蜂王浆中9种磺胺类药物残留测定方法研究

吕斌（浙江省江山市质量技术监督测试所，浙江江山324100）

蜂王浆中9种磺胺类药物残留测定方法研究

吕斌
（浙江省江山市质量技术监督测试所，浙江江山324100）

摘要：建立蜂王浆中9种磺胺类药物残留的固相萃取-高效液相色谱紫外分析方法。蜂王浆样品中的磺胺类药物残留用乙腈涡旋提取，提取液旋转浓缩近干后，用硫酸钠水溶液溶解，再经OasisHLB固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干后，用乙腈和磷酸溶解，用高效液相色谱分析，采用外标法定量。该方法的检测限为10μg/kg～15μg/kg，回收率在79.4%～84.3%之间，能满足目前蜂王浆中磺胺类药物残留测定要求。

关键词：蜂王浆；磺胺类药物残留；高效液相色谱紫外检测器；固相萃取

磺胺类药物（sulfonamides，SAs）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的药物。磺胺类药物具有抗菌谱较广、性质稳定、使用简便等特点，因此被广泛添加到饲料中饲喂给蜂蜜。磺胺药物在食品或农产品中的残留，会致使其在人体中蓄积，导致人类对许多细菌产生抗药性，从而对人类的身体健康造成很大的危害。因此，很多国家对食品中磺胺的使用种类和用量有严格的规定。国际食品法典委员会（CAC）和欧美等大多数国家规定食品（包括蜂产品）和饲料中的SAs总量及磺胺二甲基嘧啶等单个SAs的含量不得超过0.1mg/kg。日本则规定食品中不得检出SAs。

目前我国对磺胺类项目只有蜂蜜检测标准，分别采用液相色谱-荧光检测和LC/MS[1-2]，但鲜有相关蜂王浆中磺胺类药物残留检测方法报道，这给我国蜂王浆产品的正常出口造成潜在风险。为了减少抗菌药物的滥用，进一步控制磺胺类药物在蜂王浆中的残留，并与国际检测的先进水平接轨，必须建立简单易行的蜂王浆中磺胺类药物的残留检测方法。通过调查，选择9种磺胺（磺胺喹恶琳、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺噻唑、磺胺多辛、磺胺硝苯、磺胺吡啶）进行方法研究，建立蜂王浆中9种磺胺类药物残留分析方法-高效液相色谱紫外测定法。

1　材料与方法

1.1材料

蜂王浆：由浙江江山健康蜂业有限公司提供。

SAs标准品（磺胺喹恶琳、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺噻唑、磺胺多辛、磺胺硝苯、磺胺吡啶）：Sigma公司；磷酸、硫酸钠均为分析纯；乙腈、甲醇均为色谱纯；Oasis HLB萃取柱（200mg，6m L）。

高效液相色谱仪配紫外检测器（日本岛津LC-20AB）；无油真空泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公司，AP-01D）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂，RE-52A）；高速离心机（上海安亭科学仪器厂，TDL-50B）；超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司，KQ2200）；UP超纯水器（成都超纯科技有限公司，UPT-I-20T）。

1.2方法

1.2.1提取

准确称取蜂王浆样品3.00g至50mL离心管中，加入5mL10%硫酸钠水溶液振摇分散，然后加入30mL乙腈，涡旋提取8min，在6 000 r/min离心5min，吸取上清液，加入20mL乙腈溶液重复提取一次，离心，合并上清液到100mL鸡心瓶中，在40℃下用旋转蒸发仪减压浓缩至近干，加入5m L硫酸钠水溶液溶解待净化。

1.2.2净化

将样液过Oasis HLB萃取柱（200mg，6mL，使用前分别用5m L甲醇，5m L水活化），待洗脱液完全流出后，再用3mL水洗柱，在负压下抽干30min，最后用10mL甲醇洗脱，洗脱液收集到15mL离心管中，在40℃下，氮吹浓缩至近干，用1mL流动相溶解，经0.45μm滤膜后，供HPLC用。

1.3液相色谱操作条件

色谱柱：AgilentHC-C18（2）（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈+0.015mol/L磷酸梯度洗脱，见表1。

表1　乙腈-0.015mol/L磷酸为流动相梯度洗脱条件Table1　G radientelution condition ofacetonitrile-0.015m ol/L phosphoric acid

检测波长：270 nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。

1.4标准曲线的绘制

准确称取各磺胺类药物标准品于容量瓶中，以甲醇定容作为标准贮备液，吸取各标准贮备液，以甲醇稀释至质量浓度为0～20μg/mL的标准系列，各取10μL进样分析，根据峰面积与相应的质量浓度进行线性回归，绘制标准曲线。

2　结果与分析

2.1标准样品及样品添加分析色谱图

实际标样和添加样品分离色谱图见图1。

图1　9种磺胺类药物色谱图Fig.1　Chrom atogram sofnine su lfonam idesstandardsand samp les

在设定的条件下对标准样品和样品进行分析，从添加色谱图上可以看出，9种磺胺药物分离较好，没有明显的色谱杂质峰干扰。

2.2线性关系和检出限

分别配制不同浓度的9种磺胺类药物混合标准溶液，在选定的色谱条件下进行测定，用峰面积对混合标准溶液中各组分的浓度作图。线性方程和线性相关系数见表2。

2.3回收率和精密度

用不含9种磺胺类药物的样品进行两个添加水平回收率和精密度试验，结果列于表3。

从表3可以看出9种磺胺类药物在两个水平添加的回收率在79.4%～84.3%之间，变异系数小于5.4%，说明该方法能够满足对蜂王浆中9种磺胺类药物的残留测定。

表2　9种磺胺类药物的线性方程、相关系数和检出限Table2　Regression equationsand detection lim itsofnine sulfonam ides

表3　9种磺胺类药物的回收率（%）和精密度试验（n=5）Table3　Precisions and recoveries rateofnine su lfonam ides（n=5）

2.4实际样品测定

应用本方法对一些我市市场上的蜂王浆样品进行9种磺胺类药物分析，未检出上述9种磺胺类药物残留。

3　结论

本测定方法操作简单快速、重现性良好。9种磺胺类药物在蜂王浆中两个水平的添加回收率在76.2%～84.3%之间，两个不同水平的样品测定（n=5）相对标准偏差为2.6%～6.2%，最低检出限为10μg/kg。

参考文献：

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB/T 18932.5—2002.蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基、嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量的测定方法液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,2003

[2]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB/T 18932.17—2003.蜂蜜中16种磺胺残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法[S].北京:中国标准出版社,2004

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.22.033

收稿日期：2014-05-04

基金项目：江山市事后补助科研项目（2011D09）

作者简介：吕斌（1983—），男（汉），工程师，硕士研究生，主要从事检验检测工作。

Research of Determ ination of Nine Sulfonam ides Residue in Royal Jelly

LÜBin
（Jiangshan Measurement&Test InstituteofQuality&Technical Supervision，Jiangshan 324100，Zhejiang，China）

Abstract：A method for determination of nine sulfonamides residue in royal jelly by using solid-phase extraction high performance liquid chromatography with ultraviolet detector was established.Sulfonamides residuewasextractedwith acetonitrile.The sampleextractwasevaporated under reduced pressure and dissolved with sodium sulfate aqueous solution，and then purified by usingan Oasis HLB column，while the sulfonamides residuewaseluted offvia solid-phase extraction（SPE）cartridgewithmethanol and evaporated to drynesson nitrogen dry evaporator，and the residues were dissolved in acetonitrile and phosphoric acid solution.The sulfonamides derivateswere detected by a liquid chromatography with ultraviolet detector.The recoveries are 79.4%～84.3%，and the limit of detection of themethod is 10μg/kg to 15μg/kg.The developedmethod is suitable tomonitor sulfonamides residue in royal jelly samples.

Keywords：royal jelly；sulfonamides residue；HPLC-SPD；solid-phaseextraction（SPE）