普罗布考对血管性痴呆大鼠行为学及海马细胞凋亡的影响

王茜 徐玉振

普罗布考对血管性痴呆大鼠行为学及海马细胞凋亡的影响

王茜 徐玉振

普罗布考；血管性痴呆；Morris水迷宫；学习记忆；凋亡

1 材料和方法

1.1 材料 雄性3月龄清洁级Wistar大鼠60只，体质量(220±10)g，购于山东中医药大学。

1.2 方法 将大鼠60只随机分为模型组、假手术组和普罗布考组，每组20只。模型组和普罗布考组大鼠以两血管法制作血管性痴呆模型[1]，假手术组仅分离双侧颈总动脉不接扎。血管性痴呆模型采用Zea Longa等5分制评分[2]评价，1～3分表示造模成功，入组实验。最终，假手术组、普罗布考组和模型组分别有20只、18只和17只大鼠入组实验。普罗布考配制成浓度为5%的溶液，普罗布考组以普罗布考安体质量500 mg/kg，1次/d，灌胃4周，模型组和假手术组以等体积羧甲基纤维素钠灌胃。Morris 水迷宫[3]行隐蔽平台实验3 d，1次/d，记录逃避潜伏期，测试大鼠的学习能力，第4天撤除平台，记录停留原平台象限时间，测试大鼠的记忆能力。Morris 水迷宫实验结束后，取海马做冷冻切片，冠状位切片，厚度约10 μm，行TUNEL染色，激光扫描共聚焦显微镜400倍镜下观察凋亡细胞，镜下计数5个非重叠视野，计算凋亡细胞的平均值。凋亡细胞表现为在细胞质出现绿色荧光。

1.3 统计学处理 采用SPSS18.0统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差表示；Morris 水迷宫逃避潜伏期和停留原平台象限各时间组间比较采用单因素方差分析，海马神经元凋亡检测两组间比较采用t检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Morris水迷宫学习记忆能力的比较 与假手术组相比，模型组大鼠第1天，第2天和第3天的逃避潜伏期均明显较长，原平台象限停留时间均明显较短(P<0.05)；与模型组相比，普罗布考组大鼠的逃避潜伏期明显较短，原平台象限停留时间明显较长(均P<0.05)；与假手术组比较，普罗布考组大鼠的逃避潜伏期明显较长，原平台象限停留时间明显较短(P<0.05)。结果见表1。

表 1 各组大鼠Morris水迷宫学习记忆能力的比较

注：与假手术组同一天比较，*P<0.05；与模型组同一天比较，#P<0.05

A：假手术组；B：模型组；C：普罗布考组

图1 各组大鼠海马凋亡神经元表现(TUNEL×400)

2.2 海马神经元凋亡检测 激光扫描共聚焦显微镜下可见凋亡的海马神经元呈绿色，绿色荧光定位在细胞质，模型组凋亡神经元满布视野且绿色荧光最强，普罗布考组与模型组比较凋亡神经元数明显减少，对照组仅有少量凋亡神经元(图1)。与假手术组(23.4±4.5)比较，模型组(200.2±10.7)与普罗布考组(82.0±7.8)海马凋亡神经元数明显较多(P<0.05)；与模型组比较，普罗布考组海马凋亡神经元数明显较少(P<0.05)。

3 讨论 已有研究表明，普罗布考可改善阿尔茨海默病的认知功能[4-5]，但普罗布考改善血管性痴呆认知功能的研究较少。Morris水迷宫的逃避潜伏期和停留原平台象限时间可反映大鼠的学习记忆能力，而TUNEL阳性细胞数可反映海马神经元的凋亡情况。本研究发现，与假手术组比较，模型组及普罗布考组大鼠的逃避潜伏期延长，原平台象限停留时间缩短，海马凋亡细胞增多；而与模型组大鼠比较，普罗布考组逃避潜伏期明显缩短，原平台象限停留时间延长，海马凋亡细胞数减少，提示普罗布考不仅可改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力，也可减少血管性痴呆大鼠海马神经元的凋亡。普罗布考改善血管性痴呆的学习记忆能力，推测其可能通过减少海马神经元凋亡发挥作用。但普罗布考改善认知功能的机制尚未完全清楚，有待于进一步研究，为临床治疗血管性痴呆提供新的思路

[1]张艳,李倩倩,霍薇.血管性痴呆动物模型的研究现状[J].中国神经免疫学和神经病学杂志,2015,22(1):67-70.

[2]Zea Longa E, Weinstein PR, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J]. Stroke,1989,20(1):84-91.

[3]徐玉振，秦丽晨，刘运林. 消旋-3-正丁基苯酞对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响[J].中华行为医学与脑科学杂志，2011，20(4)：309-311.

[4]Santos DB, Colle D, Moreira EL, et al. Probucol mitigates streptozotocin-induced cognitive and biochemical changes in mice[J]. Neuroscience, 2015, 284: 590-600.

[5]Santos DB, Peres KC, Ribeiro RP, et al. Probucol, a lipid-lowering drug, prevents cognitive and hippocampal synaptic impairments induced by amyloid beta peptide in mice[J]. Exp Neurol, 2012, 233(2): 767-775.

(本文编辑：邹晨双)

10.3969/j.issn.1006-2963.2015.03.019

271000泰安市中心医院中心实验室(王茜)；200233泰安市中心医院神经内科(徐玉振)

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2014-10-23)