PCNA在颈动脉粥样硬化斑块形成血管中的表达

徐敬轩，栾新平，木依提，贾宏宇，苑 杨，王瑞嘉

（新疆医科大学第二附属医院神经外科，乌鲁木齐 830028）

PCNA在颈动脉粥样硬化斑块形成血管中的表达

徐敬轩，栾新平，木依提，贾宏宇，苑 杨，王瑞嘉

（新疆医科大学第二附属医院神经外科，乌鲁木齐 830028）

目的：探讨颈动脉粥样硬化斑块形成后血管内膜中PCNA的表达。方法：我院2006年8月～2013年6月CEA术后血管内膜80例为实验组，对照组选取骨肿瘤截肢正常动脉血管内膜标本10例，对两组进行免疫组织化学染色，通过对阳性细胞数、着色强弱等指标的观察，对比两组间PCNA表达的阳性分级。结果：实验组与对照组相比较，两组PCNA阳性分级对比具有显著性差异。结论：PCNA的表达增强在颈动脉粥样硬化斑块形成过程中可促进血管平滑肌细胞增殖，为粥样硬化斑块形成的重要影响因子。

颈动脉粥样硬化斑块；PCNA；表达

缺血性脑血管病是严重危害人类健康的疾病之一。研究表明，颅外段颈动脉狭窄是引起其发生的主要原因之一，对颈动脉粥样硬化斑块形成已成为现阶段研究的热点，其产生可能与增殖细胞核抗原（Proliferation Cell Nuclear Antigen，PCNA）的表达增强有关。本研究通过对粥样硬化斑块形成的血管内膜中PCNA的表达进行观察，探讨其表达情况，报道如下：

1　资料与方法

1.1病例资料 实验组为人体颈动脉粥样硬化斑块标本80例，均来自我院2006年8月～2013年12月具有完整影像学资料，行颈动脉粥样硬化斑块剥脱术（CEA），且术后经病理证实的病例；对照组取材于骨肿瘤截肢正常动脉血管内膜标本10例。

1.2PCNA基因mRNA表达的检测 提取标本总mRNA，使用RT-PCR方法检测各组中PCNA基因mRNA表达水平。设计引物：正义链5'-TAG TGG CCA CAACTC CGC CAC CAT-3'，反义链5'-GGT CAGGTT GCG GTG GCA GCG GTA-3' 20μL，反应体系：TaqDNA聚合酶0.5U，引物各50pmol/L。PCR反应条件：95.0℃变性10min后，94.0℃25 s、58.0℃ 25 s、72.0℃ 50s顺序共40次。最后72℃延伸8min。电泳，凝胶成像系统上摄像。

1.3PCNA表达阳性信号 显微高倍视野（400倍）下0.25×0.25mm2×4面积中细胞浆中棕黄色颗粒状沉淀物（阳性细胞数）。阳性细胞数＜5%为0分，5%～35%为1分.35%～70%为2分.＞70%为3分。着色强弱计分：不着色为0分，弱着色（呈淡棕色）为1分，强着色（呈明显的黄棕色）为2分。阳性分级：以上两项相加，0分为（-），2分为（±），3分为（+），4分为（++），5分为（+++），+～+++计为阳性，-～±计为阴性。

1.4统计学方法 统计学处理应用SPSSl7.0统计分析程序包，差异的显著性用方差分析，P＜0.05者表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组间阳性细胞数评分比较 通过观察，实验组阳性细胞数小于5%2例，5～35%12例，35～70%42例，大于70% 24例；对照组阳性细胞数小于5% 7例，5～35% 2例，35～70% 1例，大于70%，0例，见表1。

表1　两组间阳性细胞数评分

2.2两组间着色强弱情况评分 两组着色强弱情况，实验组不着色1例，弱着色8例，强着色33例；对照组不着色8例，弱着色2例，强着色0例，见表2。

表2　两组间着色强弱情况评分

2.3两组间阳性分级比较 两组数据相加，根据所得评分，+～+++计为阳性，-～±计为阴性。进行两组间阳性分级对比，P＜0.05，说明两组间存在显著差异。（见表3）

表3

3　讨论

PCNA是一种存在于细胞核中，分子量36kD的非组蛋白［1］，是DNA聚合酶的辅助蛋白，它在静止期细胞含量很少，或仅在增殖细胞中合成、表达［2］，可评价细胞增殖状态及细胞增殖活性［3］。目前绝大部分对PCNA的研究均用于肿瘤基因治疗范畴，研究表明，PCNA在胃癌、结肠癌、鼻咽癌等肿瘤中均有表达，根据PCNA的溶解特性，分为可溶性和不可溶性两大类［4］。而通过免疫荧光技术已经证实，不溶性PCNA在DNA复制中起主要作用。在正常增殖和转化的细胞当中，PNCA的量可发生较大的变化，在G0-G1期细胞并没有明显的PCNA表达，自G1晚期，可见PNCA的表达开始大幅度增加，在S期上升至最高峰，到G2-M期后又逐渐下降［5］，该变化与DNA合成基本保持一致［6］。因此，PCNA可视为平滑肌细胞（SMC）增殖的标志，主要在细胞分裂时协助DNA引导链和随从链的合成，PNCA基因表达增强与平滑肌细胞的增殖活跃具有相关性［7］。

颈动脉狭窄的病理表现为以平滑肌细胞增生为特征的内膜增生和粥样斑块形成，而SMC增生是中心环节。现阶段的研究尚未完全阐明SMC增生的机制，故提出一个假设，SMC的增生可能与PCNA的表达增强有关。

在本项研究中，实验组PNCA阳性细胞数除1例小于5%外，其余均有不同程度表达，而在对照组中仅有极少量的表达，同时在着色强弱方面得到了较为相似的结果，可以说明PNCA在颈动脉粥样硬化斑块形成的血管内膜中有不同程度的表达。通过两组间进行阳性分级比较（P＜0.05），两组间差异有统计学意义，从而进一步证实PNCA的表达增强，可促使平滑肌细胞的增殖，继而形成动脉粥样硬化斑块。

综上所述，PNCA表达增强可作为颈动脉粥样硬化斑块形成的重要影响因子。通过本研究，可初步阐明PNCA表达的增强与颈动脉粥样硬化斑块的形成具有相关性。同时也为颈动脉粥样硬化斑块的基因治疗提供了理论依据，抑制PNCA的表达，可能减少粥样硬化斑块的发生，为其在基因水平的治疗上提供新的思路，但本研究尚存在病例数较少，还需建立动物模型进一步实验论证。

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PCNA expression in vascular formation in carotid atherosclerotic plaque

Xu Jing-xuan， Luan Xin-ping， Mu Yi-ti， Jia Hong-yu， Yuan Yang， Wang Rui-jia
（Department of Neurosurgery， The Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Wulumuqi 830028， China）

Objective To investigate the expression of PCNA after vascular intima of carotid atherosclerotic plaque. Methods In our hospital from 2006 August to 2013 June， 42 cases of vascular intima after CEA as the experimental group， the control group selected endometrial specimens of bone tumor and normal amputation in 10 cases of arterial， immunohistochemical staining was performed on two groups， through the observation of the number of positive cells， coloring intensity index， the positive expression of PCNA than grade two between group. Results there was significant difference between the two groups of positive grading （P＜0.05）， indicating that the expression of PCNA in experimental group were higher than that of control group. Conclusion the increased expression of PCNA promotes the proliferation of vascular smooth muscle cells， play a role in the formation of carotid atherosclerotic plaque.

carotid atherosclerotic plaque； PCNA； expression

R743.3

A

1673-016X（2015）03-0012-02

2015-03-03

栾新平，E-mail:luanxinping4324177@163.com