芩苷含量分析*

杨 丽，赵桂琴△，张晓峰

（承德医学院中药研究所，河北承德067000）

目的：测定河北承德产黄芩植株不同部位野黄芩苷的含量。方法：采用高效液相色谱法测定河北承德隆化县黄芩GAP种植基地产黄芩植株不同部位（根、茎、叶、籽种壳）野黄芩苷的含量。色谱条件：柱温20.0℃、流动相甲醇：水：甲酸（20：80：0.4）、流速0.8ml/min、检测波长335nm。结果：承德产黄芩植株根、茎、叶、籽种壳中野黄芩苷的含量分别为0.94%、12.57%、10.54%、1.89%。结论：野黄芩苷在黄芩植株不同部位的含量分布为茎＞叶＞籽种壳＞根。

承德产黄芩；HPLC法；野黄芩苷

野黄芩苷是黄芩茎叶、半枝莲、灯盏细辛等多种常用中药材的重要化学成分之一，研究发现野黄芩苷具有多种生理功能：呈浓度依赖性地抑制人胎儿平滑肌细胞的增殖［1］；调节整合素α v β 6和E-钙黏蛋白的分泌，抑制舌癌细胞的粘附与迁移［2-3］；降低脑血管阻力、增加脑血流量、溶解血栓、防止氧自由基生成增加等［4］。河北承德地区是野生黄芩道地产区，目前在河北省承德市隆化县已建立了黄芩GAP规范化种植基地，以供给相应的制药企业。目前，企业提取黄芩中的野黄芩苷单体均使用黄芩的茎、叶，黄芩的根部多用于提取黄芩苷，而黄芩籽种壳被作废料丢弃。为此，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定了承德产黄芩植株不同部位（根、茎、叶、籽种壳等4个部位）的野黄芩苷含量，以期为企业提取野黄芩苷单体提供新的原料部位，从而避免资源浪费。

1　材料

TD2001型电子天平（天津市天马仪器厂），Agilent 1200高效液相色谱仪（自动进样器、四元泵、柱温箱、DAD检测器，美国Agilent公司），RE52-99型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），SHD-Ⅲ型循环水式多用真空泵（保定高新区阳光科教仪器）。

干燥黄芩药材采自河北省承德市隆化县黄芩规范化种植基地（由承德医学院中药研究所赵春颖副教授鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi，批号：20120820），野黄芩苷标准品（购于中国药品生物制品鉴定所，批号：110842-200605，含量≥98.99%）。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm），检测波长为335nm，柱温20.0℃，流动相为甲醇：水：甲酸（20：80：0.4），梯度洗脱（0-60min），流速为0.8ml/min，进样量为10μl。在该色谱条件下，野黄芩苷的分离度均＞1.5。

2.2制备溶液

2.2.1供试品溶液的制备：取采收后晒干的黄芩植株，按部位分组剪下（剪成0.5cm左右）。分别准确称取黄芩根、茎、叶、籽种壳部位各20.0g，置于圆底烧瓶中，按料液比1：10加入70%乙醇，回流提取2次，提取1.5h，合并提取液，蒸干，研末，称重。精密称定黄芩根、茎、叶、籽种壳乙醇提取物干粉5.00mg，分别置10ml容量瓶中，甲醇溶解定容，即得。

2.2.2对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品3.10mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度线处，摇匀，制成每1ml中含野黄芩苷0.124mg的溶液。准确移取1.6ml上述对照品溶液，甲醇溶解于10ml容量瓶中，得对照品贮备液（每1ml中含野黄芩苷0.0198mg）。

2.3方法学考察

2.3.1绘制标准曲线：分别精密吸取“2.2.2”中的野黄芩苷对照品贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0μl，按“2.1”的色谱条件测定，记录色谱图、峰面积（A）。以野黄芩苷质量（X）对峰面积值（Y）进行线性回归，回归方程为：Y=183.9X+0.1741，r=0.9998。说明野黄芩苷在0.0198-0.2178μg范围内具有良好的线性关系。

2.3.2精密度：取“2.2.2”中的野黄芩苷对照品贮备液，按“2.1”的色谱条件重复进样5次，记录色谱图。结果显示野黄芩苷的平均峰面积为336.3451（RSD=1.01%），表明仪器精密度良好。

2.3.3稳定性：取“2.2.1”中的黄芩根、茎、叶和籽种壳供试品溶液各10μl，分别于配液后2.0、4.0、6.0、8.0、14.0h按“2.1”的色谱条件进样测定。结果各部位野黄芩苷峰面积的RSD分别为1.17%、1.66%、1.44%、0.87%（n=5），表明供试品溶液在14.0h内稳定性良好。

2.3.4重复性：称取同期干燥黄芩根、茎、叶和籽种壳各5份，按“2.2.1”的方法制备供试品溶液，“2.1”的色谱条件自动进样，测定峰面积值。结果野黄芩苷峰面积的RSD为0.91%、0.96%、1.01%、0.84%（n=5），说明重复性良好。

表1　黄芩根野黄芩苷加样回收率试验结果（n=5）

表2　黄芩茎野黄芩苷加样回收率试验结果（n=5）

表3　黄芩叶野黄芩苷加样回收率试验结果（n=5）

表4　黄芩籽种壳野黄芩苷加样回收率试验结果（n=5）

2.3.5加样回收率：在已知野黄芩苷含量的4个部位提取物粉末中，定量加入野黄芩苷对照品，按“2.1”的色谱条件进样，测定峰面积，计算野黄芩苷回收率。结果见表1-4。

2.4样品含量测定分别取同期黄芩根、茎、叶、籽种壳适量，剪成长约0.5cm的小块，分别称取20.0g，按“2.2.1”的方法制备样品溶液，按“2.1”的色谱条件进样测定，计算原药材中野黄芩苷（C21H18O12）的含量，结果见表5：黄芩植株不同部位的野黄芩苷含量分布为：茎＞叶＞籽种壳＞根。

表5　样品含量测定结果（n=3）

3　讨论

本研究以野黄芩苷为考察指标，利用高效液相色谱仪，在柱温20.0℃、甲醇：水：甲酸（20：80：0.4）、流速0.8ml/min、检测波长335nm的条件下，测定了承德产黄芩植株不同部位（根、茎、叶、籽种壳）野黄芩苷的含量。结果显示，黄芩植株中茎、叶的野黄芩苷含量最高，其次黄芩籽种壳，而且黄芩籽种壳野黄芩苷的含量约为黄芩传统药用部位根的2倍。本研究提示，黄芩收获时其籽种壳部分可用于提取野黄芩苷单体，从而可以充分利用黄芩药用资源。

［1］周晓霞，苏佩清.野黄芩苷对人胎儿平滑肌细胞增殖的抑制作用［J］.山东中医杂志，2003，22（2）：109-110.

［2］Li H，Huang D，Gao Z，et al.Scutellarin inhibits cell migration by regulating production of αvβ6 integrin and E-cadherin in human tongue cancer cells［J］.Oncol Rep，2010，24（5）：1153- 1160.

［3］张丽娜，郑金华，李会平，等.野黄芩苷对鼠舌癌移植瘤新生脉管及弹性和胶原纤维的影响［J］.口腔医学研究，2011，27（9）：760-762.

［4］王丽娟，林宇，邱丽萍，等.灯盏花素对氯化钡所致心律失常的预防作用［J］.齐齐哈尔医学院学报，2000，21（1）：1-2.

ANALYSIS OF SCUTELLARIN CONTENT IN DIFFERENT PARTS OF CHENGDE SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI

YANG Li
（Institute of Chinese Materia Media， Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective： To determine the scutellarin content in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi. Methods: HPLC was used to determine the scutellarin content in different parts （root， stem， leaf， seedshell） of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde Longhua GAP planting base. The chromatographic condition： column temperature was 20.0℃， mobile phase wasmethanol-water-formic acid （20：80：0.4）， fl ow rate was 0.8ml/min， detection wavelength was 335 nm. Results: The scutellarin content in root， stem， leaf and seedshell of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde was respectively 0.94%， 12.57%， 10.54% and 1.89%. Conclusions: The scutellarin content distribution in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi is stem＞leaf＞seedshell＞root.

Chengde Scutellaria baicalensis； HPLC； Scutellarin

R284.1

A

1004-6879（2015）06-0467-03

2015-05-05）

* 国家科技支撑计划（2011BAI07B04）