承德产黄芩植株不同部位野黄芩苷含量分析*
2015-11-28赵桂琴张晓峰
杨 丽,赵桂琴,张晓峰
(承德医学院中药研究所,河北承德 067000)
承德产黄芩植株不同部位野黄芩苷含量分析*
杨 丽,赵桂琴△,张晓峰
(承德医学院中药研究所,河北承德067000)
目的:测定河北承德产黄芩植株不同部位野黄芩苷的含量。方法:采用高效液相色谱法测定河北承德隆化县黄芩GAP种植基地产黄芩植株不同部位(根、茎、叶、籽种壳)野黄芩苷的含量。色谱条件:柱温20.0℃、流动相甲醇:水:甲酸(20:80:0.4)、流速0.8ml/min、检测波长335nm。结果:承德产黄芩植株根、茎、叶、籽种壳中野黄芩苷的含量分别为0.94%、12.57%、10.54%、1.89%。结论:野黄芩苷在黄芩植株不同部位的含量分布为茎>叶>籽种壳>根。
承德产黄芩;HPLC法;野黄芩苷
野黄芩苷是黄芩茎叶、半枝莲、灯盏细辛等多种常用中药材的重要化学成分之一,研究发现野黄芩苷具有多种生理功能:呈浓度依赖性地抑制人胎儿平滑肌细胞的增殖[1];调节整合素α v β 6和E-钙黏蛋白的分泌,抑制舌癌细胞的粘附与迁移[2-3];降低脑血管阻力、增加脑血流量、溶解血栓、防止氧自由基生成增加等[4]。河北承德地区是野生黄芩道地产区,目前在河北省承德市隆化县已建立了黄芩GAP规范化种植基地,以供给相应的制药企业。目前,企业提取黄芩中的野黄芩苷单体均使用黄芩的茎、叶,黄芩的根部多用于提取黄芩苷,而黄芩籽种壳被作废料丢弃。为此,本研究采用高效液相色谱法(HPLC)测定了承德产黄芩植株不同部位(根、茎、叶、籽种壳等4个部位)的野黄芩苷含量,以期为企业提取野黄芩苷单体提供新的原料部位,从而避免资源浪费。
1 材料
TD2001型电子天平(天津市天马仪器厂),Agilent 1200高效液相色谱仪(自动进样器、四元泵、柱温箱、DAD检测器,美国Agilent公司),RE52-99型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),SHD-Ⅲ型循环水式多用真空泵(保定高新区阳光科教仪器)。
干燥黄芩药材采自河北省承德市隆化县黄芩规范化种植基地(由承德医学院中药研究所赵春颖副教授鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi,批号:20120820),野黄芩苷标准品(购于中国药品生物制品鉴定所,批号:110842-200605,含量≥98.99%)。
2 方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm),检测波长为335nm,柱温20.0℃,流动相为甲醇:水:甲酸(20:80:0.4),梯度洗脱(0-60min),流速为0.8ml/min,进样量为10μl。在该色谱条件下,野黄芩苷的分离度均>1.5。
2.2制备溶液
2.2.1供试品溶液的制备:取采收后晒干的黄芩植株,按部位分组剪下(剪成0.5cm左右)。分别准确称取黄芩根、茎、叶、籽种壳部位各20.0g,置于圆底烧瓶中,按料液比1:10加入70%乙醇,回流提取2次,提取1.5h,合并提取液,蒸干,研末,称重。精密称定黄芩根、茎、叶、籽种壳乙醇提取物干粉5.00mg,分别置10ml容量瓶中,甲醇溶解定容,即得。
2.2.2对照品溶液的制备:精密称取野黄芩苷对照品3.10mg,置于25ml容量瓶中,加甲醇至刻度线处,摇匀,制成每1ml中含野黄芩苷0.124mg的溶液。准确移取1.6ml上述对照品溶液,甲醇溶解于10ml容量瓶中,得对照品贮备液(每1ml中含野黄芩苷0.0198mg)。
2.3方法学考察
2.3.1绘制标准曲线:分别精密吸取“2.2.2”中的野黄芩苷对照品贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0μl,按“2.1”的色谱条件测定,记录色谱图、峰面积(A)。以野黄芩苷质量(X)对峰面积值(Y)进行线性回归,回归方程为:Y=183.9X+0.1741,r=0.9998。说明野黄芩苷在0.0198-0.2178μg范围内具有良好的线性关系。
2.3.2精密度:取“2.2.2”中的野黄芩苷对照品贮备液,按“2.1”的色谱条件重复进样5次,记录色谱图。结果显示野黄芩苷的平均峰面积为336.3451(RSD=1.01%),表明仪器精密度良好。
2.3.3稳定性:取“2.2.1”中的黄芩根、茎、叶和籽种壳供试品溶液各10μl,分别于配液后2.0、4.0、6.0、8.0、14.0h按“2.1”的色谱条件进样测定。结果各部位野黄芩苷峰面积的RSD分别为1.17%、1.66%、1.44%、0.87%(n=5),表明供试品溶液在14.0h内稳定性良好。
2.3.4重复性:称取同期干燥黄芩根、茎、叶和籽种壳各5份,按“2.2.1”的方法制备供试品溶液,“2.1”的色谱条件自动进样,测定峰面积值。结果野黄芩苷峰面积的RSD为0.91%、0.96%、1.01%、0.84%(n=5),说明重复性良好。
表1 黄芩根野黄芩苷加样回收率试验结果(n=5)
表2 黄芩茎野黄芩苷加样回收率试验结果(n=5)
表3 黄芩叶野黄芩苷加样回收率试验结果(n=5)
表4 黄芩籽种壳野黄芩苷加样回收率试验结果(n=5)
2.3.5加样回收率:在已知野黄芩苷含量的4个部位提取物粉末中,定量加入野黄芩苷对照品,按“2.1”的色谱条件进样,测定峰面积,计算野黄芩苷回收率。结果见表1-4。
2.4样品含量测定分别取同期黄芩根、茎、叶、籽种壳适量,剪成长约0.5cm的小块,分别称取20.0g,按“2.2.1”的方法制备样品溶液,按“2.1”的色谱条件进样测定,计算原药材中野黄芩苷(C21H18O12)的含量,结果见表5:黄芩植株不同部位的野黄芩苷含量分布为:茎>叶>籽种壳>根。
表5 样品含量测定结果(n=3)
3 讨论
本研究以野黄芩苷为考察指标,利用高效液相色谱仪,在柱温20.0℃、甲醇:水:甲酸(20:80:0.4)、流速0.8ml/min、检测波长335nm的条件下,测定了承德产黄芩植株不同部位(根、茎、叶、籽种壳)野黄芩苷的含量。结果显示,黄芩植株中茎、叶的野黄芩苷含量最高,其次黄芩籽种壳,而且黄芩籽种壳野黄芩苷的含量约为黄芩传统药用部位根的2倍。本研究提示,黄芩收获时其籽种壳部分可用于提取野黄芩苷单体,从而可以充分利用黄芩药用资源。
[1]周晓霞,苏佩清.野黄芩苷对人胎儿平滑肌细胞增殖的抑制作用[J].山东中医杂志,2003,22(2):109-110.
[2]Li H,Huang D,Gao Z,et al.Scutellarin inhibits cell migration by regulating production of αvβ6 integrin and E-cadherin in human tongue cancer cells[J].Oncol Rep,2010,24(5):1153- 1160.
[3]张丽娜,郑金华,李会平,等.野黄芩苷对鼠舌癌移植瘤新生脉管及弹性和胶原纤维的影响[J].口腔医学研究,2011,27(9):760-762.
[4]王丽娟,林宇,邱丽萍,等.灯盏花素对氯化钡所致心律失常的预防作用[J].齐齐哈尔医学院学报,2000,21(1):1-2.
ANALYSIS OF SCUTELLARIN CONTENT IN DIFFERENT PARTS OF CHENGDE SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI
YANG Li
(Institute of Chinese Materia Media, Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)
Objective: To determine the scutellarin content in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi. Methods: HPLC was used to determine the scutellarin content in different parts (root, stem, leaf, seedshell) of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde Longhua GAP planting base. The chromatographic condition: column temperature was 20.0℃, mobile phase wasmethanol-water-formic acid (20:80:0.4), fl ow rate was 0.8ml/min, detection wavelength was 335 nm. Results: The scutellarin content in root, stem, leaf and seedshell of Scutellaria baicalensis Georgi produced in Chengde was respectively 0.94%, 12.57%, 10.54% and 1.89%. Conclusions: The scutellarin content distribution in different parts of Chengde Scutellaria baicalensis Georgi is stem>leaf>seedshell>root.
Chengde Scutellaria baicalensis; HPLC; Scutellarin
R284.1
A
1004-6879(2015)06-0467-03
2015-05-05)
* 国家科技支撑计划(2011BAI07B04)