HPLC法测定胃得安片中白术内酯Ⅰ含量

易　敏，毕云生，张淑瑜，赵文静，于燕莉

HPLC法测定胃得安片中白术内酯Ⅰ含量

易敏，毕云生，张淑瑜，赵文静，于燕莉＊

［摘要］目的建立胃得安片白术内酯的检测方法，为其质量标准的改进提供依据。方法色谱柱：SHIMADZU C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（65∶35）；流速：1.0 ml/min；检测波长220 nm，柱温：30℃。样品中白术内酯Ⅰ提取工艺为：甲醇超声处理30 min。结果白术内酯Ⅰ在2.4～38.4 μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9996、n=5），平均回收率为99.03%，RSD=0.37%。结论本方法简便可靠，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

［关键词］高效液相色谱法；薄层色谱法；胃得安片；白术内酯Ⅰ

1　仪器与试药

1.1仪器Agilent 1200高效液相色谱仪，VWD G1314B紫外检测器，Agilent 1200色谱工作站 （均为美国安捷伦公司）；UV-2550紫外分光光度计（日本岛津公司）；BS124S电子天平 （北京赛多利斯仪器系统有限公司）；AS-3120型超声清洗器（北京华瑞博远科技发展有限公司）；薄层硅胶板G（100 mm× 200 mm，青岛海浪硅胶干燥剂厂）；ZF-A紫外透射反射分析仪（上海骥辉科学分析仪器有限公司）。

1.2试药胃得安片（规格：0.46 g/片，济南军区总医院制剂室提供，批号：20141123；20141215；20150108），白术内酯Ⅰ对照品（含量≥98%，中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，批号：1017-080819），白术对照药材 （中国药品生物制品检定所，批号：120925-200708）甲醇为色谱纯，超纯水，乙醚、乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）等其他试剂均为分析纯。

2　白术薄层鉴别

取胃得安片20片研为细末，称取粉末1.0 g，加乙醚20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为样品溶液；另取白术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液；按照胃得安片制备工艺，制备不含白术药材的阴性对照品，按样品溶液制备方法制备白术的阴性对照品溶液。分别吸取10 μl样品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃烘干，置紫外光灯（365 nm）下检视［3］。供试品色谱中，在与对照品色谱斑点相应位置上，有相同的荧光斑点，而阴性对照色谱中在相应的位置上无斑点干扰。结果见图1。

图1　白术TLC图谱

3　白术内酯Ⅰ的含量测定

3.1色谱条件SHIMADZU C18色谱柱 （250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（65∶35）；流速：1 ml/ min；检测波长220 nm。柱温：30℃；进样量：20 μl［4-6］。

3.2溶液制备①对照品溶液。精密称取白术内酯Ⅰ对照品0.0048 g，置100 ml容量瓶中，超声处理30 min，冷却至室温，甲醇定容，摇匀，配制成0.1 mg/ ml的溶液，微孔滤膜滤过，作为对照品溶液。②样品溶液。取胃得安片20片，研细过80目筛，精密称量粉末约1.5 g，置于10 ml容量瓶中，精密加入甲醇适量，超声提取30 min，冷却至室温，甲醇定容，摇匀，微孔滤膜滤过，作为样品溶液。③阴性对照溶液。按处方比例制备缺少含有白术药材的样品，按以上样品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

3.3专属性试验分别精密吸取对照品、供试品、阴性对照品溶液注入液相色谱仪，按2.1项下的色谱条件进行测定，记录HPLC图谱。结果阴性对照品溶液在白术内酯Ⅰ吸收峰对应保留时间无吸收峰，表明处方中其他成分对白术内酯Ⅰ含量测定无干扰。结果见图2。

3.4线性关系精密量取“2.2”项下的对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ml分别置于10 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，分别按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，以白术内酯Ⅰ浓度（μg/ml）为横坐标X，吸收峰面积积分值为纵坐标Y，进行线性回归，得方程为：y=7×106x+38630（r=0.9996）。表明白术内酯Ⅰ在2.4～38.4 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

3.5精密度试验取同一白术内酯Ⅰ标准品溶液，在“2.1”项下色谱条件下连续进样6次，记录白术内酯Ⅰ吸收峰面积，计算RSD值为1.43%（n=6），表明仪器精密度良好。

图2　HPLC图谱

3.6稳定性试验取同一批胃得安片（批号：20150108）的样品溶液，在“2.1”项的色谱条件下分别于0、2、4、8、16、24 h进样，每次20 μl，记录白术内酯Ⅰ吸收峰面积，结果RSD=1.62%（n=6），表明样品溶液在24 h内稳定。

3.7重复性试验取同一批胃得安片（批号：20150108）样品，按“2.2”项下样品溶液制备方法平行制备6份，按“2.1”项的色谱条件进行测定，结果白术内酯Ⅰ的平均含量为30.18 μg/g，RSD=0.85%，表明重复性良好。

3.8加样回收率试验取已知白术内酯Ⅰ含量的同一批胃得安片（批号：20150108）样品，精密称取6份，分别加入已知不同量的白术内酯Ⅰ标准品，按照上述方法制备样品溶液，并按色谱条件测定白术内酯Ⅰ含量，计算加样回收率，结果见表1。

3.9样品含量测定取胃得安片3批 （批号为：20141123；20141215；20150108），按“2.2”项下方法制备样品溶液，精密吸取样品溶液注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，每个样品平行进样3次，记录峰面积，白术内酯Ⅰ含量分别为30.17、30.24、30.18 μg/g，平均含量为30.20 μg/g。

表1　加样回收率试验结果（n=6）

4　讨论

现代研究表明，白术内酯Ⅰ能促进大黄致虚模型大鼠胃肠道消化吸收，能够增强唾液淀粉酶等消化酶活性，调节胃肠道功能［7］、是健脾的主要有效成分之一。能够显著抑制急性和慢性炎症大鼠模型的炎症反应，表明白术内酯Ⅰ有一定的抗炎作用，能够抑制胃肠道炎症反应，减轻胃肠道黏膜水肿，抑制组织细胞损伤，维持正常的消化吸收功能［2］。

试验过程中对比分析了Kromasil C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）与SHIMADZU C18色谱柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）两种类型色谱柱对样品的分离效果，结果用SHIMADZU C18色谱柱白术内酯Ⅰ峰形较好，分离效果好。

对不同的流动相系统乙腈-水梯度洗脱［4］、乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱［5］、甲醇-水［6］进行考察，考察过程中对流动相配比进行调整，结果以甲醇-水（65∶35）为流动相时分离效果最好，峰形良好，无拖尾现象，分离度高。

采用紫外分光光度计对白术内酯Ⅰ标准品溶液进行波普扫描（200～400 nm），结果白术内酯Ⅰ在220 nm处有最大吸收峰，确定HPLC检测波长为220 nm。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：95.

［2］彭腾，李鸿翔，邓赟，等.白术内酯类成分及其药理作用研究进展［J］.中国药房，2012，23（39）：3732-3734.

［3］寿旦，俞忠明，章建民.改良的白术药材薄层色谱鉴别研究［J］.中华中医药学刊，2011，29（3）：535-536.

［4］李雪莲，杨丽，陈林，等.白术麸炒过程中白术内酯Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ含量变化规律［J］.中国实验方剂学杂志，2015，21（7）：35-38.

［5］邓佳，陈华，金伟华.HPLC梯度洗脱法同时测定党参养荣丸中的梓醇、毛蕊花糖苷、白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ［J］.中国药物警戒，2015，12（1）：26-29.

［6］刘玉强，才谦.50批不同来源白术药材及饮片中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量的HPLC法测定［J］.药物分析杂志，2012，32（7）：1249-1252.

［7］赵桂芝，洪学智，戴诗文，等.白术内酯的药理学研究进展［J］.中国药房，2009，20（3）：230-231.

［2015-05-17收稿，2015-06-18修回］［本文编辑：李思睿］

［中图分类号］R927.2

［文献标志码］A

［作者单位］250014山东济南，山东省军区门诊部（易敏）；250031山东济南，济南军区总医院药剂科（毕云生，张淑瑜，赵文静，于燕莉）

［通讯作者］于燕莉，Email：yuyanli323@sohu.com

Determination of atractylenolide-I in Weidean tablet by HPLC

YI Min①，BI Yun-sheng，ZHANG Shuyu，et al.①Shandong Province Military Area Commands Clinics，Jinan，Shandong 250014，China

［Abstract］ObjectiveTo establish a detection method of atractylenolide-I in Weidean tablet，so provide the basis for the improvement of quality standards.MethodsThe determination was performed on SHIMADZU C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column with the mobile phase of methanol-water（65∶35）at the flow rate of 1.0 ml/ min.The detection wavelength was set at 220 nm.And the column temperature was 30℃.Extraction process of atractylenolide-I in sample was follows：put methanol in sample powder and take ultrasonic processing for 30 min. ResultsThe linear relation of atractylenolide-I was excellent within the range of 2.4-38.4 μg/ml（r=0.9996，n= 5），and the average recovery ratio was 99.03%，RSD=0.37%.ConclusionAbove-mentioned method is simple，reliable and good in repeatability，could be used for the quality control of Weidean tablet.

［Key words］HPLC；TLC；Weidean tablet；Atractylenolide-I胃得安片为济南军区总医院制剂，处方来源于明朝宫廷医书《寿世保元》中的无价金丹，由白术、苍术、茯苓、黄连、陈皮、槟榔等中药组成，具有健脾和胃、消食止痛之功效，主要用于治疗慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡等疾病的预防和治疗。方中以白术为君，具有健脾益气，燥湿利水等功效［1］，能够“…强脾胃，进饮食…”，为“脾补气第一要药”《本草求真》［2］。本研究分别运用薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）分别对胃得安片中白术进行定性定量检测，为完善胃得安片质量控制标准与方法，增强临床治疗效果提供研究依据。