降低中药斑蝥刺激性的实验研究

杨辛欣，潘 雪，李超英，王书丹，庄 硕

（长春中医药大学，长春 130117）

降低中药斑蝥刺激性的实验研究

杨辛欣，潘 雪，李超英*，王书丹，庄 硕

（长春中医药大学，长春 130117）

目的 研究降低中药斑蝥对结直肠的刺激性的方法和技术。方法 本实验对斑蝥的不同提取方法和采用包合技术前后斑蝥素含量进行比较，考察其对大鼠结肠组织的刺激性作用。结果 斑蝥经乙醇提取物中斑蝥素含量大于经水提取物中斑蝥素含量，并且2种提取物对大鼠结肠组织均有刺激性，但是斑蝥乙醇提取物采用环糊精包合后，对大鼠结肠无刺激性作用。结论 斑蝥乙醇提取物经环糊精包合后可以降低斑蝥的刺激性，且不影响药效。

斑蝥;提取物;环糊精包合;结肠组织

斑蝥，能破血消髒，攻毒蚀疮，引赤发泡，辛，热，有大毒［1］。现代研究［2-7］表明，中药斑蝥含有斑蝥素及其衍生物等物质，具有诱导癌细胞凋亡的功效，对多种原发性癌症具有明显的疗效。但是斑蝥素也具有较大的毒性，用量不当能对机体产生较大的不良反应，因此中医应用斑蝥，多采用炮制后应用。目前，许多学者［8-10］对斑蝥炮制方法及其机理等进行了深入研究，但是对斑蝥提取和制剂后毒副作用毒性研究较少［11］。本实验利用中药提取和制药新技术，观察炮制后的斑蝥不同提取方法、包合技术对其斑蝥素含量的影响，且对大鼠结直肠刺激性进行比较研究，从而在保证斑蝥临床安全应用基础上，并降低其对机体产生的刺激性。

1 材料

1.1 样品 炮制斑蝥、斑蝥水提物、斑蝥醇提包合物，本研究室自制。斑蝥素对照品（购自中国药品生物制品检定院）。

1.2 动物 Wistar大鼠80只，雌雄各半，动物合格证号:SCXK（吉）2010-0001，体质量220 ～240 g。

1.3 仪器 1260安捷伦高效液相色谱仪（上海天美科学仪器有限公司）;KQ3200DB型速控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;AL204电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

2 方法

2.1 炮制方法 取净斑蝥与大米拌炒，至米呈黄棕色，取出，除去头、翅、足。每100 kg斑蝥，用米20 kg。

2.2 提取方法

2.2.1 乙醇提取方法 取炮制斑蝥适量，用10倍量75%乙醇提取3次，每次1.5 h，合并滤液。50℃低温挥干，研成粉末，备用。

2.2.2 水提取方法 取炮制斑蝥适量，用10倍量的纯净水提取3次，每次1.5 h，合并滤液，50℃低温挥干，研成粉末，备用。

2.3 乙醇提取和β-环糊精包合方法 本实验取上述斑蝥乙醇提取物，加入适量的β-环糊精和蒸馏水，保持70℃温度，磁力搅拌400 r/min，4 h。50℃低温挥干，研成粉末，备用。

2.4 含量测定 采用测定方法:色谱条件与系统适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（23∶77）为流动相，检测波长为230 nm，柱温30℃，流速1 mL/min，进样量10 μL。理论板数按斑蝥素峰计算应不低于3 000。

斑蝥素对照品的配制:精密称量斑蝥素对照品适量，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得斑蝥素对照品储备液。其浓度为2.14 mg/mL，备用。

供试品的制备:分别取每种供试品3分，每分0.5 g，置于锥形瓶中，加氯仿 20 mL，超声 20 min，2次，过滤，合并滤液，用氯仿少量多次洗涤容器。50℃水浴挥干，加甲醇溶解，定容至2 mL容量瓶，过0.22 μm滤膜，备用。测定结果见表1。

表1 斑蝥提取和研制样品中斑蝥素含量测定结果（n=3）

2.5 刺激性实验方法 参照《中药药理研究方法学》［12］进行。

2.5.1 单次给药刺激性试验 禁食不禁水36 h后，取40只雌雄各半大鼠，随机分为斑蝥水提组、斑蝥乙醇提组、斑蝥乙醇提并包合组、空白组，斑蝥的用量按《中华人民共和国药典》［13］斑蝥标准，并且各种斑蝥的用量相同。空白组给予同体积的生理盐水。分别经直肠给予各组药液0.2 mL，至结肠8 cm处。于24 h后处死大鼠，取出直肠组织，观察有无充血、水肿、黏膜下出血等现象。按局部黏膜刺激性反应分级标准进行评分，并根据黏膜刺激性强度评价标准，按平均分值判定受试药物的黏膜刺激性强度;如有变化应作病理组织学检查，并与空白对照组比较。

2.5.2 多次给药刺激性试验 禁食不禁水36 h后，取40只雌雄各半大鼠随机分为斑蝥水提组、斑蝥乙醇提组、斑蝥乙醇提并包合组、空白组。1次/d，分别经直肠给药各组药液0.2 mL（按照1.08 mL/kg），连续7 d。空白组给药同体积的生理盐水。

末次给受试药物后1 h处死动物，观察指标和要求同单次刺激性试验。

3 结果

3.1 单次给药刺激性试验结果 斑蝥水提组、斑蝥乙醇提组、斑蝥乙醇提并包合组大鼠结肠组织均正常，黏膜刺激性评分为0分（形态无改变或无明显改变），分别证明斑蝥水提物、斑蝥乙醇提物、斑蝥乙醇提并包合物对大鼠结肠组织无刺激性。

3.2 多次给药刺激性试验结果 斑蝥乙醇提取组对大鼠结肠具有强刺激性，结肠黏连、黏膜水肿、充血严重，并且大鼠体质量有明显下降;水提取组大鼠，大部分状态良好，尤其雌性大鼠脏器与结肠均无异常，但有2只雄性大鼠结肠末端有轻微黏连，1只雄性大鼠肠组织充血水肿，1只状态不好、体质量明显减轻，斑蝥水提物对雄性大鼠有轻度刺激性;而乙醇提取并包合组大鼠均状态良好，脏器与结肠均无异常。

4 小结

多次给药刺激性试验结果发现:炮制斑蝥乙醇提取物对大鼠结肠具有强刺激性，结肠黏连、黏膜水肿、充血严重，并且大鼠体质量有明显下降。而炮制斑蝥经过水提取不但斑蝥素提取含量低，而且对雄性大鼠有一定的刺激性。将炮制斑蝥乙醇提取物进行环糊精包合，结果对大鼠脏器与结肠均无异常，大鼠状态良好，显著降低了斑蝥的刺激性，且保留其药效成分。

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［1］陈少萍.斑鳌炮制的历史沿革［J］.中药材，2000，23（4）:201-203.

［2］戴晓荣，成宏伟，史红霞，等.去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡作用研究［J］.河南中医，2014，34（12）:2314-2316.

［3］张萌，李胜超，乔治斌，等.斑蝥酸钠维生素B6诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（23）:216-220.

［4］刘春霞，马建国.斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株毒性作用的研究［J］.江苏大学学报（医学版），2010，20（5）:395-397.

［5］夏环玲.复方斑蝥胶囊联合放化疗治疗晚期食管癌的疗效观察［J］.中国肿瘤临床与康复，2012，19（2）:167-168.

［6］梁枫，王明艳，许冬青.斑蝥酸钠诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究［J］.南京中医药大学学报，2006，22（3）:171-172.

［7］徐文会，赵浩亮，魏文贵，等.斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖作用及血管内皮生长因子表达的影响［J］.中国医疗前沿，2012，7（4）:4-5.

［8］刘沁，陈建伟，武露凌，等.斑蝥炮制前后脂肪酸成分的GC-MS分析［J］.中国药房，2011，22（19）:1788-1789.

［9］王艳杰，董欣，刘晓波，等.斑蝥炮制前后蛋白质及氨基酸含量测定［J］.吉林中医药，2010，30（10）:904-905.

［10］赵丽娜，王一硕，刘艳芳，等.高效液相色谱法比较中药斑蝥炮制前后斑蝥素含量［J］.中国医院药学杂志，2012，32（24）:2019-2020.

［11］陈农，李贺敏，彭国平，等.斑蝥素衍生物的设计合成及体外抗肿瘤活性与刺激性毒性研究［J］.长春中医药大学学报，2013，29（1）:25-28.

［12］陈奇.中药药理研究方法学［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2006.

［13］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京:中国医药科技出版社，2010.

Reducing of Chinese medicine Mylabris stimulation

YANG Xinxin，PAN Xue，LI Chaoying*，WANG Shudan，ZHUANG Shuo
（Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China）

ObjectiveExperimental study on reducing of Mylabris stimulation.MethodsThe experiment of Mylabris different extracting method and the inclusion technology cantharidin content before and after comparison，and investigation of its irritating effect on rat colon tissue.ResultsCantharidin content in Mylabris approved by ethanol extract than the water extract，and both extract had irritation on rats colon tissue，but Mylabris ethanol extracts using cyclodextrin inclusion had no irritation on rats colon tissue.ConclusionMylabris ethanol extract by cyclodextrin inclusion irritability tends to decrease，and does not affect the efficacy.Therefore，this experimental study for the clinical safety and application of Mylabris provided the scientific basis and reference.

Mylabris;extraction;inclusion;colon tissue

R285.5

A

2095－6258（2015）04－0688－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.04.010

吉林省科技发展计划项目（20120927）。

杨辛欣，硕士，讲师，主要从事炮制与中药制剂方向研究。

李超英，博士，教授，电话－13504417829，电子信箱－ chaoying li@126.com

2014－11－05）