戈舍瑞林对前列腺组织微血管密度及血管内皮生长因子影响的基础研究*

黄洪，徐庆春，张源锋，池泽湃，余庆锋，张永海

(广东省汕头市中心医院泌尿外科，广东汕头 515031）

戈舍瑞林对前列腺组织微血管密度及血管内皮生长因子影响的基础研究*

黄洪，徐庆春，张源锋，池泽湃，余庆锋，张永海＊＊

(广东省汕头市中心医院泌尿外科，广东汕头 515031）

目的：探讨戈舍瑞林对前列腺组织微血管密度(MVD）及血管内皮生长因子(VEGF）影响。方法：随机选取60只雄性SD大鼠，并且随机分成A、B、C、D、E、F六组;A组采取正常的饲养方式，其余各组均进行隔日颈部皮下注射丙酸睾丸酮建立大鼠前列腺增生模型，在第29天时随机选取一组(B）处死观察模型是否建立成功，并取前列腺组织进行HE染色;剩余各组中，C组灌注生理盐水(15m L/kg），D、E、F每日给予等量的戈舍瑞林溶液灌胃(1.0mg/kg），分别持续1～3周后处死，观察各组前列腺增生例数、前列腺重量、VEGF在前列腺组织中的表达、MVD在前列腺组织中的表达差异。结果：A、B、C、D、E、F六组大鼠中，A组正常饲养，结果大鼠前列腺没有发生增生，B、C、D、E、F五组均有不同程度的前列腺增生，并且每组10只老鼠全部发生增生。B、C、D、E、F五组前列腺增生重量分别于A组比较，发现重量均明显高于A组，差异具有统计学意义(P＜0.05），五组之间采用单因素方差分析及组间比较差异不具有统计学意义(P＞0.05）;C、D、E、F四组前列腺增生模型大鼠中，C组未采用戈舍瑞林灌胃，其VEGF阳性细胞面积、MVD均显著高于D、E、F三组，差异具有统计学意义(P＜0.05）; D、E组间VEGF阳性细胞面积、MVD间差异不具有统计学意义(P＞0.05）;D、E两组的VEGF阳性细胞面积、MVD均明显高于采用戈舍瑞林灌胃时间更长的F组，且差异具有统计学意义(P＜0.05）。结论：前列腺增生模型大鼠的前列腺组织微血管密度(MVD）及血管内皮生长因子(VEGF）表达水平明显增高，戈舍瑞林能够有效降低MVD、VEGF的表达水平。

戈舍瑞林;前列腺组织组织微血管密度;血管内皮生长因子

前列腺增生是因前列腺体积发生进行性增大而引发的一种疾病，该病发病机制复杂，具有较高的发病率，会严重影响患者的生活质量和健康［1］。因此，对前列腺增生的早期诊断和治疗显得尤为重要。研究表明［2］，机体内激素水平平衡失调和前列腺增生的发生和发展关系密切［2］。其中，前列腺组织微血管密度(MVD）及血管内皮生长因子(VEGF）在前列腺增生病情的发生和发展中具有重要作用。本研究主要以60只健康成年的SD大鼠为研究对象，分析了戈舍瑞林对前列腺组织微血管密度(MVD）及血管内皮生长因子(VEGF）影响。具体如下。

1 资料与方法

1.1 动物：随机选取健康成年的SD大鼠60只(由同济医学院动物实验室提供），平均体重(288±28）;所有大鼠均饲养在清洁柜中，采取自由进食进水的饲养方式。实验室室温保持在23°C左右，采用钝头大鼠灌胃针进行灌胃操作，动物称重采用感应0.1g的天平，动物标本采用千分之一的分析天平。

1.2 试剂：丙酸睾丸酮注射液(由天津市灏洋生物制品科技有限责任公司生产，批号：0503241）;多克隆抗体VEGF(由自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司生产）;SP免疫组化染色试剂盒(由天津市灏洋生物制品科技有限责任公司生产）;剂由山西医科大学第一医院病理科提供的二甲苯、酒精、苏木素，戈舍瑞林溶液(由AstraZeneca UK Limited生产，批准文号： H20040447）。

1.3 实验方法：随机选取60只雄性SD大鼠，并且随机分成A、B、C、D、E、F六组;A组采取正常的饲养方式，其余各组均进行隔日颈部皮下注射丙酸睾丸酮建立大鼠前列腺增生模型，在第29天时随机选取一组(B）处死，并取前列腺组织进行HE染色观察模型是否建立成功;剩余各组中，C组灌注生理盐水(15mL/ kg），D、E、F每日给予等量的戈舍瑞林溶液灌胃(1.0mg/kg），分别持续1～3周后处死。

1.4 标本处理：所有大鼠均进行灌药完毕后，继续正常饲养1周时间，饲养结束后将其处死，将前列腺摘除，并放置在感量为千分之一的分析天平上进行称重，对前列腺的指数进行计算，计算公式为：(前列腺重量/大鼠体重）×100%，同时测量所有前列腺的体积，并用浓度为10%的甲醛溶液固定前列腺后用石蜡包埋。

1.5 观察指标及结果判定：观察各组前列腺增生例数、前列腺重量、VEGF在前列腺组织中的表达、MVD在前列腺组织中的表达差异。VEGF表达判定：染色细胞质呈棕褐色定为阳性，在×40倍的显微镜下观察VEGF染色阳性的细胞面积;MVD判定标准：100倍显微镜下观察染色的微小血管数目，每张片观察5个视野计算平均值。

1.6 统计方法：所有数据应用SPSS10.0进行统计分析。计量资料均以(±s）表示，采用配对资料的t检验或单因素方差分析，两两比较采用SNK－q检验，检验水准取α=0.05。

2 结果

2.1 各组前列腺增生情况：A、B、C、D、E、F六组大鼠中，A组正常饲养，结果大鼠前列腺没有发生增生，B、C、D、E、F五组均有不同程度的前列腺增生，并且每组10只老鼠全部发生增生。B、C、D、E、F五组前列腺增生重量分别于A组比较，发现重量均明显高于A组，差异具有统计学意义(P＜0.05），五组之间采用单因素方差分析及组间比较差异不具有统计学意义(P＞0.05）。各组前列腺增生情况见表1。

表1 各组前列腺增生情况(±s）

表1 各组前列腺增生情况(±s）

组别例数前列腺增生(只）前列腺重量(g） A 10 0 0.11187±0.06784 B 10 10 0.34824±0.15426 C 10 10 0.35458±0.14287 D 10 10 0.35228±0.16132 E 10 10 0.34895±0.15289 F 10 10 0.35374±0.16341

2.2 各组VEGF阳性细胞面积及MVD个数情况：C、D、E、F四组前列腺增生模型大鼠中，C组未采用戈舍瑞林灌胃，其VEGF阳性细胞面积、MVD均显著高于D、E、F三组，差异具有统计学意义(P＜0.05）;D、E组间VEGF阳性细胞面积、MVD间差异不具有统计学意义(P＞0.05）;D、E两组的VEGF阳性细胞面积、MVD均明显高于采用戈舍瑞林灌胃时间更长的F组，且差异具有统计学意义(P＜0.05）;各组VEGF阳性细胞面积、MVD情况见表2。

表2 VEGF阳性细胞面积、MVD情况(±s）

表2 VEGF阳性细胞面积、MVD情况(±s）

组别例数VEGF阳性细胞面积(cm2）MVD(个） C 10 64.8±22.7 26.4±3.88 D 10 44.2±12.9 14.9±2.76 E 10 42.8±14.6 14.1±2.71 F 10 35.4±18.5 9.2±2.04

3 讨论

前列腺增生是临床上常见的一种男性疾病，多发于老年群体，且近年来该病的发生率有呈逐年上升的趋势［3］。该病发病机制复杂，目前临床上尚未得到统一的定论。相关研究表明［6］，血管内皮生长因子对血管内皮细胞的增殖和迁移具有促进作用，有利于前列腺增生的产生、发展和恶化，是前列腺增生的重要致病因子［4］。此外，VEGF及其受体的结合会引起淋巴管内增生皮细胞，促进血管和淋巴管的形成，从而使淋巴管的通透性增加，促进前列腺增生病情的发展。因此，临床诊治时，可以将其作为食管癌治疗进展和预后的重要参考指标［5］。微血管密度是临床上诊治前列腺增生的一种重要指示剂，其含量可以有效反映前列腺增生患者新生血管的变化［7］。临床研究表明［8］，前列腺增生患者MVD密度会明显增高。

戈舍瑞林属于黄体生成素释放激素(LHRH）类似物，常用于前列腺增生、子宫内膜异位症以及乳腺癌等疾病的临床治疗中。该药物具有模拟黄体生成素释放激素的作用，且较LHRH具有更强的生物效应。戈舍瑞林作用于机体，可以使血清中垂体分泌黄体生成素水平升高，从而促进睾酮的分泌，达到抑制内皮生长因子(VEGF）的分泌，降低微血管密度(MVD）的效果。相关研究表明，戈舍瑞林溶液在良性前列腺增生的临床治疗中可以有效降低患者的微血管密度(MVD）及血管内皮生长因子(VEGF）水平，提示戈舍瑞林溶液可以有效治疗前列腺增生，较好地缓解患者的病情。

本研究通过对60只雄性SD大鼠分别采取正常的饲养方式和隔日颈部皮下注射丙酸睾丸酮建立大鼠前列腺增生模型，并分别灌注生理盐水和戈舍瑞林溶液灌胃，结果显示，A、B、C、D、E、F六组大鼠中，A组正常饲养，结果大鼠前列腺没有发生增生，B、C、D、E、F五组均有不同程度的前列腺增生，并且每组10只老鼠全部发生增生。B、C、D、E、F五组前列腺增生重量分别于A组比较，发现重量均明显高于A组，五组之间采用单因素方差分析及组间比较差异不显著，表明隔日颈部皮下注射丙酸睾丸酮可以使大鼠发生前列腺增生，且增生后大鼠重量显著增加。另外，C、D、E、F四组前列腺增生模型大鼠中，C组未采用戈舍瑞林灌胃，其VEGF阳性细胞面积、MVD均显著高于D、E、F三组，D、E组间VEGF阳性细胞面积、MVD间差异不显著。D、E两组的VEGF阳性细胞面积、MVD均明显高于采用戈舍瑞林灌胃时间更长的F组，且差异显著，表明采用戈舍瑞林灌胃可以有效降低前列腺增生大鼠的组织微血管密度(MVD）及血管内皮生长因子(VEGF）水平，这一结果和相关文献报道的数据相吻合。

［1］DelGuerra S，DA＇leoV，GualtierottiG，etal.A common poly－morphism in the monocyte chemoattractant protein－1 (MCP－1）gene regulatory region influences MCP－1 expression and function of isolated human pancreatic islets［J］.Transplant Proc，2010，42(6）：2247～2249.

［2］何庆鑫，李学德.慢性前列腺炎与细胞因子的关系研究进展［J］.中华男科学杂志，2011，17(10）：939～942.

［3］Vidas Z.Polymorphisms in Toll－like receptor genes－implications for prostate cancer development［J］.Coll Antropol，2010，34(2）：779～783.

［4］周青，田雪飞，龚秀英，等.加味虎杖散对自身免疫性前列腺炎模型大鼠炎症因子MCP－1及PDGF－BB表达的影响［J］.中华男科学杂志，2011，17(1）：83～88.

［5］黄志洪，卢玉忠，李慎果，等.丹红通精方对自身免疫性慢性前列腺炎大鼠血液及前列腺组织细胞因子水平的影响［J］.中国医药导报，2011，8(26）：36～38.

［6］王威，王荫槐.心理治疗在伴性功能障碍的ⅢB型慢性前列腺炎患者中作用的临床研究［J］.中国性科学，2013， 22 (7）：91～93.

［7］罗会治.少精弱精患者伴解脲支原体及慢性前列腺炎的中西医结合治疗后的精液分析［J］.中国性科学，2013， 22 (7）：52～56.

［8］周昀，唐杰，张明博，等.尿道周围前列腺组织弹性模量与良性前列腺增生患者IPSS的相关性研究［J］.中国医学影像学杂志，2012，20(7）：540～544.

Gore Sherry Lin on the Prostatic Tissue of M icrovessel Density and Vascular Endothelial Grow th Factor

HUANGHong，XU Qingchun，ZHANGYuanfeng，et al
(The Central Hospital of Shantou，Guangdong Shantou 515031，China）

Objective：To discuss the effect of Gore Sherry Lin on the prostatic tissue ofmicrovessel density(MVD）and vascular endothelial growth factor(VEGF）.Method：sixtymale SD ratswere randomly divided into 6 groups.Group A was raised as normal，other groupswere under subcutaneous injection of testosterone in order to establish the benign prostate hyperplasia(BPH）model.Rats in group B were executed after 29 days of treatment of testosterone for the purpose ofmodel evaluation，and their prostate tissueswere stained with HE.Group C was treated with normal saline in a dose of 15mL/kg，and Group D，E and F was treated with Gore Sherry Lin in a dose of 1.0mg/kg each day，and then executed in the 1st，2nd and 3rd week，respectively.Result：BPH was found in five groups except group A，0f which the weight of prostate was significant lighter than other five groups(P＜0.05）.The comparison of prostate weight between group B，C，D，E and F showed no significant different(P＜0.05）.The area of MVD and VEGF positive cells in group C were significant bigger than that in group D，E and F.There was no significant different in area of MVD and VEGF positive cells between group D and E.The area of MVD and VEGF positive cells in group Fwere significant smaller compared with group D and E.Conclusion：Treatmentwith Gore Sherry Lin in BPH rats effective on reducing the expression levels of MVD，VEGF.

Gore Sherry Lin;Prostate tissue microvessel density;Vascular endothelial growth factor

A

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.06.004

1006－6233(2015）06－0891－04

2012年广东省汕头市医疗科技重点计划项目，(编号：汕府科(2012）113号/3）

＊＊通讯作者，Email：zhyhst@163.com