宁波镇海区女性健康普查及相应HPV检测分析

袁慧敏，徐黎明，袁秋雁

(宁波市镇海龙赛医院病理科，浙江 宁波 315200)

宁波镇海区女性健康普查及相应HPV检测分析

袁慧敏，徐黎明，袁秋雁

(宁波市镇海龙赛医院病理科，浙江 宁波 315200)

目的 通过对宁波镇海区女性宫颈液基薄层细胞学(TCT)健康普查及相应二代基因杂交捕获法高危型人乳头状瘤病毒基因检测(HC2-HPV-DNA)，探讨两种技术联合应用在宫颈癌筛查中的价值。方法 对3 216例女性行宫颈TCT检查及相应HC2-HPV-DNA检测，并与病理活检结果进行对照分析。结果 在3 216例女性中，TCT检查异常者630例，阳性率19.6%(630/3 216)；在630例TCT检查异常者中HC2-HPV-DNA检测阳性者383例，阳性率60.8%(383/630)。TCT检查及HC2-HPV-DNA检测均阳性的383例行宫颈活检，病理诊断为CIN符合率为97.1%；TCT检查为阳性，HC2-HPV-DNA检测为阴性的247例行宫颈活检，病理诊断为CIN符合率为66.4%，经比较差异有统计学意义(χ2=9.40，P<0.01)。结论 宫颈TCT检查与宫颈HC2-HPV-DNA检测的联合应用对有效筛查宫颈癌尤为重要。

宫颈液基薄层细胞学；二代基因杂交捕获法高危型人乳头状瘤病毒基因检测；病理活检；宫颈癌；筛查

宫颈癌是女性中最常见的恶性肿瘤之一，经过国内外学者近20年的研究，已证明人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因。宫颈癌的发生和发展是一个渐进过程，早期宫颈癌如能及时发现并治疗，治愈率可达90%以上[1]。近年来，我国宫颈癌的发生呈明显上升和年轻化趋势，因此找到合理有效的宫颈癌筛查方法对于防治宫颈癌具有决定性意义。通过对本区体检女性行宫颈液基薄层细胞学(TCT)检查及相应二代基因杂交捕获法高危型人乳头状瘤病毒基因(HC2-HPV-DNA)检测，并结合病理组织活检分析，旨在探讨两种技术的联合应用对于有效筛查宫颈癌的价值，从而为本地区宫颈癌的防治工作提供一些帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集宁波市镇海龙赛医院2012年1月至2013年5月女性宫颈TCT体检病例3 216例，年龄23～67岁，平均年龄39.4岁。

选择3 216例中TCT检查异常者630例，进行HC2-HPV-DNA检测，怀疑高度鳞状上皮内病变以及阴道镜检查未见异常者同时行病理组织活检，以做比较性研究，年龄23～65岁，平均年龄34.7岁，且这些患者均无子宫和宫颈手术史。

1.2 方法

1.2.1 宫颈液基薄层细胞学检查

使用窥器暴露宫颈，用棉球轻轻擦去宫颈表面分泌物后，将颈管刷插入宫颈管内绕宫颈顺时针方向旋转3～5周，然后将颈管刷置入存有Thinprep保存液中的小瓶中搅拌，盖好瓶盖送检。保存液中的标本经清洁液及细胞基液离心沉淀处理后，在载玻片上制成直径为2cm的薄层细胞涂片，用95%酒精固定，巴氏染色，镜检。由病理科医师根据描述性诊断(the bethesda system，TBS)诊断标准进行细胞学诊断，包括无上皮内病变(NILM)；不典型鳞状细胞意义不明确(atypical squamous cell of undetermined significance,ASCUS)；低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)，包括HPV的细胞变化、轻度异型增生和宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ；高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)，涵盖中及重度异型增生、原位癌、CINⅡ和CINⅢ；鳞状细胞癌(squamous cell cancer,SCC)。TCT检查以≥ASCUS为阳性。

1.2.2 高危型人乳头状瘤病毒基因检测

按要求暴露宫颈后，用专用小刷子置于宫颈口与黏膜交界处逆时针转3圈，并停留10秒，将小刷子放于专用试管中，盖上盖子送检。按照操作规定，对标本进行13种高危型HPV(HR-HPV)亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型)的检测。诊断标准：光量读数与阴性测定值比值(RLU/CO)>1.0为阳性。

1.2.3 宫颈组织学检查

对TCT检查异常者行阴道镜检查，醋酸实验阳性或碘实验阴性者进行多点(3、6、9、12)活检，活检组织经10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm切片，苏木素-伊红(HE)染色，光镜观察。宫颈活检病理诊断≥CINⅠ级(轻度异型增生)判定为阳性。

1.3 统计学方法

运用SPSS 19.0统计软件处理数据，检出率的比较采用χ2检验，检验水准α=0.01。

2 结果

2.1 宫颈液基薄层细胞学检查各类异常涂片检出率

在3 216例TCT检查结果中，发现异常者630例，占19.6%，其中不同年龄组异常涂片分布情况见表1。各年龄组组间细胞学差异有统计学意义(χ2=13.53，P<0.01)，其中31～40岁和41～50岁是两个高发年龄段，分别占38.7%(244/630)和45.6%(287/630)，合计共占84.3%，LSIL在年龄轻者中发病率高，随着年龄的增长，HSIL的发病率逐渐升高。

表1 不同年龄组异常涂片分布[n(%)]

2.2 宫颈液基薄层细胞学检查结果与高危型人乳头状瘤病毒基因检测符合率

TCT检查630例阳性病例中，HC2-HPV-DNA检测阳性率60.8%；阴性率39.2%。TCT检查与HC2-HPV-DNA检测结果对照见表2。383例HC2-HPV-DNA检测阳性病例中HSIL和SCC的阳性率较高，分别为81.7%和100.0%，HC2-HPV-DNA检测在ASCUS与LSIL、HSIL、SCC间阳性率比较差异有统计学意义(χ2=21.54，P<0.01)。

2.3 宫颈液基薄层细胞学检查联合高危型人乳头状瘤病毒基因检测与宫颈活检结果对照情况

TCT检查及HC2-HPV-DNA检测均阳性的383例行宫颈活检，病理诊断为CIN者372例，符合率97.1%；TCT检查为阳性，HC2-HPV-DNA检测为阴性的247例行宫颈活检，病理诊断为CIN者164例，符合率66.4%，两者相比差异有统计学意义(χ2=9.40，P<0.01)，见表3。

表2 TCT检查与HC2-HPV-DNA检测结果对照[n(%)]

Table 2 Comparison of TCT examination and HC2 HPV-DNA testing[n(%)]

表3 TCT检查、HC2-HPV-DNA检测与病理活检对照[n(%)]

3 讨论

子宫颈因其解剖学位置及组织学特点，是妇产科疾病的好发部位，如急慢性宫颈炎、宫颈糜烂、宫颈息肉、宫颈癌等，尤其是宫颈癌，严重威胁着广大妇女的身心健康乃至生命安危。国际癌症研究中心(IARC)近年估计全球宫颈癌5年患病例数为150余万人，其中3/4以上的患者是在发展中国家，发达国家有30余万患者，全球每年有新发病例45.9万，其中我国每年新发病例13.15万，占28.7%，居首位[2]。宫颈癌显著的特点是有癌前病变期，从癌前病变发展成癌是一个较长的过程，大约是10年。因此宫颈癌是一种可预防、可治愈的疾病，关键是进行筛查，及早发现癌前病变，防患于未然[3]。

3.1 宫颈液基薄层细胞学检查应用于宫颈癌筛查

宫颈细胞学检查是宫颈癌早期诊断的重要筛查方法之一。传统巴氏细胞学涂片从上世纪中期开始一直是宫颈癌前病变常规筛查的最常用的方法之一，但是由于取材时有80%以上的细胞样本随取材器被丢弃，转移至载玻片上的细胞很少，且涂片质量差，涂片不均匀、过厚，血液、黏液等杂质遮蔽了不正常细胞，使读片受到干扰，影响阳性检出[4]。TCT技术将取得的标本及时放入保存液中，可使黏液软化，并与细胞分离，减少细胞退变，避免阳性细胞堆积和丢失，经高精度滤器过滤制成薄层涂片。研究表明，TCT技术的发展有效地弥补了传统巴氏涂片技术的局限性，明显提高了宫颈异常细胞的检出率，而且TCT采用与之相适应的TBS分类法，有助于细胞学诊断的准确性，便于细胞学医生与临床医生之间的交流[5]，成为国内外妇产科宫颈阴道疾病检查的常规方法。

20世纪80年代后，随着分子生物学技术的应用，国内外大量研究已证实HPV感染是宫颈癌的主要危险因素。依据HPV与肿瘤的关系，不同类别的HPV感染可以导致不同的临床病变。CINⅠ常由HPV6、11型引起，CINⅡ、Ⅲ则常伴有HPV16、18、31、35型感染等[6]。目前发现感染肛门生殖器的HPV可分为低危型和高危型，低危型常在宫颈良性或低度病变的病灶中检测到，而高危型通常在高度病变中发现。高危型HPV感染是宫颈癌前病变的发展和随后宫颈癌进展的一种主要危险因子[7]。美国有研究发现：在30岁以下有性生活的年轻妇女中生殖道HPV感染率很高，但是将近3/4的感染者无症状，大部分HPV感染会自然消退，有临床症状的仅占20%左右[8]，这也间接地说明了只有高危型HPV感染才与宫颈癌的发病有关。目前常检测的有13种高危型HPV(HR-HPV)亚型，即16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型。HC2-HPV-DNA检测可提高宫颈癌及癌前病变筛查的敏感性，是宫颈癌筛查的重要手段。

3.2 宫颈液基薄层细胞学检查联合二代基因杂交捕获法高危型人乳头状瘤病毒基因检测应用于宫颈癌筛查

有学者指出TCT检查特异性高于HPV检测，但HPV检测敏感性高于TCT检查，将两者结合可使宫颈癌前病变和早期宫颈癌的筛查准确性明显提高[9]。本研究发现，TCT检查及HC2-HPV-DNA检测均阳性者，CIN发病率明显增高，而且高度病变占很大部分比例，TCT单独诊断的阳性率为66.4%，而与HC2-HPV-DNA联合诊断的阳性率为97.1%，差别有统计学意义(P<0.01)。说明HC2-HPV-DNA联合TCT对宫颈癌前病变诊断的准确性较高，优于单独应用TCT检查。本研究中还发现从年龄段上，CIN在31～50岁发生率明显较其他年龄段高，此年龄段应作为重点筛查对象。有文献指出，建议有性生活史约3年后就开始宫颈普查(年龄不超过21岁)，30岁之前应每年做1次常规的宫颈细胞学检查，或每2年做1次TCT检查，对连续3次细胞学检查结果正常或阴性者，到30岁以后可每2～3年普查1次，70岁以上的妇女如连续3年以上细胞学检查结果正常或阴性，同时在70岁以前的10年中无异常或阳性细胞学检查结果者，可以选择停止宫颈癌的普查[10]。

总之，研究结果表明TCT检查联合HC2-HPV-DNA检测可显著提高对宫颈癌前病变诊断的灵敏度，是一种较准确和具有实用价值的宫颈癌筛查方法。对及时发现宫颈癌前病变，最大限度地降低宫颈癌的病死率有非常重要的临床价值。

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[9]楼玲芳.液基薄层细胞学检测和高危型人乳头状瘤病毒检测在宫颈癌及癌前病变筛查和预后判断中的应用价值[J].中国医师进修杂志,2013,36(15):41-43.

[10]谢幸,苟文丽.妇产科学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013:231-232.

[专业责任编辑：安瑞芳]

二手烟暴露增加儿童成年后颈动脉斑块风险

芬兰一项长达26年的研究显示，暴露于二手烟的儿童颈动脉粥样斑块的风险较高。研究者使用1980年收集的超过1 000名儿童的冷冻血液样本，及1980年、1983年父母报告的吸烟状况的资料；并于2001至2007年对这部分儿童在成年期(平均36岁时)进行了超声检查，结果显示，有2%在成年期具有颈动脉斑块。超过84%的非吸烟者孩子血液中无尼古丁，而父母一方吸烟的孩子中为43%，父母双方都吸烟的为62%。相比非吸烟者，这些孩子成年后颈动脉斑块的风险增加1.5倍，但是那些二手烟暴露较多的儿童则风险增加4倍。该研究发表在2015年3月《循环》(Circulation)杂志上。

http://www.univadis.cn/medical-news/86/Circulation3?utm_source=adhoc+emails&utm_medium=email&utm_campaign=sp+emails&utm_term=manual

Health screening and HPV-DNA testing in women in Zhenhai district of Ningbo City

YUAN Hui-min, XU Li-ming, YUAN Qiu-yan

(Department of Pathology, Zhenhai Longsai Hospital, Zhejiang Ningbo 315200, China)

Objective To evaluate the significance of combined application of TCT and HPV-DNA testing in screening of cervical lesion. Methods TCT and HC2-HPV-DNA testing were performed for 3 216 women and the results were compared to pathological biopsy. Results Totally 630 cases were positive in TCT examination, with positive rate of 19.6% (630/3 216), including 383 cases with positive results in HC2-HPV-DNA testing (60.8%, 383/630). The cases with positive results in TCT examination and HC2-HPV-DNA testing underwent cervical biopsy, and the CIN coincidence rate of pathological diagnosis was 97.1%. There were 247 cases with positive results in TCT examination but negative results in HC2-HPV-DNA testing, and their CIN coincidence rate of pathological diagnosis was 66.4%. The difference in coincidence rate was statistically significant (χ2=9.40,P<0.01).Conclusion It is particularly important to combine TCT examination with HC2-HPV DNA testing in screening of cervical concer.

TCT；HC2-HPV-DNA testing；pathological biopsy；cervical cancer；screening

2014-08-22

宁波市镇海区科技局立项课题资助项目(项目编号2012S1012)

袁慧敏(1971-)，女，副主任医师，主要从事临床病理诊断工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.02.074

R737.33

A

1673-5293(2015)02-0376-03