免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用

黄岩 王逃生 王秀杰 王方明

(1.新乡市动物卫生监督所,453000；2.卫辉市畜牧局，453100)

1857 年，法拉第制备出了胶体金，在其中加入电解质后，胶体金由红色变为蓝色，最终成为无色，而加入其它分子便能够阻止这种变化。1971年，胶体金被应用到了免疫化学中，此后它在医学检验中开始广泛应用。

1 胶体金的制备及免疫胶体金检测技术

1.1 胶体金的制备

在氯金酸水溶液中加入还原剂使其还原并凝结成胶体金粒子，这就是胶体金。还原剂的不同能够使其粒子的大小和数量也不同；还原剂浓度越高，粒子的数量就越多，体积就越小。制备胶体金的方法较多，如抗坏血酸还原法、柠檬酸还原法等。不同的制备方法能够制备出直径1nm～500nm的粒子。常用的免疫标记胶体金粒子的直接在3nm～50nm之间。

1.2 免疫胶体金技术的原理

免疫胶体金技术即利用胶体金标记抗原抗体。胶体金的颗粒之间的状态较为稳定，标记过程就是将蛋白质分子吸附到胶体金表面的过程，因为胶体金颗粒所带的负电荷，而蛋白质所带的是正电荷，正负相吸，进而实现牢固的依附关系。利用还原法能够将氯金还原成不同直径的粒子，它能够与毒素、酶、抗生素等结合，在检验检疫中有重要的作用。在显微镜下观察免疫金颗粒与蛋白结合物时，它呈现出黑褐色，是一种定性或定量的免疫检测方法。

1.3 免疫胶体金检测技术

目前，常用的免疫胶体金检测技术有CGEIA和DIGFA两种，它们都是以将待验标本加入抗原或抗体中，经过毛细管作用或渗滤作用后使两者结合，然后再通过胶体金进行标记。第一种，DIGFA。这种技术利用了微孔滤膜吸附蛋白质的特性，通过渗滤、胶体金标记等过程能够抗原或抗体与膜上的抗原或抗体结合，同时也能够提高免疫反应的速度，使胶体金的显色速度加快。第二中，CGEIA。免疫层析条由玻璃纤维膜、金标垫、硝酸纤维膜、纤维膜组成，将它们按照由下向上的顺序粘贴在支持物上，切成条就能用于检测。在检测时，将其插入待检液中，等待5分钟就能够观察结果。检测原理为：当检测条插入检液中，液体中的抗原从底部被吸收与金标探针发生反应，形成复合物，然后再通过毛细作用被运送到硝酸纤维膜上，再发生反应形成新的检验区。该方法方便快捷、敏感性好，能够直接观察结果，应用广发。

2 免疫胶体金技术在兽医临床中的应用

2.1 在禽病的诊断方面的应用

我国养禽业的规模大，禽病的危害也比较严重。预防禽病要弄清致病因子，免疫胶体金技术以其快速、简便、灵敏度高等优点逐渐成为了禽病诊断的重要方法。王爱华选取了直径为15nm的胶体金制备出了鸡减蛋综合征病毒实验条，检验效果较好；王泽霖利用胶体金标记了纯化的羊抗鼠IgG，建立出了一种对鸡传染性支气管炎病毒检测技术。

2.2 在犬病毒诊断方面的应用

徐葛林采用了柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒，用来标记狂犬病病毒单抗，制成了免疫层析试纸，结果显示，该纸条只与狂犬病病毒抗原有反应，与其他的均无反应，同时比较了近50份的可疑狂犬病唾液，负荷率较高。

2.3 在家畜疫病诊断方面的应用

郑鸣使用的双抗原夹心法建立了猪瘟病抗体的检测纸条，该方法方便、灵敏度高、区别度高，适合猪瘟的诊断。李恪梅用布鲁菌纯蛋白衍化物制作抗原，能够检测人和动物血液中的抗布鲁菌抗体。

3 免疫胶体金技术的进一步发展

目前，我国所使用的快速实验的成品多来自于国外，国内的研究水平还比较低。由于免疫胶体金的市场潜力巨大，要努力完善制作工艺，研制出我们自己的检测产品。

3.1 提高检测的灵敏度

一些实验的灵敏度能够达到1ng/mL，但还有一些试验不能达到这一水平。灵敏度的高低直接影响了胶体金技术的使用范围和使用效果。因此，可以利用信号放大系统、链亲和素与生物素结合等能够显著提高检测的灵敏度。

3.2 实施多元化检测

多元化检测即利用多种反应物测定，测定结果多元化，这种方法多使用在联检中，如乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体等以及巨细病毒、风疹病毒等抗体的检测等。

3.3 实施定量检测

使用免疫胶体金进行检测时，如果标本中的受检物的浓度不在试剂敏感度的范围内时为阳性反应，这种方法多用于检测正常体液中不存在的或含量极低但发生疾病时明显升高的物质。因此，必须考虑此种情况的存在，要考虑试剂原料和制作工艺是否科学合理，否则即使受检物相同在各分试剂中也能显示出不同的颜色。因此，要努力实现定量检测，提高检测的精确度。

4 结语

目前，兽医临床检测方法仍以血清检测法为主，它耗时长、步骤繁多，适用性较低。免疫胶体金技术以方便快捷、灵敏度高等优点受到了广泛的关注和应用，逐渐在兽医的疾病诊断和疫病检疫中显示出了独特的价值。随着各种标记方法的发展，免疫胶体金技术也进一步提高灵敏度，努力实现多元化检测，努力提高在兽医临床方面有高的应用价值。

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