黄连黄柏对脾胃虚寒实验大鼠模型的影响※

陈建章尹建康侯春久王小平唐春红汤灿辉

（江西中医药高等专科学校药学系，抚州344000）

黄连黄柏对脾胃虚寒实验大鼠模型的影响※

陈建章尹建康侯春久王小平唐春红汤灿辉

（江西中医药高等专科学校药学系，抚州344000）

目的观察两种常见的苦寒药物黄连、黄柏不同剂量提取液对脾胃虚寒模型大鼠的影响。方法采用灌胃给药冷白醋和精炼猪油制造脾胃虚寒实验大鼠模型，以黄连、黄柏两种苦寒药物不同剂量的水煎液为受试药物，通过检测胃排空率、胃重指数以及血清胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）、前列腺素E2（PGE2）指标情况观察两种苦寒药物对脾胃虚寒模型大鼠的影响。结果黄连中剂量组、黄连低剂量组能显著提高胃酚红排空率（P＜0.05、P＜0.01），黄连中剂量组、黄连低剂量组能显著降低胃重指数（P＜0.01）；黄连高剂量组能显著升高血清PGE2（P＜0.05）含量，黄连中剂量组皆能显著升高血清GAS、MTL、PGE2（P＜0.01），黄连低剂量组能显著提高血清MTL、PGE2（P＜0.05）。结论黄连中、低剂量组对脾胃虚寒实验大鼠有很好的治疗作用，有健胃的功效。黄柏对脾胃虚寒实验大鼠模型无明显的改善作用。

黄连；黄柏；脾胃虚寒；胃泌素；胃动素；前列腺素E2；动物实验

黄连，味苦、性寒，功能清热燥湿，泻火解毒。主要含原小檗碱型生物碱，拓扑异构酶I和Ⅱ的抑制剂，落叶松脂素和反式阿魏酸对羟基苯乙酯等有效成分。现代药理研究表明，黄连具有抗微生物、抗炎、镇痉、抗溃疡等作用［1］。黄柏味苦、性寒，功能清热燥湿，泻火解毒，消肿祛腐。现代药理研究表明，黄柏具有抗菌、抗炎、抗病毒、免疫抑制、抗溃疡等作用［2］。这两味苦寒中药符合不少学者认为的苦寒中药有伤胃之弊，不宜用于脾胃虚寒者。同时，有的学者认为苦寒药伤胃主要与其寒性、用量和某些药物的毒副作用有关［3］。本次研究通过具体的实验来说明苦寒中药对脾胃虚寒大鼠的影响。探究苦寒中药健胃的具体情况。

1 材料与方法

1.1 实验动物SPF级健康SD大鼠，体重：180～220 g，雌雄兼用，许可证号：SCXK（湘）2009-0012，饲料证号：SCXK（湘）2009-0013，以上动物由湖南长沙天勤生物科技服务部提供。

1.2 药物及试剂黄连、黄柏（均购于江西省中医药高等专科学校附属医院）；经本校中药鉴定教研室鉴定为正品。酚红（南化化学试剂厂）；明胶（天津市大茂化学试剂厂）；雷尼替丁（成都永康制药有限公司）；氢氧化钠（天津市大茂化学试剂厂）；胃泌素（GAS）试剂盒、胃动素（MTL）试剂盒、前列腺素E2（PGE2）（南京建成生物工程研究所）。

1.3 实验仪器UV-2250岛津紫外可见分光光度计（岛津公司）；电子天平（上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂）；电子分析天平（AL204梅特勒托利多公司）；离心机（北京医用离心机厂）；移液枪（大龙医疗设备有限公司）；酶标仪（北京普天新桥技术有限公司）；洗板机（北京普天新桥技术有限公司）。

1.4 实验方法

1.4.1 黄连黄柏水煎液的制备称取200 g黄连药材浸泡30 min，煎煮30 min，以水沸腾时开始计时，煎煮2次，合并2次滤液，水浴浓缩至100 mL，得到2 g生药/ mL的黄连水煎液。黄柏水煎液制备方法同黄连。

1.4.2 SD大鼠脾胃虚寒模型的制备SD大鼠，体重180～220 g，雌雄各半，按照随机分组法设立空白对照组（n=10），模型组（n=80）。空白对照组正常饲养，灌胃给予蒸馏水1 mL/100 g，一日2次。模型组每天两次灌胃，上午灌胃给予冷白醋（约4℃）1.2 ml/100 g体重［4］，下午灌胃给予精炼猪油脂1 ml/100 g体重［4-5］。造模期间，每天记录动物的体重、饮食量、饮水量。连续造模10天后，观察大鼠出现进食减少、倦卧少动、大便稀溏、肢体温度降低、体重较空白对照组大鼠轻等现象，即为造模成功。造模成功后按造模前后体重差值随机将模型组分成8组，分别为模型对照组、黄连高、中、低剂量组、黄柏高、中、低剂量组以及雷尼替丁阳性对照组。

1.4.3 给药方案根据临床上实验药物的最少使用剂量，按照大鼠与人的体表面积计算公式分别确定黄连和黄柏在实验大鼠的低剂量，并乘以相关的系数确定中剂量和高剂量，具体给药剂量详见表1。给药组灌胃给予相应的药物，给药体积均为1 ml/100 g体重，空白对照组及模型对照组给予等体积蒸馏水。每天1次，连续灌胃7 d。于末次给药前禁食12 h，给药后2 h，每只大鼠灌胃0.01%酚红溶液（含20%明胶）2 mL。20 min后取大鼠全血离心（3500 rpm，15 min）得到血清。

1.4.4 检测方法采用酶联免疫法分别测定血清中胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）、前列腺素E2（PGE2）含量。并取胃置于50 ml 0.5 mol/LNaOH溶液中，沿胃大弯剪开胃，充分洗下胃内容物，取5 ml离心（3000 rpm，10分钟）。吸上层溶液用UV-2250岛津紫外可见分光光度计于560 nm波长测其吸光度，计算胃排空率。胃排空率=（1-实测酚红吸光度）/酚红吸光度基值×100%。同时将洗净的胃在滤纸上吸干水分，测定胃重，计算胃重指数。胃重指数=胃重/体重×100%。将胃用生理盐水洗净后刮取胃粘膜约200 mg，加生理盐水2 mL于冰浴下制成匀浆，匀浆液3500 rpm离心15 min取上清液。以TBA显色法测MDA。

TBA法测MDA取大鼠胃新鲜匀浆2 mL分别加入已经编号的离心试管内。对照管加入2 mL蒸馏水，分别再加入1 mL生理盐水，于水浴振荡器中37℃温育振荡1.5 h，取出后加入10%的三氯乙酸，涡旋混合器上混匀。混匀后静置10 min，离心3500 rpm，5 min。取上清液2 mL加入0.67%的硫代巴比妥酸（含10%的三氯乙酸）1.5 mL，沸水浴加热15 min，冷却后532 nm测定吸光度［6］。MDA%＝（ΔA对照-ΔA样品）／ΔA对照× 100%。MDA是脂质过氧化物的产物，其值可直接反应脂质过氧化物的程度。

1.5 统计方法计量资料用（x±s）表示，采用SPSS16.0统计软件进行统计分析。所有统计检验均双侧检验，符合正态性和方差齐性的资料，采用单因素方差分析；不符合正态性和方差齐性的资料，采用秩和检验；P＜0.05即认为差异有统计学意义；P＜0.01即认为差异有高度统计学意义。

2 结果

2.1 对脾胃虚寒大鼠酚红胃排空、胃重指数、MDA的影响与模型对照组比较，黄连高剂量组对三项指标均没有显著性差异，黄连中、低两个剂量组皆能提高胃酚红排空率，降低胃重指数和MDA，统计有显著性差异。黄柏各剂量组对三项指标皆没有显著性差异。分析表明，针对脾胃虚寒模型大鼠的胃排空、胃重指数和MDA，黄连低剂量的改善作用比较显著。黄连的高剂量和黄柏三个剂量则均没有改善作用。结果见表1。

表1 对脾胃虚寒大鼠胃排空、胃重指数和MDA的影响（n=10，x±s）

2.2 对脾胃虚寒大鼠GAS、MTL、PGE2的影响与模型对照组比较，黄连高剂量组能升高血清PEG2含量，有显著性差异。黄连中剂量组能升高血清GAS、血清MTL和PEG2三项的含量，且其差异有高度统计学意义。黄连低剂量组对MTL和PEG2有升高作用，有显著性差异。分析表明，针对脾胃虚寒模型大鼠的GAS、MTL和PEG2，黄连中剂量的促进作用比较突出。黄柏三个剂量对三项指标没有改善作用。结果见表2。

表2 对脾胃虚寒大鼠GAS、MTL、PGE2的影响（n=10，x±s）

3 讨论

古今医药学者都非常重视苦寒伤胃之说，并且开展了相关的实验研究，验证了苦寒中药大剂量皆有普遍性的伤胃作用［7-8］。但也有学者提出苦寒中药有伤胃与健胃等多方面的双重作用，并作了相关的理论探讨［9］。中医临床关于脾胃虚损病证也常配伍使用一定量的黄连等苦寒中药，能取得较好的疗效，但缺乏系统的实验研究资料。因此，本次实验以黄连、黄柏两种常见的苦寒中药为代表，重点探索分析苦寒中药健胃的可能性。实验以黄连、黄柏的三种不同剂量为研究对象，以能够客观反映胃部变化的胃排空、胃重指数、胃肠激素和胃黏膜屏障状况为观察指标，探索分析苦寒中药健胃的可能性和内在机理。胃黏膜的保护机制主要体现在胃黏膜的损伤和抗损伤两方面。PGE2可营养胃黏膜及改善粘液含量，MTL、GAS为兴奋性胃肠激素，PGE2、MTL、GAS可以反应胃肠道的功能状态，同时也体现了胃黏膜抗损伤的保护能力。MDA为胃粘膜脂质过氧化产物，是胃黏膜氧化应激损伤的重要指标。上述指标能比较客观地综合评价试验药物健胃的作用。

胃重指数为胃湿重与大鼠体重的比值的百分比，大鼠在造模期间体重未有明显变化，实验中胃重指数增加是因为胃充血、水肿、炎症等导致，这也反映了模型动物胃受损伤的情况。

黄连中、低剂量对上述指标有改善效应，具有一定的治疗作用，黄连中剂量对PGE2、GAS、MTL胃肠激素作用显著，黄连低剂量则对胃排空和胃重指数作用明显，实验表明黄连在一定剂量具有健胃效应，并且不同的剂量，健胃的机理有差异。黄柏三个剂量对各项指标均无健胃效应。

通过分析两种典型苦寒中药黄连和黄柏对脾胃虚寒实验大鼠模型的影响结果可以初步认为，苦寒中药存在着健胃效应，但是健胃效应与中药种类的苦寒性能和剂量相关。这对临床充分地合理使用苦寒中药提供了实验依据。但是全面地探索苦寒中药对脾胃虚寒动物的影响，还需要扩大苦寒中药的种类，对更多的苦寒中药进行研究。

［1］田智勇，李振国.黄连的研究新进展［J］.时珍国医国药，2004，15（10）:704-706.

［2］杨周平，武志军.中药黄柏的药理作用和临床应用研究［J］.甘肃医药.2010，29（3）:329-313.

［3］李希辛.对苦寒药伤胃的理论探讨［J］.中国中药杂志，2001，11（26）:792-794.

［4］邱赛红，李飞艳.尹健康，等.两种大鼠脾胃虚寒模型制备方法的比较研究［J］.湖南中医学院学报，2004，24（6）:30-33.

［5］刘敏，周亚滨.附子理中汤治疗脾胃虚寒型胃溃疡机制的研究［J］.中医药学，2013，4（40）：42-44.

［6］白翠兰，王欢，等.大鼠主要脏器中脂质过氧化物MDA的比较研究［J］.内蒙古中医药大学学报.2010，5（25）：547-549．

［7］邱赛红，李飞艳，尹健康，等.9味苦寒药对小鼠胃肠运动与肝肾功能影响的实验研究［J］.湖南中医学院学报，2004；24（5）:2-6.

［8］邱赛红，孙必强，李磊，等.常用苦寒药过量使用对胃粘膜屏障功能影响的实验研究［J］.中国医药导刊，2007；9（2）:140-142.

［9］薛益明，周晓虹.苦寒药在虚损病中的应用［J］.吉林中医药，1998；5:2.

Effect of Rhizoma Coptidis and Cortex Phellodendri on Experimental Model Rat of Deficient Cold of Spleen and Stomach

CHEN Jianzhang，YIN Jiankang，HOU Chunjiu，WANG Xiaoping，TANG Chunhong，TANG Canhui
（Department of pharmacy，Jiangxi Medicine College of Traditional Chinese，Jianxi Province Fuzhou，344000，China）

Objective Observing the effect of different doses extract of common Rhizoma Coptidis and Cortex Phellodendri on experimental model rat of deficient cold of spleen and stomach.Methods Preparation experimental model of rats of deficient cold of spleen and stomach，Rhizoma coptidis and Cortex phellodendri two kinds of bitter cold drug decoction of different doses were the test drug.By detecting the rate of gastric emptying，gastric mass index and serum gastrin（GAS），motilin（MTL），prostaglandin E2（PGE2）indicators，the effects of the two drugs on rats of deficient cold of spleen and stomach were observed.Results Rhizoma coptidis medium and low dose group can significantly increase the rate of gastric emptying of phenol red（P＜0.05，P＜0.01），Rhizoma coptidis medium and low dose group can significantly reduce stomach weight index（P＜0.01）；Rhizoma coptidis high dose group significantly increased serum prostaglandin E2（P＜0.05）content，Rhizoma coptidis medium dose group significantly increased serum gastrin，motilin and prostaglandin E2（P＜0.01），Rhizoma coptidis low dose group significantly increased serum motilin and prostaglandin E2（P＜0.05）.Conclusion Rhizoma coptidis medium and low dose group of experimental model of rats of deficient cold of spleen and stomach all had very good treatment effect，had a good effect on invigorating the stomach，and the doses of the therapy effect was more obvious.Cortex phellodendri on experimental rat model of deficient cold of spleen and stomach had no obvious improvement.

Rhizoma coptidis；Cortex phellodendri；deficient cold of spleen and stomach；gastrin；motilin；prostaglandin E2；animal experiment

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.10.069

1672-2779（2015）-10-0134-03

：张文娟本文校对：姜国贤

2015-02-11）

江西省卫生厅中医药基金重点课题项目（No：2010Z04）；抚州市科技计划项目（No：2014007）