家族性中枢神经系统炎性脱髓鞘病患者HLA－DQB1基因多态性的研究

高雅然，于宁，高燕军

(1.承德医学院，河北承德 067000 2.承德医学院附属医院神经内科，河北承德 067000）

家族性中枢神经系统炎性脱髓鞘病患者HLA－DQB1基因多态性的研究

高雅然1，于宁1，高燕军2*

(1.承德医学院，河北承德 067000 2.承德医学院附属医院神经内科，河北承德 067000）

目的：探讨家族性中枢神经系统炎性脱髓鞘病患者人类白细胞抗原(HLA）－DQB1基因的多态性。方法：应用序列特异性引物－聚合酶链反应(PCR－SSP）技术分析13例家族性中枢神经系统炎性脱髓鞘病患者的HLA－DQB1基因的多态性。结果：HLA－DQB1*03等位基因频率显著高于HLA－DQB1*02、05、06(P＜0.05）。结论：在家族性脱髓鞘病患者的HLA－DQB1基因多态性的研究中，DQB1*03的基因频率显著高于其他，推测HLA－DQB1*03可能是该类疾病的易感基因。

HLA－DQB1;脱髓鞘病;基因多态性;多发性硬化

中枢神经系统炎性脱髓鞘病(central nervous system inflammatory demyelinating diseases，CNSIDD）是一类病因不尽相同、临床表现各异、却又有共同的病理过程，以神经髓鞘脱失、轴突相对完好为特征的自身免疫性疾病的统称。脱髓鞘疾病中多发性硬化(multiple sclerosis，MS）最为多见［1］。国外研究表明，CNSIDD的发病受遗传基因的影响，HLA－Ⅱ基因多态性与MS的易患性紧密相关［2，3］。迄今，国内外关于CNSIDD与HLA－DRB1基因相关性的研究较多，而与HLA－DQB1基因多态性的研究少见报道。本研究采用PCR－SSP方法分析承德地区13例家族性CNSIDD患者HLADQB1等位基因的多态性。

1 资料与方法

1.1 研究对象：研究对象为2007年至2012年承德医学院附属医院门诊和住院的2个家系13例CNSIDD患者。其中男7例，女6例，年龄37～56岁，平均(41.5 ±13.2）岁。本研究共追溯到2家系51人，其中13人患病，患者多中年急性、亚急性起病，无明显前驱感染病史，MRI示双侧大脑半球白质内多发斑片状异常信号，多数患者出现头晕、头痛，记忆力、智能较前减退，其中一例出现偏瘫，综合诊断为家族性脱髓鞘病。经检查排除脑白质营养不良、脑血管病、经典MS(依据2010年McDonald［4］的MS诊断标准）等的可能性，故暂定义为家族性中枢神经系统脱髓鞘病。该研究通过伦理委员会同意，受试者全部知情并同意。

1.2 方法

1.2.1 基因组DNA的提取：取研究受试者外周静脉血5mL，EDTA抗凝。采用血液基因DNA提取试剂盒(TIAN amp Blood DNA Kit），提取出基因组DNA。1.2.2 HLA－DQB1等位基因的检测：采用PCR－SSP法，按照HLA－DQB1基因SSP分型试剂盒(德国PROTRANS公司）所示试验方法进行分析。①配制主混合液：BufferR46ul，Buffer－Y94ul，Tag酶1.1ul。加34ulDNA样品(50－100ng/ul）到主混合液，并充分混匀、加样。②PCR扩增程序：起始变性94℃、2min，变性94℃10s、退火和延伸65℃1min，10个循环，变性94℃、10s，退火6l℃、50s，延伸72℃、30s，20个循环，4℃保温。③凝胶制备和电泳，分析判断结果。

1.3 统计学分析：应用SPSS17.0统计软件，进行四格表卡方检验。

2 结果

13例家族性脱髓鞘患者中，共计检出4种HLADQB1等位基因，见表1。经统计学分析，HLA～DQB 1 *03等位基因频率显著高于HLA－DQB1*02、05、06等位基因频率(P＜0.05）。故推测HLA－DQB1*03等位基因可能与家族性CNSIDD的易患性相关。

表1 13例家族性脱髓鞘患者HLA－DQB1等位基因的分布

3 讨论

目前CNSIDD的病因及发病机制尚未完全明确，此类疾病多集中在自身免疫损伤和髓鞘结果破坏两大环节，具有明显的遗传异质性［5］。虽然此类疾病各具特点，但以MS为最多见［6］，是一种范围很广的系谱疾病，这些疾病常相互重叠，易被误诊。MS呈现家族聚集现象，同胞间患病相对危险度增加。

目前普遍认为HLA－DRB1基因与MS强关联，此外，研究证实HLA－DQB1也发挥重要作用。但目前不同种群易感基因不尽相同。在对挪威与瑞典白人、非洲裔巴西人的研究显示MS与DQB1*0602相关联［7，8］。而我国上海的一项研究［9］显示DQB1*0502与该地区21例MS人群显著相关联，吴晓牧等在2011年的一项研究显示南方汉族人群MS患者同样与DQB1*0502相关［10］。香港的一项研究通过对DR阳性表达的MS患者与DR阳性对照组的比较发现，HLA－DQB1*0602基因频率在病例组显著高于对照组，提示DQB1*0602可能与MS的发病相关。

2012年的一项分析研究表明，DQB1链接上第38位的Ala/Val残基与*0602作用正相关，与*0502* 0601负相关。由此可知，特定独立的DQB1*授予MS易感性和抵抗性。Lincoln等［11］认为，MS患者HLA单倍型比单个位点更能发挥作用，单独携带DRB1* 1501和DQB1*0602的患者罹患MS的相对危险度(RR）显著低于单体型DRB1*1501－DQB1*0602携带者的RR。通过对突尼斯MS患者的研究发现，HLA－DRB1*15－DQB1*06和HLA－DRB1*04－DQB1* 04单倍型与MS易患性相关。而以色列的阿拉伯MS患者则是与HLA－DRB1*0301－DQB1*0201相关。说明不同种群单倍型组合形式不尽相同。

本研究结果显示，HLA－DQB1*03等位基因频率(50%）显著高于HLA－DQB1*02、05、06(P＜0.05），故推测DQB1*03基因可能是家族性CNSIDD的易感基因。各国各地区研究结果不尽相同，本研究结果目前国内尚未见报道，可能与东西方人种、环境因素、实验技术的差异有关，也可能和本研究样本量小有关。同时也支持不同临床类型的脱髓鞘病关联不同等位基因的观点，因为本文的患者并不能严格归类于经典MS或NMO(视神经脊髓炎），进一步深入的研究可能会揭示此类疾病的病因及发病机制。

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B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.06.033

1006－6233(2015）06－0973－03

*通讯作者：高燕军，Email：yanjungao2009@126.com