品种及生长年限对泰山四叶参多糖含量的影响△

陈宝芳，刘政波，毕研文，仉劲

(泰安市农业科学研究院，山东 泰安 271000)

品种及生长年限对泰山四叶参多糖含量的影响△

陈宝芳*，刘政波，毕研文，仉劲

(泰安市农业科学研究院，山东 泰安 271000)

目的：研究品种及生长年限对泰山四叶参多糖含量的影响。方法：采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，以葡萄糖为对照品，测定波长490 nm。结果：泰参2号1～4年生多糖含量分别为10.28%、14.24%、12.77%、11.27%；泰参3号1～4年生多糖含量分别为10.95%、12.85%、14.13%、13.06%。结论：泰山四叶参不同品种多糖含量有差异，泰山2号及3号两品种多糖含量皆高于对照泰参1号。生长年限对泰山四叶参品种多糖含量的影响表现为：生长期1～2年或1～3年随生长年限延长多糖含量逐年增加，2～3年生多糖含量达到高峰，3年以后则表现下降趋势。

泰山四叶参；品种；生长年限；多糖含量

四叶参codonopsislanceolatabenth.et hook.F.系桔梗科Campanulaceae党参属Codonopsis多年生藤蔓草本植物，又名轮叶党参、羊乳，泰安当地俗称泰山四叶参[1]。以根入药，有清热解毒、祛痰镇咳、强壮滋补的作用，浸泡白酒，常饮能舒筋活血 健身补气，被誉为“泰山之宝”[2]。现代药理研究泰山四叶参具有较好的抗氧化能力和降血糖作用[3-6]。多糖类是构成生命的基本物质，中草药植物中的多糖更是当前药物研究热点之一[7]。四叶参根中含丰富的多糖类成分[8]，王德才等[9-12]对四叶参多糖提取及含量测定进行了研究，目前涉及四叶参不同品种的多糖含量测定与比较未见报道。本试验参考文献[9-12]方法，采用苯酚-硫酸法测定泰山四叶参3个品种1～4年生根的多糖含量，为今后确定泰山四叶参的合理采收时间及质量评价标准的建立提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 药材来源

1.1.1 药材来源 四叶参采自泰安市农业科学研究院育种基地育成品种泰参2号、泰参3号(杂交种)，泰参1号为对照品种，参试品种均采用生长1～4年的四叶参鲜根，收获时间2013年10月30日。采集样本首先洗净，晾干表面水分。台式调节式切片机(型号DXQ-130B)切片、电热恒温鼓风干燥箱(型号DHG-9143B5-111)在80 ℃下烘干降至水分含量10%称重，粉碎后过4号筛冷藏备用。

1.1.2 试剂与仪器 葡萄糖标准品(山东齐都药业有限公司，纯度≥98%)；精制泰山四叶参多糖(本实验室自制)；其余试剂均为国产分析纯；岛津UV-2450型紫外可见分光光度计；RE-5205型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；JAl2003B型电子分析天平(上海精天仪器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 泰山四叶参多糖的提取与精制 称取泰山四叶参粗粉80 g，加4倍量石油醚回流脱脂2次，每次2 h；滤渣加4倍量80%乙醇回流提取2次，每次2 h。经脱脂、醇提后的滤渣在60 ℃烘干，分别加6、5、4倍量蒸馏水在沸水浴中浸提3次，每次3 h，合并滤液，减压浓缩至400 mL左右。以每100 mL浓缩液加50 mL氯仿正丁醇(4∶1)液，剧烈振荡30 min，静止过夜，以4000 rpm·min-1离心12 min，去除下层氯仿及中层变性蛋白，取上部水层再重复去蛋白操作，至无明显中层为止。收集去蛋白后的上部水层，旋转蒸发减压浓缩至150 ml左右，加无水乙醇至溶液含醇量达80%，静置过夜，以4000 rpm·min-1离心12 min，收集沉淀物，再依次用无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤各2次。沉淀物置60 ℃真空干燥箱中干燥，即得精制多糖17 g。

1.2.2 葡萄糖标准溶液的配制 精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品100 mg，加适量水溶解，转移至100 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，配成1 mg·mL-1葡萄糖标准液备用。

1.2.3 5%苯酚溶液的配制 取密封完好的无色的苯酚10 g，加蒸馏水200 mL溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

1.2.4 标准曲线的制作 分别吸取葡萄糖标准液10、20、40、60、80、100 μL置于大试管中，各补加蒸馏水至2.0 mL，葡萄糖浓度分别为5、10、20、30、40、50 μg·mL-1，然后各加入5%苯酚溶液1 mL，缓慢沿壁加浓硫酸5 mL，混匀，放置5 min后，再沸水浴加热15 min，流水冷却至室温，在波长490 nm处测定吸光度。以蒸馏水代替葡萄糖溶液作空白对照。结果表明，葡萄糖浓度在5～50 μg·mL-1范围内，吸光度与浓度具有良好的线性关系。以浓度(C，μg·mL-1)为纵坐标，吸光度(A)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.014 9X-0.008 5，r=0.998 6。

1.2.5 换算因子的测定 精密称取干燥至恒重的精制泰山四叶参多糖35 mg，置100 mL容量瓶中加蒸馏水，定容至刻度，作为多糖储备液。精密吸取多糖储备液0.2 mL 3份，按标准曲线制作方法测定其吸光度。经测定，3份多糖储备液的吸光度分别为0.628、0.627、0.641，平均0.632，从回归方程中求出多糖液中折合葡萄糖的浓度为85.97 μg·mL-1。按下式计算换算因子，测得F=0.407 1。

F=W/C·D(W为多糖的重量/μg，C为多糖液中折合葡萄糖的浓度/μg·mL-1，D为稀释因素)

1.2.6泰山四叶参多糖含量的测定 精密称取3份泰山四叶参粉末各0.5 g，分别置圆底烧瓶中加80%乙醇150 mL回流提取3 h，趁热抽滤，滤渣用80%乙醇洗涤3次。然后滤渣连同滤纸置烧瓶中，加蒸馏水150 mL沸水浴加热提取3 h，趁热抽滤，用热水洗涤烧瓶和滤渣，洗液并入提取液中，待冷后转移于250 mL容量瓶中，补加蒸馏水定容至刻度，如此制作样品溶液3份，置冰箱中备用。

精密吸取样品溶液0.15 mL，按标准曲线制作方法测定其吸光度。每份样品溶液重复操作3次，取平均吸光度。3份样品溶液的平均吸光度分别为0.335，0.334，0.333，平均0.334。从回归方程中求出样品溶液中折合试管中葡萄糖浓度为45.97 μg·mL-1。按下式计算泰山四叶参中多糖的百分含量。

多糖含量(%)=C·D·F/W×100%(W为四叶参样品的重量/μg，C为样品液中折合葡萄糖的浓度/μg·mL-1，D为稀释因素)

2 实验结果与分析

2.1 葡萄糖含量标准曲线

不同生长年限四叶参多糖含量由图1可知，得到的葡萄糖含量标准曲线回归方程为：Y=0.014 9X-0.008 5，r=0.998 6，在波长490 nm处测定吸光度。以浓度(C)为纵坐标，吸光度(A)为横坐标，制备标准曲线，结果表明，葡萄糖浓度在5～50 μg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系。

表1 四叶参不同浓度下的吸光度

图1 葡萄糖含量标准曲线

2.2 不同品种相同生长年限泰山四叶参多糖含量及差异性分析

从表2结果与分析看出，1年生泰山四叶参多糖含量比较，泰参3号>泰参2号>泰参1号，泰参3号与对照差异显著；2年生泰山四叶参多糖含量比较，泰参2号>泰参3号>泰参1号，泰参2号多糖含量达到高峰，与对照差异极显著；3年生泰山四叶参多糖含量排序为，泰参3号>泰参2号>泰参1号，三品种之间比较差异达极显著水平。4年生泰山四叶参品种间多糖含量比较，位序与3年生相似，不同点是泰参3号多糖含量下降幅度小于泰参2号。相同生长年限的泰山四叶参品种间多糖含量比较结果表明，泰参2号以2年生质量为佳，泰参3号以3年生品质为佳。

2.3 生长年限对泰山四叶参品种多糖含量的影响及多重比较

表3、图2为不同生长年限泰山四叶参品种的多糖含量比较，分析表明，泰参2号、泰参1号1～2年生根多糖含量随生长年限而增加，2年生多糖积累达到高峰，与其它年限之间比较达极显著水平，3～4年生随生长期延长多糖积累表现下降，两品种的多糖积累趋势相同。泰参3号1～3年生根多糖含量随生长年限而增加，3年生根多糖含量最高，与

表2 泰山四叶参不同品种相同生长年限多糖含量及分析

1～2年生根多糖含量比较达极显著水平，4年生多糖含量表现下降趋势。其多糖积累趋势与其它两品种不尽一致，可能与泰参3号为杂交种有关。综合分析表明，三品种的多糖含量以2～3年生的较高，3年以上多糖含量降低。提示泰山四叶参药材若以多糖为利用目的，种植2～3年即可。

表3 同一品种不同生长年限泰山四叶参多糖含量及分析

图2 1～4年生泰山四叶参不同品种多糖含量差异

3 结论与讨论

采用苯酚-硫酸法测定泰山四叶参多糖含量，葡萄糖浓度在5～50 μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系。结果表明，泰山四叶参品种之间多糖含量有一定差别。本研究结论与孙磊等[13]不同丹参品种酚酸B含量存在差异结论一致。

本实验首次测定分析了泰山四叶参不同品种的多糖含量，结果表明，泰山四叶参三品种的多糖含量以泰参2号，泰参3号品种较高。泰山四叶参连续生长3年或3年以上多糖含量开始下降，与周茂金[14-15]2～4年生四叶参多糖含量逐年增加的结论有所不同，可能与品种特性、产地、生态环境、生长年限、采收季节、药材质量有较大变化有关，具体原因尚待研究。

多糖是泰山四叶参主要成分之一，具有免疫药理活性，在实际应用中建议以多糖含量作为评价四叶参药材的质量标准，与传统党参质量评价标准相符[16]。

本研究中，4年生及以上四叶参田间生长势变弱，根肥大但表皮粗糙，质地疏松，甚至有空心和烂心。因此选择合适的品种及适时采收是泰山四叶参药材质量控制的重要环节。

栽培上应根据四叶参药材品质与产量并重的双重指标，合理确定采收期，建议泰山四叶参栽培年限以2～3年生为佳。

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EffectsofVarietiesandGrowthYearsonPolysaccharideContentofCodonopsislanceolata

CHEN Baofang*，LIUZhengbo，BIYanwen，ZHANGJin

(TaianAcademyofAgriculturalSciences，Taian271000，China)

Objective：To study the effects of varieties and growth years on polysaccharide content ofCodonopsislanceolata.Methods：The content of polysaccharide was determined by the phenol-sulfuric method and the detection wavelength was 490nm.The glucose was taking as standard for the determination.Results：The content of polysaccharide was 10.28%，14.24%，12.77% and 11.27% for Tai Shen 2 and 10.95%，12.85%，14.13%，13.06% for Tai Shen 3 of different growth years from 1 to 4 years old.Conclusion：There were significant differences in the polysaccharide content ofC.lanceolataof different varieties and growth years.The contents of polysaccharide for Tai Shan 2 and Tai Shan 3 were higher than that of Tai Shan 1.UP to 3 years of growth stage，polysaccharide content in plant were increased with the increasing years of planting，and then the content will be decreased as the increasing years.

CodonopsislanceolataBenth.et Hook.F；Variety；Growth years；Polysaccharide content

2014-09-01)

泰山四叶参新品种选育及加工利用(201340629)

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陈宝芳，高级农艺师，研究方向：中草药育种与质量评价；Tel：(0538)8515961，E-mail：chenbaofangts@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.011