不同等级昭通乌天麻与其他产地天麻的天麻素含量测定及比较△

刘旭燕，张公信，田孟华，张昌飞，余显伦，郭友刚，刘大会，3*

(1.昭通市天麻研究院，云南 昭通 657000；2.昭通市天麻特产局，云南 昭通 657000；3.云南省农业科学院 药用植物研究所，云南 昆明 650205)

不同等级昭通乌天麻与其他产地天麻的天麻素含量测定及比较△

刘旭燕1，张公信1，田孟华1，张昌飞1，余显伦1，郭友刚2，刘大会2，3*

(1.昭通市天麻研究院，云南 昭通 657000；2.昭通市天麻特产局，云南 昭通 657000；3.云南省农业科学院 药用植物研究所，云南 昆明 650205)

目的：测定不同等级、不同产地天麻中天麻素的含量。方法：采用HPLC测定天麻中天麻素含量。Inert Sustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.05%磷酸(3∶97)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：220 nm；柱温为室温。结果：不同等级的乌天麻中，天麻等级越高天麻素含量越高。一等乌天麻中天麻素含量为0.82%，而四等乌天麻含量仅为0.32%。而不同产地同一等级的红天麻中天麻素含量差异较大。其中，安徽大别山天麻中天麻素含量最高，为0.94%；湖北宜昌、陕西洋县两个产地天麻中天麻素含量分别为0.66%、0.60%，云南丽江和大姚天麻中天麻素含量较低，仅为0.45%和0.44%。结论：不同的等级和不同的产地对天麻中天麻素的含量均有影响。

天麻；天麻素；HPLC法；含量测定

天麻(GastrodiaelataBl.)为兰科植物，又名赤箭、离母、鬼督邮。依据天麻花及花茎颜色的不同可将栽培种天麻分为乌天麻、红天麻、绿天麻、黄天麻4个变型[1]。其中，乌天麻花呈蓝绿色、花茎灰棕色、带白色纵条纹，主要分布在我国云南省东北部及西北部，贵州、四川、吉林的部分地区；红天麻花呈橙红色、淡黄、蓝绿或黄白色，花茎赤色，主要在我国湖北、陕西、安徽等地种植。而乌天麻和红天麻也是我国目前天麻的主要栽培种。天麻作为我国传统名贵中药材，入药已经有2000多年的历史。天麻气微、味甘，其功能是平肝息风止痉。在中医中天麻主要用于治疗头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫抽搐等症状[2]。现代药理研究表明，天麻中的有效成分为天麻素。天麻素除对中枢神经系统有作用外，还可以有效的起到扩张血管、降低血压、改善微循环及增加机体缺血缺氧的作用[3]；另外，有研究表明天麻素具有增加机体免疫、促智抗衰老的作用[4]。因此，天麻中天麻素含量的高低是评价天麻质量优劣的重要指标。本实验主要采用高效液相色谱法对不同等级云南昭通乌天麻和不同产地的红天麻中天麻素进行测定，为探寻不同等级及不同产地天麻与天麻素含量的相关性提供科学依据，并为昭通天麻的质量控制提供技术支撑。

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

不同等级云南昭通乌天麻来源于云南省昭通市彝良县小草坝天麻种植基地。不同产地的红天麻来源于昆明菊花村药材市场。鲜天麻样品经清洗、高温蒸至中间无白心、烘干、粉碎备用，具体操作参考袁崇文方法[5]，烘干后的天麻按照徐锦堂方法[6]，分为4个等级，天麻素对照品购于山东省中药化学对照品研究中心。乙腈为色谱纯，其他试剂均为国产分析纯。

1.2 实验仪器

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪(SPD-20A型紫外检测器)，奥豪斯CP124C电子分析天平，上海一恒HWS28型水浴锅，上海亚荣RE-3000A型旋转蒸发仪。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱为InertSustainC18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.05%磷酸(3∶97)，检测波长220 nm；柱温为室温；进样量10 μL。理论塔板数按照天麻素峰计算应不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备

取天麻素对照品适量，精密称定，置于容量瓶中，用乙腈∶水(3∶97)溶解稀释至刻度，摇匀，配制不同浓度梯度的对照品溶液，浓度依次为：12.5 μg·mL-1、25 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、250 μg·mL-1、500 μg·mL-1备用。

2.3 供试样品溶液的制备

精密称取样品天麻粉末2 g，置具塞锥形瓶中，精确加入稀乙醇50 mL，称重，加热回流3 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液10 mL，浓缩至近干，残渣加乙腈-水(3∶97)混合溶液溶解，转移至25 mL量瓶中。用乙腈-水(3∶97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得样品溶液备用。实验用样品编号见表1。

表1 实验用样品编号

2.4线性关系考察

将2.2中制备的不同浓度的对照品溶液(12.5、25、50、100、250、500 μg·mL-1)各取10 μL注入色谱仪，进行测定。以天麻素峰面积Y对天麻素含量X进行线性回归，线性回归方程：Y=20 530.1X+9 345.87，r=0.999 9。依据实验结果，天麻素进样量在12.5～500 μg·mL-1之间，峰面积与进样量呈良好的线性关系。见图1。

A：天麻素对照品HPLC图(保留时间10.501为天麻素)；B：1号样品HPLC图(保留时间10.520为天麻素)。图 1天麻素HPLC图

2.5 精密度实验

精密吸取样品溶液10 μL，连续进样6次，以天麻素的峰面积计算RSD为0.36%，以天麻素保留时间计算RSD为0.50%。

2.6 稳定性实验

吸取样品供试液，分别于0、2、4、7、24 h进样检测，记录色谱图。以天麻素的峰面积计算RSD为0.43%，以天麻素保留时间计算RSD为0.89%。

2.7 回收率实验

精确称取天麻样品2 g，共4份，分别精密加入天麻素对照品溶液(500 μg·mL-1)10 mL，按照供试品溶液方法处理，测定天麻素含量如表1。

表2 天麻药材中天麻素回收率(n=4)

2.8 不同等级及不同产地样品含量测定

精密称取各样品天麻粉末2 g，按2.3的方法制备成供试液，准确吸取各样品供试液10 μL注入色谱仪，进行含量测定。

3 结果

3.1 不同等级云南昭通乌天麻中天麻素含量比较分析

实验测定了云南昭通4个不同等级乌天麻中的天麻素含量。其中，一等乌天麻中天麻素含量达到0.82%，二等、三等、四等(两份样品)乌天麻的天麻素含量分别为0.53%、0.41%、0.35%、0.32%(表3)。且一等乌天麻中天麻素含量是四等含量的2.56倍，其含量分别为另外3份乌天麻样品中天麻素含量的1.55倍、2倍和2.34倍。同时，相邻等级天麻中天麻素含量差异分别为0.29%、0.12%、0.06%和0.03%。由实验结果可得，不同等级乌天麻中天麻素含量均有差异，且等级越高天麻素含量越高，而对相邻等级乌天麻中天麻素含量的比较中发现，一等与二等间天麻素差异最为明显，而等级内不同天麻样品中天麻素差异最小。

3.2 不同产地红天麻中天麻素含量比较分析

实验测定5个不同产地一级红天麻中天麻素的含量。结果表明，安徽大别山样品中天麻素的含量最高，达0.94%，而云南大姚的样品中天麻素含量最低，为0.44%，仅为安徽大别山样品中含量的47%，陕西洋县和湖北宜昌样品中天麻素含量分别为0.60%和0.66%，两者差异仅为0.06%。研究结果表明，安徽大别山所产红天麻中天麻素产量明显高于其他产地，陕西洋县和湖北宜昌所产红天麻中天麻素含量居中，云南丽江和大姚所产红天麻中天麻素含量均较低。

表3 不同等级及产地天麻样品中天麻素含量

4 讨论

目前，天麻素是天麻的主要活性成分已被学者普遍认可，国家药典也把天麻素含量作为衡量天麻质量优劣的重要参考指标[7]。但是，由于天麻中还含有大量的淀粉、蛋白质和多糖等成分，所以如何简单高效地提取天麻素一直是学者研究的重点。早在2004年吴春敏等用50%乙醇回流提取3 h，平均加样回收率为97.1%，说明天麻素提取充分。本实验依据药典(2010版)天麻素乙醇回流提取方法，平均加样回收率95.1%与前人研究结果一致[8]。同时有研究者使用纯水回流等方法提取天麻素[9]，加样回收率都在90%以上。这些结果说明虽然提取方法不同，但是各方法均达到要求。

云南昭通天麻虽为道地药材，但由于天麻研究基础薄弱，天麻质量控制体系还尚未完全建立，严重影响了天麻产业的发展。本研究首先对云南昭通不同等级乌天麻中天麻素含量进行了测定，确定乌天麻等级越高天麻素含量越高，说明天麻素含量与天麻等级有一定的相关性。且在相邻等级乌天麻天麻素含量比较中发现，一等乌天麻中天麻素含量要远远高于二等乌天麻含量，等级内不同乌天麻样品间天麻素含量相差最小。本研究将天麻的外观等级与内在天麻素含量建立了一定的相关性。除此之外，本研究还对不同产地红天麻中天麻素含量进行了测定，同为一级红天麻样品，来自于安徽大别山区样品天麻素含量最高，湖北宜昌和陕西洋县的天麻中天麻素含量差距不大，分别为0.66%和0.60%，而云南丽江和大姚红天麻中天麻素含量较低，分别为0.45%和0.44%。这说明不同产地对天麻中的天麻素含量有一定的影响。天麻在我国的药材市场中占有重要地位，因此天麻的质量控制一直是我们中药研究者关注的焦点。本研究不仅从外观等级与天麻素含量对各等级天麻样品进行了质量评价，同时也调查了国内天麻主要道地产区红天麻中天麻素的含量，本研究结果为进一步建立完善的天麻质量评价体系提供了一定的依据。

[1] 周铉，陈心启.国产天麻属植物的整理[J].云南植物研究，1983，5(4)：361-368.

[2] 赵岚，蔡际群.天麻等复方中药对遗传性震颠大鼠癫痫小发作的作用[J].辽宁药物与临床，2003，6(2)：68-69.

[3] 赵智强，王靖，全亚萍，等.天麻钩藤饮对肝阳上抗证高血压患者降压的临床药效动力学研究[J].中药药理与临床，2000，16(3)：38-39.

[4] 杨世林，兰进，徐锦堂.天麻的研究进展[J].中草药，2000，31(1)：66-69.

[5] 袁崇文，刘智，袁玉清，等.中国天麻[M].贵州科技出版社，2002.

[6] 徐锦堂，中国天麻栽培学[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993.

[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：54.

[8] 吴春敏，陈海滨.天麻中天麻素含量测定方法的研究[J].中国中药杂志，2004，29(12)：1157-1159.

[9] 徐顶巧，周建军，刘益红.天麻中天麻素提取检测方法研究[J].中药材，2012，35(11)：1799-1804.

DeterminationofGastrodineinRhizomaGastrodiaeofDifferentGradesandOrgins

LIU Xuyan1，ZHANGGongxin1，TIANMenghua1，ZHANGChangfei1，YUXianlun1，GUOYougang2，LIUDahui2，3

(1.ZhaotongTianmaResearchInstitute，Zhaotong657000，China；2.ZhaotongTianmaSpecialtyBureau，Zhaotong657000，China；3.InstituteofMedicinalPlants，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，Kunming650205，China)

Objective：To determine gastrodine content inRhizomagastrodiaeof different grades origins.Methods：Inert Sustain C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used.The mobile phase consisted of acetonitrile and 0.05% phosphoric acid with isocratic elution .The flow was 1.0 mL·min-1.The detective wavelength was 220 nm.Column temperature was room temperature.Results：The cotnent of gastrodine obtained the good linear correlation with different grades ofGastrodiaelataf.glauca.The results showed the highest content of gastrodin inG.elataf.glaucawas 0.82%，and the lowest was only 0.32%.In addition，our research analyzed the content of gastrodin in the same grade ofG.elataf.elatawhich were from different habitats’ regions.The results indicated significant difference between five habitats’ regions.The highest content of gastrodin in sample from Dabie Mountain Anhui province was 0.94%.The content of gastrodin were 0.66% and 0.60% for the samples from Hubei province and Shanxi province，respectively.The gastrodin content ofG.elataf.elatafrom Lijiang and Dayao，Yunnan province were only 0.45% and 0.44%，respectively.Conclusion：Both different grades and habitats’ regions have effect on the content of gastrodin inRhizomagastrodiae.

Rhizomagastrodiae；gastrodin；HPLC；Determination of content

2014-07-30)

国家科技支撑计划(2013BAK13B04)；云南省科技计划重点项目(2012CG022)

*

刘大会，Tel：(0871)65033441；E-mail：juhuacha2007@sohu.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.009