受体羊对胚胎移植效果影响的研究

韩丽娟

（山东省青州市畜牧局,青州 262500）

受体羊对胚胎移植效果影响的研究

韩丽娟

（山东省青州市畜牧局,青州 262500）

试验对受体羊埋植自制型阴道海绵栓13 d进行同期发情处理，并根据分组安排分别在撤栓的同时肌肉注射PMSG 200 IU/只、第1次发情的同时肌肉注射LHRH-A325 μg/只或16.7 μg/只或不注射药物，观察胚胎移植效果。结果表明：受体在撤栓后不注射药物组的移植利用率各组间均有显著差异（P<0.05），移植妊娠率各组间均没有显著差异（P>0.05）。受体以往的繁殖情况对移植妊娠率有极显著影响（P<0.01）。受体卵巢上有功能黄体存在时，卵泡的有无及大小对移植妊娠率的影响较小（P>0.05）。

绵羊；胚胎移植

胚胎移植（embryotransfer，ET）技术是在短时间内迅速扩大优良种畜的有效方法。提供胚胎的母畜称为供体（donor），接受胚胎的母畜称为受体（recipient）。虽然，国内外对绵羊及胚胎移植技术的研究已有多年历史，但在实践应用中往往受到各种因素的影响，效果还不太稳定。

1 材料

1.1 试验动物

受体羊为东北细毛羊、半细毛羊、东北半细毛羊与小尾寒羊的杂交羊及肉用杂种羊，共367只。

饲养方式相同：为全年半放牧半舍饲的方式，试验期间以舍饲为主。精料组成：豆饼10%+玉米25%+食盐0.3%+预混料2.7%。

1.2 试验药品

释放型阴道海绵栓：自制；CIDR：新西兰哈密尔顿生物公司产；孕马血清促性腺激素（PMSG）：1 000 IU/支，宁波市激素制品有限公司；垂体促卵泡素（FSH）：100 IU/支，宁波市激素制品有限公司；氯前列烯醇（cloprostenol）：0.2 mg/支，宁波市激素制品有限公司；促排卵素3号（LHRH-A3）：20 IU/支，宁波市激素制品有限公司；绒毛膜促性腺激素（HCG）：100 IU/支，宁波市激素制品有限公司；酒精，碘酒，生理盐水，双蒸水，新洁尔灭，青霉素，链霉素，等等。

1.3 仪器与设备

Motic SMZ-140体视显微镜，Motic SMZ-140体视显微镜（麦克奥迪实业集团有限公司制造）；手术移植活动保定车8台（自制）；MICROLIGHT150型双穿刺腹腔镜（澳大利亚产）；移植针（澳大利亚Castell公司提供）；常用手术等器械（国产）。

2 方法

2.1 受体的胚胎移植

为防止手术时腹压过大而造成操作困难和生殖器官的损伤，于手术前24 h将受体羊单独圈养，断食，空腹。手术器械等用0.15%的新洁尔灭溶液浸泡30 min进行常规消毒。

受体羊在其乳房下3～5 cm腹中线两侧各作一切口，借助腹腔镜和子宫钳翻动、拨开卵巢系膜，暴露卵巢以观察两侧卵巢上的黄体情况。将判定合格的受体羊黄体侧子宫角前端用子宫钳牵引出腹腔外，并用钝针在子宫角前端无血管处扎孔，以装有合格胚胎的移植针穿过扎孔处移入子宫角内腔中，之后将子宫角放回腹腔，两侧切口各作一针常规缝合、消毒，同时肌肉注射青、链霉素各1支。

2.2 受体移植后观察及饲养管理

受体羊移植手术后即少量逐步地给水和饲料，第2天放回大群放牧，维持较高的营养水平，细心观察，避免产生应激。每天早、晚2次定时试情，观察受体羊的返情和流产情况。移植后2个情期不返情者，按妊娠母羊进行饲养管理。

2.3 受体羊同期发情处理

埋植阴道海绵栓中的148只受体羊撤栓后随机分组，并在第1次表现发情时用不同的药物组合进行处理：第1组，200 IU PMSG+16.7 μgLHRH-A3；第2组，200IU PMSG+25 μg LHRH-A3；第3组，200 IU PMSG；第4组，25μgLHRH-A3；第5组，生理盐水。具体处理方法见表1。

表1 受体羊撤栓后不同药物处理方法

2.4 数据处理

本试验数据采用SAS软件进行统计分析。

3 结果与分析

3.1 受体撤栓后不同药物处理组合对胚胎移植的影响

从表2可见，在移植利用率方面，第1组（60.87%）与其他4组间均没有显著差异（P>0.05）；第5组与第3、4组间也没有显著差异（P>0.05）；第4组与第3组间差异显著（P<0.05）；第2组与第3组间差异极显著（P<0. 01）。移植妊娠率在5组之间没有显著差异（P>0.05），但注射生理盐水的第5组最低（57.89%），注射200 IU PMSG+25 μgLRH-A3的第2组最高（68.42%）。

表2 受体羊撤栓后不同药物处理组合对胚胎移植的影响

3.2 受体羊以往繁殖情况对移植效果的影响

本组试验通过对受体羊以往繁殖记录情况的分析，选择具有不同繁殖史（即分为正常妊娠生产、上次未受胎和未经产的育成羊3种情况）的羊作为受体进行胚胎移植试验，比较移植后该群受体羊的妊娠情况。具体结果见表3。

表3 受体羊以往繁殖情况对移植效果的影响

由表3可见，上次未受胎母羊的移植妊娠率（40.30%）与以往繁殖机能正常即有正常生产记录母羊的移植妊娠率（58.97%）和育成羊（63.64%）相比，均差异极显著（P<0.01）。但繁殖机能正常组羊与育成羊组差异不显著（P>0.05）。

3.3 受体卵巢上卵泡对胚胎移植结果的影响

对211只移入胚胎受体羊卵巢上的卵泡和黄体情况进行统计分析。所有移入胚胎的受体羊卵巢上都有一级黄体或有一级黄体存在的同时，还有直径小于3 mm、个数少于2个的卵泡。

由表4可见，受体羊卵巢上存在一级黄体并有卵泡的移植妊娠率（31.03%）低于无卵泡的受体羊（58.24%），但两者间差异不显著（P>0.05）。由表5可见，当受体羊卵巢上存在一级黄体卵泡直径在1 mm以下移植后的妊娠率（31.25%）高于卵泡直径在1～3 mm的妊娠率（30.77%），但差异也不显著（P＞0.05）。

表4 卵巢上的卵泡对受体羊移植妊娠率的影响

表5 卵巢上直径小于3 mm的卵泡对受体羊移植妊娠率的影响

4 讨论

4.1 受体撤栓后不同药物处理组合对胚胎移植的影响

本试验结果表明，受体撤栓后注射200 IU PMSG+25 μg LHRH-A3的妊娠率最高（68.42%），但与其他组相比均差异不显著（P>0.05），说明受体在埋植阴道栓后再注射PMSG和LH类的激素会影响受体的发情及妊娠，外源的PMSG和LH类药物可以促进卵泡的发育、排卵和黄体的形成，有利于胚胎的移植存活。

4.2 受体以往的繁殖情况对其妊娠率的影响

在胚胎移植试验及生产实践中受体羊的选择和使用既关系到胚胎移植效果，又关系到移植费用。所以有必要研究受体羊以往不同的繁殖情况对胚胎移植的影响。

本试验对211只受体羊以往的繁殖情况进行了调查，上次未受胎羊的受胎率极显著低于繁殖机能正常组（P<0.01）和育成羊组（P<0.01）。因此，为了提高胚胎移植的成功率，应选有正常繁殖史的母羊做受体羊。育成羊也可用做受体羊，可以得到相近的移植妊娠率。

丁建平等［1］报道，受体羊第3次重复同期发情有效率、功能黄体形成比率均显著低于第1次（P<0.05）；第2次低于第1次，但差异不显著（P>0.05）；受体羊连续3次手术移植其妊娠率分别为66.2%、66.7%和66.7%，胚胎成羔率分别为54.9%、55.7%和50.0%，3次结果间均无显著差异（P>0.05）。表明受体羊的重复移植并不影响妊娠率。

4.3 受体卵巢上卵泡和黄体对胚胎移植的影响

受体羊的同期发情处理对移植利用率和受胎率有直接影响，生理状况越接近，同期自然状态越有利于胚胎着床、发育和妊娠的维持。不同个体对同期发情处理产生反应所需药物剂量存在差异。在大规模生产处理中，以相似的激素剂量进行处理时必定会对不同个体发情和发情后的生理过程产生影响，使受体羊卵巢上的卵泡在移植时处于有无或大、小不一的状态。激素处理开始时卵巢上卵泡状态在个体间的不一致，是导致同期发情发生变异的一个重要原因［2］，从而在发情后第7天手术时卵巢上呈现不同大小的卵泡。参与募集的卵泡并非都能够发育排卵，大多数卵泡会发生闭锁退化，少量被选择优势化卵泡也并非都能成熟排卵。因此，卵泡闭锁可发生在卵泡发育的各个阶段。决定优势卵泡是否成熟排卵的主要因素是卵泡波与黄体溶解的同步性［3］。当有黄体存在时，虽然LH振幅较高，但高孕酮浓度致使LH释放频率较低，只有同时具备高振幅和高频率才能使LH浓度升高到促进卵泡成熟和排卵的水平［4］。

在卵泡生长过程中，激素失调可导致以后形成的黄体功能异常，如：FSH、LH分泌的紊乱。优势卵泡的颗粒细胞分泌的抑制素不足，不能完全抑制FSH分泌，使其余卵泡不能大部分闭锁，改变了卵巢内环境，影响了优势卵泡的发育。

从本试验的结果可以看出：受体卵巢上当存在一级黄体时，卵巢上有无直径1～3 mm的卵泡并不影响胚胎的移植妊娠率。

［1］ 丁建平，章孝荣，琚书存，等.受体羊重复使用对同期发情和胚胎移植效果的影响［J］.中国畜牧兽医，2005，32（6）：31-32.

［2］ 陈兵，魏泓.羊卵泡发育动态变化及超数排卵方法的改进［J］.中国兽医学报，2004，24（2）：202-204.

［3］ 吴延光，于元松，谭景和.哺乳动物卵泡发育模式及其调控机理［J］.动物学杂志，2002，37（6）：83-86.

［4］ MihmM，Baguisi A，Boland MP，et al.Association between the duration ofdominance ofthe ovulatoryfollicle and pregnancyrate in beef heifers［J］.Reprod Fertil，1994，102：123-130.

S826.3

A

2095-3887（2015）06-0068-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.06.022

2015-08-13

韩丽娟（1972-），女，畜牧师，研究生学历。研究方向：动物遗传育种与繁殖。