贲门癌组织中CD133蛋白的表达及与幽门螺杆菌感染的关系

孙江涛（通讯作者） 肖中岳 宋开放

【摘 要】 目的：研究贲门癌组织中CD133蛋白表达及其与幽门螺杆菌（H.pylori，HP）感染的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测62例贲门癌手术切标本及41例癌旁正常组织中CD133蛋白的表达，采用改良Giemsa染色法检测103例标本中HP感染情况，分析CD133蛋白表达在贲门癌发生中的作用及其与HP感染的关系。结果：62例贲门癌组织中有30（48.4%）例出现CD133蛋白阳性表达，而41例癌旁正常组织中仅有11例（26.8%）出现CD133蛋白阳性表达（P=0.023）。在有HP感染标本中CD133表达率为65.8%（50/76），而在没有HP感染标本中CD133表达率为25.9%（7/27）。经Spearman相关检验，CD133表达与幽门螺杆菌感染呈正相关（r=0.655，P<0.001）。结论：CD133蛋白参与了贲门癌的发生发展，且与幽门螺杆菌感染密切相关。

【关键词】CD133蛋白；幽门螺杆菌感染；贲门癌

1 引言

由幽门螺杆菌感染（H.pylori，HP）引起的慢性炎症被公认为贲门癌发生的重要原因。这些慢性炎症会导致胃粘膜反复的损伤与修复，从而导致贲门粘膜过度增生，有丝分裂错误的概率增加，进而导致贲门癌的发生。近期研究发现，这些能够导致贲门癌发生的炎症环境与周围组织骨髓衍生细胞（bone marrow-derived cells，BMDCs）的引导和植入相关[1-2]。而BMDCs表面抗原标志物CD133更是是目前各种肿瘤研究的热点标志物之一。CD133蛋白已在近期的研究中被证实与大肠癌，脑胶质瘤和肝癌的发生有关[3-5]。但调控其表达原因尚不明确。本研究应用免疫组化技术测定贲门癌及癌旁正常组织中CD133的表达情况，采用改良Giemsa染色法检测103例标本中幽门螺杆菌感染情况，探讨CD133表达与贲门癌发生的关系及其与幽门螺杆菌（H.pylori，HP）感染的关系.

2 材料和方法

2.1 材料

随机选取我院肿瘤外科近一年来贲门癌术后男51例女11例共62例标本，同时选取41例癌旁组织（标准为距癌缘大于5cm并经组织学证实为正常组织）。所有组织用10%甲醛溶液固定，连续切片3张（厚度4μm），第一张行HE染色；第二张免疫组化染色，第三张备用。患者均为首次发现贲门癌，术前未经过放化疗。据2003年国际抗癌联盟标准病理TNM分期，Ⅰ期21例，Ⅱ期19例，Ⅲ期15例，Ⅳ期7例。

2.2 方法

2.2.1 试剂：一抗，鼠抗人CD133单克隆抗体，购自德国Miltenyi Biotec公司PV9000免疫组化试剂盒购北京中杉金桥公司，Giemsa染料购自上海三爱思公司。

2.2.2免疫组化：严格按照PV9000试剂盒操作步骤进行。常规脱蜡、梯度乙醇水化，抗原采用微波热修复，滴加一抗后4°保存>12小时。3% H2O2灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗显色，苏木精复染，树脂封片

2.2.3 HP检测：采用改良Giemsa染色法，常规脱蜡，梯度乙醇水化，2% Giemsa染液染色25 min，洗去染液，使用乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

2.3 结果判定

判定采用双盲法进行，两位病理专家同时、独立阅片，有差异者进行共同阅片后判定。免疫组织化学染色结果显示：阳性细胞位于腺腔，定位于胞膜，染色呈金黄色。根据阳性细胞所占病变细胞的百分比分为3个等级：1%～25%为（+），26%～50%为（++），>50%为（+++）。

2.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件包统计分析本次实验数据。贲门癌和癌旁正常组织中CD133的表达差异分析采用χ2检验或者Fisher确切概率法，CD133的表达与HP感染的相关性分析采用Spearman相关性分析

3 结果

3.1 CD133蛋白在贲门癌与癌旁正常组织中的表达情况。

CD133蛋白阳性表达定位于腺腔细胞的细胞膜表面，62例贲门癌组织中共检测出CD133蛋白阳性表达30例（48.4%），呈金黄色，着色明显。41例癌旁正常组织CD133蛋白阳性表达11例（26.8%），呈淡黄色，着色较轻。经统计学分析，CD133蛋白在两组之间的表达具有明显差异（P=0.023）。（见图1）

图1 CD133蛋白在贲门癌及癌旁组织中的表达

A：癌旁组织中CD133 的表达 B：贲门癌组织中CD133的表达（SP×200）

3.2 CD133蛋白表达与HP感染的关系。

在103例标本中共检出HP感染76例，其CD133阳性表达率为65.8%（50/76），而在没有HP感染的27例标本中CD133表达率为仅为25.9%。经Spearman相关检验，CD133表达与幽门螺杆菌感染呈正相关（r=0.655，P<0.001）。（见表1）

表1 CD133蛋白表达与HP感染的关系

组别 n 有幽门螺桿菌感染 无幽门螺杆菌感染 P值

CD133+ CD133- 阳性率

（%） CD133+ CD133- 阳性率

（%）

贲门癌 62 31 15 67.39 5 11 31.25 0.011

癌旁正常组织 41 19 11 63.33 2 9 18.18 0.012

4 讨论

已有研究证实，BMDCs在贲门癌的发生中起着重要作用，而由HP感染引起的长期慢性炎性反应对BMDCs具有募集作用。CD133被认为是包括造血干细胞在内的BMDCs的有效标记物[5-7]。CD133被认为是包括造血干细胞在内的BMDCs的有效标记物[8-10]。CD133即Homo sapiens prominin 1（PROM1），由位于人类4号染色体（4p15.32）的编码基因（GeneID：8842）编码，其转录蛋白（CD133蛋白）分子量为120KD，具有5个跨膜区[11]。最近研究显示，CD133蛋白与大肠癌[3]，脑胶质瘤[4]，和肝癌[5]的发生有关。本研究发现，CD133蛋白在贲门癌组织中的阳性表达率为48.4%，高于癌旁正常组织26.8%（P=0.023），也提示CD133蛋白有可能参与了贲门癌的发生。Seiji Futagami等[12]在最近的研究中意外发现，长期感染HP的沙鼠出现CD133阳性细胞的概率明显高于短期感染的沙鼠，且CCR2的表达与CD133阳性细胞的出现密切相关。由此我们推测CD133蛋白的表达与HP感染有关。而在本研究中，经HP感染的76例标本中，CD133阳性率为65.8%（50/76），没有HP感染的27例标本中CD133阳性率仅为25.9%。经Spearman相关检验，CD133表达与HP感染呈高度正相关。据此我们推测，HP感染是导致CD133蛋白异常表达的重要原因。

综上所述，贲门癌组织中CD133蛋白阳性表达率明显高于癌旁正常组织，H.pylori感染可以诱导CD133蛋白的表达，且这种异常表达在贲门癌的发生中起重要作用。而HP感染引起CD133蛋白表达的分子机制，仍需进一步研究。

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通訊作者：

孙江涛，男，1971年12月，硕士研究生，副教授，主要从事胸部肿瘤的手术及综合治疗。