益母草颗粒中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定

王宁莉，张书华，王丽霞

(1.铜川市食品药品检验检测中心，陕西铜川727031；2.西安市阎良区630医院，陕西西安710089)

益母草颗粒中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定

王宁莉1，张书华1，王丽霞2

(1.铜川市食品药品检验检测中心，陕西铜川727031；2.西安市阎良区630医院，陕西西安710089)

目的 建立测定益母草颗粒中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量的HPLC测定法。方法 采用高效液相色谱法，以Kromasil 100-5NH2(Dimensions 250×4.6 mm，5μm)E78824和AgilentTC-C18(2)(250×4.6 mm，5μm)588925-902为色谱柱，检测波长：192 nm和277 nm，流动相：乙腈-水(80∶20)、乙腈-0.3%庚烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液(24∶76)，流速为1.0 mL/min。理论板数：按盐酸水苏碱峰计算应不低于5000、按盐酸益母草碱峰计算应不低于8000。结果 盐酸水苏碱在0.18～1.08 mg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.99998，平均回收率为99.6%，RSD小于2.0%；盐酸益母草碱在7～41μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.99998，平均回收率为99.8%，RSD小于2.0%。结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高、重现性好，适用于益母草中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的含量测定。

益母草颗粒；高效液相色谱；盐酸水苏碱；盐酸益母草碱；含量测定

益母草颗粒为妇科经产之要药，主要用于血瘀所致的月经不调、产后恶露不绝，症见经水量少、淋漓不净、产后出血时间过长，产后子宫复旧不全症候；[1]收载于《中国药典》2010年版一部，其主要成分为盐酸水苏碱、盐酸益母草碱等，在《中国药典》2010年版一部中对其成分盐酸水苏碱采用薄层色谱方法进行含量测定[2]，因薄层色谱法存在重复性差，测定不准确等弊端，采用高效液相色谱法对其盐酸水苏碱、盐酸益母草碱进行含量测定。

1 仪器与试剂

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-20A检测器，AY-220型电子天平。盐酸水苏碱对照品：中国食品药品检定研究院，批号：110712-201312；盐酸益母草碱：中国食品药品检定研究院，批号：111823-201202；样品：三金集团湖南三金制药，批号：130304；广西灵峰药业有限公司，批号：1514014；四川逢春制药有限公司，批号：121017；山东三九制药有限公司，批号：1003253。其他：乙腈为色谱醇，西格玛奥德里奇贸易有限公司；庚烷磺酸钠为离子对试剂，天津市科密欧化学试剂有限公司；磷酸为分析纯，天津市化学试剂有限公司；水为屈臣氏蒸馏水

2 盐酸水苏碱的测定方法

2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：Kromasil 100-5NH2(Dimensions 250×4.6 mm，5μm)E78824，填充剂：氨丙基键合硅胶，柱温：30℃，检测波长：192 nm，流动相：乙腈-水(80∶20)，[3]流速：1.0 mL/min，理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于5000。

2.2 溶液的制备方法

(1)供试品溶液的制备取益母草颗粒2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定重量，水浴回流2 h，放冷称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，即得。

(2)对照品溶液的制备取盐酸水苏碱精密称定，加70%乙醇，制成每mL含0.6 mg的溶液。供试品图谱、对照品图谱见图1与图2。

2.3 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12μL，注入液相色谱仪测定，以进样量为纵坐标(Y)，峰面积为横坐标(X)，计算回归方程：Y=3.513-0.013X，r=0.99998，结果表明盐酸水苏碱在0.18～1.08 mg范围内线性关系良好。

图1 盐酸水苏碱供试品图谱

图2 盐酸水苏碱对照品图谱

2.4 精密度试验

精密量吸取盐酸水苏碱对照品溶液10 μL，连续进样6次，测得峰面积分别为2677786、2669259、2670157、2677234、2670351、2668357，其相对标准偏差RSD值为0.16%(n=6)。

2.5 稳定性试验

取同一样品的供试品溶液，在0、4、8、12、16、20、24 h分别进样，考察测定的结果在24 h内的稳定性，7次测定峰面积分别为1500846、1502773、1504149、1497210、1480181、1492944、1487040，其相对标准偏差RSD为0.59%。结果表明样品在24 h内具有良好的稳定性。

2.6 重复性试验

按供试品溶液的制备方法，对同一供试品平行处理6份，分别进行结果测定，测得盐酸水苏碱平均含量为0.21mg/g，RSD为0.73%。

2.7 加样回收率试验

取已知含量的供试品6份，每份各2 g，精密称定，每份均精密加入5 mL浓度为0.01 mg/mL的丹参素钠对照品溶液，按照2.2中供试品溶液制备的方法进行处理，测定并计算。结果见表1。

3 盐酸益母草碱的测定方法

3.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：AgilentTC-C18(2)(4.6×250 mm，5μm)588925-902，填充剂：十八烷基硅胶键合硅胶，柱温：40℃，检测波长：277 nm，流动相：乙腈-0.3%庚烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液(24∶76)，流速：1.0 mL/min，理论板数按盐酸益母草碱峰计算应不低于8000。

3.2 溶液的制备方法

(1)供试品溶液的制备取2.2制备的供试品溶液。

表1 盐酸水苏碱加样回收率

(2)对照品溶液的制备取盐酸益母草碱精密称定，加70%乙醇，制成每mL含0.035 mg的溶液。供试品图谱、对照品图谱见图3与图4。

图3 盐酸益母草碱供试品图谱

图4 盐酸益母草碱对照品图谱

3.3 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12μL注入液相色谱仪测定，以进样量为纵坐标(Y)，峰面积为横坐标(X)，计算回归方程：Y=5.524+0.0004112X，r=0.9998，结果表明盐酸水苏碱在7～41μg范围内线性关系良好。

3.4 精密度试验

精密量吸取项下盐酸益母草碱对照品溶液10μL，连续进样6次，测得峰面积分别为622686、623264、621769、620936、619751、637564，其相对标准偏差RSD值为1.0%(n=6)。

3.5 稳定性试验

取同一样品的供试品溶液，在0、4、8、12、16、20、24 h分别进样，考察测定的结果在24 h内的稳定性，7次测定峰面积分别为379460、378401、378375、373123、376914、378270、377424，其相对标准偏差RSD为0.54%。结果表明样品在24h内具有良好的稳定性。

3.6 重复性试验

取2.6项下的供试品溶液，分别进行结果测定，测得盐酸水苏碱平均含量为0.253 mg/g，RSD为1.3%。

3.7 加样回收率试验

取已知含量的供试品6份，每份各3 g，精密称定，每份均加入浓度为0.268 mg/mL的盐酸益母草碱对照品溶液5mL，精密量取，按照2.2中供试品溶液制备的方法进行处理，测定并计算。结果见表2。

表2 盐酸益母草碱加样回收率

4 样品中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱的含量测定

取益母草颗粒待测样品四批，按照2.2中供试品溶液的制备方法进行制备，得到样品溶液。分别精密量取10μL的对照品溶液和样品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。结果见表3。

表3 样品中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱的含量

5 结论

5.1 供试品的制备方法的选择

分别通过732钠型阳离子交换树脂柱洗脱提取[1]、活性炭吸附提取[3]、加热回流提取[4]，实验结果表明加热回流提取有效成分含量最佳，所以选用加热回流对有效成分进行提取。同时对实验溶剂进行了选择，分别对50%[5]、70%的乙醇进行提取，实验结果表明70%乙醇提取效果较佳，所以选用70%乙醇进行提取。

5.2 色谱柱的选择

在盐酸水苏碱方法研究中对色谱柱进行了选择，采用C18色谱柱不同比例的流动相进行分离，盐酸水苏碱都无法保留，采用氨基柱进行分离，盐酸水苏碱在11 min得到了很好的保留，所以选用氨基柱对盐酸水苏碱进行分离。

实验结果表明益母草颗粒中的有效成分盐酸水苏碱和盐酸益母草碱的含量可以用HPLC法进行质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：272-273.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(第二增补本)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：150-150.

[3]任江剑，徐建中，王志安.HPLC法测定鲜益母草中盐酸水苏碱含量[J].中药新药与临床药理，2006，17(5)：216-218.

[4]张玉萌，项菲菲.益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量测定[J].辽宁中医药大学学报，2013，15(2)：73-74.

[5]吴海林，甄录旭，方宗华，等.HPLC法测定益母草中盐酸水苏碱的含量[J].安徽医药，2008，12(7)：597-598.

HPLC determination of hydrochloric stachydrine and hydrochloric leonurine in motherwort granules

WANGNing-li1,ZHANGShu-hua1,WANGLi-xia2

(1.Tongchuan center food and drug control,Tongchuan 727031,China;2. Xi'an yanliang 603 hospital,Xi'an 710039,China)

Objective To establish a method for content determine of hydrochloric stachydrine and hydrochloric leonurine in motherwort granules.Methods An HPLC method was adopted.The separation was carried out on a Kromasil 100-5NH2(Dimensions 250×4.6 mm,5 μm) E78824 column and a Agilent TC-C18(2)(4.6×250 mm,5 μm) 588925-902 column. The UV detective wavelength was set at 192 nm and 277 nm. Acetonitrile-water (80:20) and acetonitrile-0.3% heptane sulfonate diluted by 0.1% phosphate (24:76) as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. Theoretical plate number were below 5000 and 8000 calculated by the curves of hydrochloric stachydrine and hydrochloric leonurine,respectively.Results Good linear relationship between the masses and the peak areas of hydrochloric stachydrine and hydrochloric leonurine in the ranges of 0.18～1.08 mg(r=0.99998) and 7～41 μg(r=0.99998),respectively.The average recovery were 99.6% and 99.8%,respectively and RSD were both less than 2.0%.Conclusion The method is simple,rapid, accurate,precise and reliable for the determination of hydrochloric stachydrine and hydrochloric leonurine in motherwort granules.

Motherwort granules; HPLC; Hydrochloric stachydrine; Hydrochloric leonurine; Assay

王宁莉(1983—)，女，陕西富平人，铜川市食品药品检验检测中心主管中药师。

R284.1

A

1672-2639(2015)02-0004-03

2014-09-25；责任编辑 徐文梅]