野菊花中总黄酮的提取

邓 贺 钟 政

（国家食品药品监督管理总局一四六仓库，河北 石家庄 050071）

野菊花是菊科植物野菊的干燥头状花序，其主要成分为总黄酮，具有清热解毒、降血压、抗病毒、抑制血小板凝聚等功能[1-2]，野菊花水剂可抑制金葡菌、大肠杆菌、痢疾杆菌等一般致病菌，且对异烟肼、链霉素和氨基水杨酸钠耐药或敏感的结核杆菌均有明显的抑菌作用，为了有效地开发和利用药材资源，充分提取野菊花所含的总黄酮等成分，我们采用正交试验的方法进行了制备工艺的研究。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：电子万用炉（天津泰斯特仪器有限公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生仪器厂）；752N型紫外光谱仪（上海广照光电科技有限公司）；电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；高速离心喷雾干燥机（常州市振兴干燥设备厂）；蠕动泵（常州科健蠕动泵厂）；微型空气压缩机（上海力彪机械制造有限公司）；PHS-2酸度计（上海第二分析厂）；NDJ-1型黏度计（上海天平仪器厂）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；Olympus-CH 型生物显微镜（日本进口）；烘箱（LAB供应集团）；电冰箱（购自青岛海尔集团）；棕色瓶、无色瓶（购自安国义通中药材有限公司）5000 mL圆底烧瓶，冷凝管。

1.2 试剂与样品：芦丁对照品。野菊花（为菊科植物野菊的干燥头状花序）；乙醇；亚硝酸钠，硝酸铝溶液，氢氧化钠溶液，蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 总黄酮的提取

2.1.1 对照品及供试品溶液的制备：①对照品溶液的制备： 精密称取经120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品25 mg，置50 mL容量瓶中，加30%乙醇适量，使充分溶解，放冷，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀备用[2]。②供试液的制备：精密称取野菊花5 g，加到烧瓶中，加水100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加热回流1 h，分取滤液，药渣加水80 mL，继续水浴加热回流30 min，滤过，合并滤液，滤液置200 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作供试液，待用。

2.1.2 含量测定：①标准曲线的制备：精密量取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mL，分别置于50 mL容量瓶中分别记号1、2、3、4、5、6，各加水12 mL，加5%亚硝酸钠溶液2mL，使混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液2 mL，摇匀，放置6 min，加1%氢氧化钠溶液20 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的试剂溶液为空白。按分光光度法（中国药典2000年版一部附录VB），在500 nm波长处测定3次吸收度，以吸收度的平均值为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定的标准液的吸光度和标准曲线如下，得回归方程：y=20.754x-0.0039（R2=0.9967）。见表1。③供试液的测定：精密量取供试液10 mL，置50 mL容量瓶中，照标准曲线方法进行操作，显色，在500 nm波长处测定吸收度A1，另精密量取供试液10 mL，置50 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在500 nm波长处测定吸收度A2，取二次吸收度的差值，由回归方程计算样品中总黄酮的含量3.10%[3]。

表1 不同浓度的野菊花提取液的紫外吸光度

2.1.3 提取溶剂的选择：①乙醇提取：精密称取野菊花5 g，加到烧瓶中，加乙醇100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加热回流1 h，分取乙醇液，药渣加乙醇80 mL，继续在水浴加热回流30 min，合并乙醇液，滤过，滤液置200 mL量瓶中，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作供试液，待用。②水提取：精密称取野菊花5 g，加到烧瓶中，加水100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加热回流1 h，分取水，药渣加水80 mL，继续在水浴加热回流30 min，合并提取液滤过，滤液置200 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作供试液，待用。③结果比较：上述供试液通过紫外-分光光度法测定野菊花总黄酮含量，测定结果见表2。 由表1和表2结果可知，乙醇提取略优于水提取。但考虑到在实际生产中，野菊花在提取过程中会吸收2～3倍的溶剂，造成生产成本显著增加，因此本试验选择廉价的水作为试验提取溶剂。

表2 提取溶剂不同所得的野菊花总黄酮含量

2.1.4 水提取工艺的考察：①考察因素及水平：选择提取次数、提取温度、提取时间和用水量等4个因素，每个因素选择3个水平，编制因素水平表见表3。 ②试验与结果：准确称取野菊花5 g，按 表3正交表没计方案进行试验，取液稀释至200 mL作供试液，进行含量测定，以测得野菊花总黄酮含量为指标进行分析。结果见表4。由表3可知，A、B、C、D 4个因素对野菊花总黄酮提取的影响程度不同，各因素的影响程度依次为A＞B＞D＞C，其中A 因素为影响野菊花总黄酮提取的主要因素，B因素为影响野菊花总黄酮提取的次要因素。同时也从结果分析中发现，提取次数超过2次时，提取次数为野菊花总黄酮提取的非主要因素。充分考虑C、D因素为从野菊花中提取野菊花总黄酮的非主要因素，最终确定野菊花提取工艺A2B3C3D1，即野菊花用水提取2次，溶剂用量依次为8、6倍，提取温度100 ℃，提取时间为40 min、40 min。

表3 野菊花总黄酮提取工艺因素水平表

表4 野菊花水提工艺正交设计表

3 讨 论

3.1 野菊花分别用乙醇和水提取，测定野菊花总黄酮含量，前者比后者要高，说明用乙醇提取比用水提取较完全，但考虑到生产实际中野菊花在提取过程中吸收2～3倍的溶剂，造成生产成本显著提高，因而选用价廉的水作为提取溶剂[4]。

3.2 本次试验通过正交试验法对野菊花的提取工艺条件进行优化，并按最佳工艺进行了验证试验，结果证明用该工艺提取野菊花总黄酮工艺简单、提取率高、操作控制容易、稳定性好、适合于工业化生产。

[1] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编(上册)[M].北京:人民卫生出版社,1975:789-790.

[2] 北京市野菊花协作组.野菊花制剂临床观察一附454例疗效分析[J].中药通报,1983,8(4):39-40.

[3] 李道中,程村贵.野菊花提取液的药理及临床应用[J].药学进展,1999,23(6):344.

[4] 国家药典委员会.中国药典,2005版,第二部,附录[S].北京:化学工业出版社,2005.