458例包皮龟头炎真菌感染检测及药敏试验

曹伟胜　陈少南　韦方铨　陈伟华　张凤霞（广东省肇庆市皮肤病医院检验科，肇庆526020）

458例包皮龟头炎真菌感染检测及药敏试验

曹伟胜陈少南韦方铨陈伟华张凤霞
（广东省肇庆市皮肤病医院检验科，肇庆526020）

目的了解本地区包皮龟头炎患者中真菌感染情况及对抗生素的敏感性。方法分别采用显微镜、科玛嘉念珠菌显色培养基、法国梅里埃公司的ATB ID32C酵母菌鉴定卡和Rosco纸片扩散法对包皮龟头分泌物进行直接镜检、念珠菌培养、菌种鉴定及药敏试验。结果458例患者中153例直接镜检阳性，培养分离出念珠菌共157株，念珠菌培养阳性率为33．4%（153／458），其中白念珠菌116株，占73．9%（116／157），非白念珠菌41株，占26．1%（41／157）；120例对照组中有17例培养出念珠菌，阳性率为14．2%（17／120），其中白念珠菌6株，占35．3%（6／17），非白念珠菌11株，占64．7%（11／17）。包皮龟头炎患者组念珠菌的培养阳性率和白念珠菌的比例均高于健康对照组，差异有统计学意义（χ2＝16．95，χ2＝10．72，P均＜0．05）。157株致病菌株对制霉菌素和酮康唑的敏感率均＞90%，分别为97．5%和93．0%，对氟康唑敏感率为79．6%，而对特比萘芬敏感性最低，为33．8%。结论念珠菌感染是本地区包皮龟头炎发病的重要因素，感染的致病菌种以白念珠菌为主，分离的致病性念珠菌对多烯类药物敏感率较高，对唑类抗真菌药有不同程度的交叉耐药，不同菌型其药敏谱存在差异。

包皮龟头炎；真菌；念珠菌；药敏试验

［Chin J Mycol，2015，10（2）：100⁃103］

包皮龟头炎是临床常见的多种因素所引起的男科疾病，随着广谱抗生素及皮质激素的广泛应用和性传播疾病的增加，近年来本病的发生有增多趋势，尤其是感染因素所致的病例增多明显，为了解肇庆地区包皮龟头炎患者中真菌感染情况及抗生素的敏感性，更好地指导临床合理用药，我们于2013年4月～2014年8月间，分别采用显微镜、科玛嘉念珠菌显色培养基、法国梅里埃公司的ATB ID32C酵母菌鉴定卡和Rosco纸片扩散法对458例包皮龟头炎患者分泌物进行直接镜检、念珠菌培养、菌种鉴定及药敏试验，现将结果报告如下。

1　资料与方法

1．1资料

临床资料两组病例均选自本院2013年4月～2014年8月皮肤和性病科门诊的就诊者。458例包皮龟头炎患者组：年龄18～63岁，平均29．5岁，病程3 d～6个月，平均1．2个月。患者组入选标准：①1个月内未系统用抗真菌药、“糖皮质激素”抗生素及免疫抑制剂。②1周内未局部外用抗真菌药。③患者有不同程度的龟头及包皮红斑、丘疹、分泌物、糜烂等，伴或不伴瘙痒症状。120例对照组：到皮肤科就诊的其他非性传播疾病患者，其包皮龟头外观正常，直接镜检未查见菌丝和／或芽生孢子。年龄18～58岁，平均27．3岁。两组年龄构成差异无统计学意义。

主要试剂和仪器显微镜（日本OLYMPUS公司，CX21⁃BIM）；科玛嘉念珠菌显色培养基（上海科玛嘉微生物技术有限公司）；ATB ID32C鉴定板（法国梅里埃公司）；改良的真菌药敏平板培养基（杭州威晟生物科技有限公司）；Rosco纸片（广州乐通泰生物科技公司）。恒温培养箱（上海岛韩实业有限公司）；ATB ID32C鉴定仪购自法国梅里埃公司。

1．2方法

标本采集用蘸取无菌生理盐水的钝刀刮取阴茎龟头、冠状沟或包皮处皮损鳞屑做直接镜检。将待检标本用10%KOH制片，如镜检见菌丝、假菌丝、大量出芽孢子，判为阳性（认定为致病性念珠菌），阴性结果连查3次才确定。对直接镜检阳性的样本进行真菌培养，样本接种于科玛嘉念珠菌显色培养基于37℃温箱中培养24～48 h。

分离培养与鉴定通过念珠菌在科玛嘉念珠菌显色培养基呈现的颜色来进行分型鉴定：绿色为白念珠菌；紫色为光滑念珠菌；粉红色为克柔念珠菌；灰蓝色为热带念珠菌；白色的为其他念珠菌。白色的菌落经分离纯化后接种到ATB ID32C鉴定条，用ATB Expression鉴定仪进行鉴定。严格按照操作说明书判读结果进行鉴定。

药敏试验将菌株接种液浓度先配制0．5 Mc⁃ Fland菌悬液，再用生理盐水1∶1稀释；对于克柔念珠菌，先配制0．5 McFland菌悬液，再用生理盐水1∶10稀释。在接种前，平皿先置于37℃温箱干燥20min，各吸取配好浓度的菌液0．5mL接种于一个9 cm的改良真菌药敏平板培养基，涂布均匀，移液管吸走多余的菌液，然后将平皿放37℃温箱干燥10min，平皿上贴Rosco药敏纸片，37℃培养18～24 h后测量抑菌环的大小。Rosco纸片法真菌药敏参考标准：制霉菌素（NYS）、伊曲康唑（IT）敏感≥15 mm，中敏10～14 mm，耐药无抑菌环；氟康唑（FL）、酮康唑（KET）、嗌康唑（ECO）、咪康唑（MIC）、特比萘芬（TEB）敏感≥20 mm，中敏12～19 mm，耐药≤11 mm。

标准质控菌株采用温州康泰生物科技有限公司提供的白念珠菌ATCC64548。

统计学分析采用SPSS 13．0软件进行数据分析；计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0．05为有统计学意义。

2　结　果

2．1两组念珠菌培养检出情况

458例包皮龟头炎患者中有153例直接镜检查见念珠菌菌丝及芽生孢子，并培养分离出念珠菌共157株，其中有4例为混合感染，念珠菌培养阳性率为33．4%（153／458）。120例对照组中有17例培养出念珠菌，阳性率为14．2%（17／120）。包皮龟头炎患者组念珠菌的培养阳性率高于正常对照组，差异有统计学意义（χ2＝16．95，P＜0．05）。

2．2两组念珠菌菌种构成情况

153例镜检阳性的包皮龟头炎患者中培养分离出的157株念珠菌以白念珠菌为主，占73．9%（116／157）；120例健康对照组分离培养出的17株白念珠菌则以非白念珠菌为主，占64．7%（11／17），其中以克柔念珠菌为主要菌种。包皮龟头炎患者组白念珠菌的比例高于健康对照组，差异有统计学意义（χ2＝10．72，P＜0．05）。详见表1。

2．2药敏试验结果

157株致病菌株对制霉菌素和酮康唑的敏感率均＞90．0%，分别为97．5%和93．0%，对氟康唑敏感率为79．6%，而对特比萘芬敏感性最低，为33．8%。见表2。

3　讨　论

包皮龟头炎是指龟头和包皮黏膜的炎症，是男性常见病。真菌性感染引起的包皮龟头炎是由酵母样真菌引起的一种常见生殖器感染性疾病。酵母样真菌为人体正常寄生的菌群之一，属于条件致病菌，当体内菌群失调或机体抵抗力下降时，酵母样真菌大量生长繁殖而发病。在临床工作中判断酵母样真菌是否属于致病真菌，则主要依据直接镜检结果来判断，当直接镜检见到由念珠菌形菌丝和侧生芽生孢子组成的假菌丝体则归为致病菌，本组研究结果显示，458例包皮龟头炎患者中有153例直接镜检查见念珠菌菌丝及芽生孢子，并培养分离出念珠菌共157株，说明本组有153例患者念珠菌呈致病状态；包皮龟头炎患者组念珠菌的培养阳性率（33．4%）高于健康对照组（14．2%），差异有统计学意义（P＜0．05），表明念珠菌感染与包皮龟头炎的发生有关，提示念珠菌感染是引起本地包皮龟头炎的重要因素。本组458例包皮龟头炎中念珠菌阳性检出率为33．4%（153／458），与国外有关报道念珠菌感染占所有包皮龟头炎的1／3［1］的结果相近，但高于潘伟光等［2］报道的29．0%，低于李芃等［3］报道的40．0%和梁顺容等［4］报道的40．32%。检出结果不尽相同可能与病例选择、诊断标准、地区差异等有关。

表1　两组念珠菌菌种构成比（%）Tab．1　The constituent rates of strains of candida between the two groups（%）

表2　6种菌种对抗真菌药物的敏感率（%）Tab．2　Susceptibility rates of 6 species of candida to antifungal agents（%）

白念珠菌具有黏附素，利于侵入的酶，酵母相和菌丝相相互转换及表型转换等毒力因子，使白念珠菌更具黏附、侵入和致病性，成为生殖器念珠菌病的主要致病菌［5］。本研究结果显示，镜检阳性的包皮龟头炎患者中培养分离出的157株念珠菌以白念珠菌为主，占73．9%；120例对照组分离培养出的17株念珠菌则以非白念珠菌为主，占64．7%，且以克柔念珠菌为优势菌。包皮龟头炎患者组白念珠菌的比例（73．9%）高于健康对照组（35．3%），差异有统计学意义（P＜0．05），提示白念珠菌是本地区真菌感染性包皮龟头炎的主要病原菌，非白念珠菌则主要以寄生或带菌状态定植于健康男性包皮龟头处而不表现出炎症等临床症状。值得注意的是，本研究也显示，镜检阳性的包皮龟头炎患者中非白念珠菌占比达26．1%，其中以光滑念珠菌和热带念珠菌为主要菌种，患者中非白念珠菌占比略低于周祝安等［6］用相同方法检测报道的31．3%，明显高于李军等［7］报道的9．68%，结果的不同可能与地区的差异有关，也可能提示非白念珠菌在包皮龟头炎患者临床检出率有增多的趋势，应引起医疗工作者的重视。

随着抗真菌药物的临床使用，一些真菌产生了不同程度的耐药性，因此，真菌的体外药敏试验对指导临床治疗尤为重要。本组药敏结果显示，分离菌株对制霉菌素和酮康唑的敏感率均＞90%，分别为97．5%和93．0%，对氟康唑敏感率为79．6%，对伊曲康唑、嗌康唑和咪康唑的敏感性较低，而对特比萘芬敏感性最低，为33．8%。研究结果表明，念珠菌属对多烯类药物制霉菌素敏感率高，但副作用大，口服难吸收，价格贵，限制了临床的使用，可作为部分顽固病例的首选用药，此外，酮康唑对多数菌珠有较高的敏感率，不失为较好的临床治疗真菌感染性包皮龟头炎的药物。本研究中分离菌株对部分唑类抗菌药物敏感性较低，可能与菌株产生诱导性耐药有关［8］。由于唑类抗真菌药物具有抗菌谱广、副作用小、口服生物利用度高等特点，目前临床广泛使用，但由于大量使用，耐药株也随之大量出现，从而出现诱导性耐药。而且部分念珠菌同时对数种唑类抗真菌药物敏感中介，提示唑类药物间存在交叉耐药现象。值得注意的是，在本研究中光滑念珠菌和克柔念珠菌对氟康唑敏感率均为0%，这可能与天然耐药有关［9］。综上所述，在临床上应重视对包皮龟头炎患者进行真菌检测和药敏试验，以便为治疗提供可靠依据，提高治疗效果，并有效控制和减少真菌耐药性的产生。

［1］Dockerty WG，Sonnex C．Candidal balanoposthitis：a study of diag⁃nostic methods［J］．Genitourin Med，1995，71（6）：407⁃409．

［2］潘伟光，钟海萍，张建华，等．念珠菌性包皮龟头炎的菌种分布及其药敏试验分析［J］．岭南皮肤性病科杂志，2009，16（1）：33⁃35．

［3］李芃，王晓琴．包皮龟头炎120例临床分析［J］．中国性科学，2012，21（11）：17⁃18．

［4］梁顺容，容富强，黄进梅，等．3492例生殖器炎症患者假丝酵母菌病原学及药敏情况分析［J］．皮肤性病诊疗学杂志，2013，20（4）：244⁃245．

［5］廖翠红，刘维达．与白色念珠菌黏附和侵入相关的毒力因子研究进展［J］．国外医学．皮肤性病学分册，2004，30（5）：323⁃325．

［6］周祝安．105例念珠菌性包皮龟头炎菌种分析及药敏试验［J］．浙江实用医学，2009，14（3）：235⁃236．

［7］李军，郑和义，孙秋宁，等．念珠菌性龟头炎及其致病菌种、药敏分析［J］．临床皮肤科杂志，200，33（7）：398⁃400．

［8］刘建彬，邱森灵，李玉莲，等．念珠菌的分离鉴定及其耐药性分析［J］．国际医药卫生导报，2010，15（22）：80⁃82．

［9］徐英春，李若瑜，倪语星，等．如何正确理解抗真菌药物体外敏感试验结果对临床用药的指导价值［J］．中华检验医学杂志，2008，31（2）：128⁃132．

［本文编辑］施慧

Detection of fungal infection from 458 balanoposthitis patients and antibiotic susceptibility test

CAO Wei⁃sheng，CHEN Shao⁃nan，WEI Fang⁃quan，CHEN Wei⁃hua，ZHANG Feng⁃xia（Zhaoqing Hospital For Skin Disease and STDs，Zhaoqing 526020，China）

ObjectiveTo investigate the infection and antibiotic susceptibility of fungi in the patients with balanoposthitis in Zhaoqing area．MethodsMicroscopy，CHROM agar candida，ATB ID32C of France Bio⁃Merieux Company and Rosco Disk diffusion method were applied to examine and culture and identify candida strains and for yeast susceptibility testing．Results153 cases were positive fungal microscopy examination in 458 patients．There were 157 strains candida by culture and identify and the positive detec⁃tion rate was 33．4%．116 of 157 isolates（73．9%）were albicans，41 of 157 isolates（26．1%）were non⁃C．albicans．17 cases were cul⁃tured positive for candida in healthy control group and the positive detection rate was 14．2%．6 of 17 isolates（35．3%）were albicans，11 of 17 isolates（64．7%）were non⁃C．albicans．The detection rate of candida culture and the constituent rate of albicans in patient group were higher than those in healthy control group，the difference has statistical significance（χ2＝16．95，χ2＝10．72，P＜0．05）．The susceptibility rate of isolated pathogenic strain in nystatin and ketoconazole were all more than 90%，were 97．5%and 93．0%．The rate in fluconazole was 79．6%，while the lowest susceptibility rate was terbinafine（33．8%）．ConclusionCandida infection is the most important pathogenetic factor for balanoposthitis and the main species of pathogenetic yeasts is albicans in Zhaoqing area．Patho⁃genic candida have a higher drug susceptibility rate to polyene drugs and have different degree of cross resistance to azole drugs．There are differences among the antibiotic sensitivity spectrums of various candida．

balanoposthitis；fungi；Candida；susceptibility test

R 519．3

A

1673⁃3827（2015）10⁃0100⁃04

曹伟胜，男（汉族），本科，主管检验师．E⁃mail：xiaojiu9＠163．com

2014⁃09⁃23