不同产地乌药质量研究

2015-06-06朱发伟孙乙铭王彬辉王海英沈晓霞王志安俞旭平

浙江中西医结合杂志 2015年12期

关键词：乌药去甲波尔

朱发伟孙乙铭王彬辉王海英沈晓霞王志安俞旭平

·药学园地·

不同产地乌药质量研究

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乌药；有效成分；产地；含量

乌药为樟科植物乌药Lindera aggregate（Sims）Kosterm.的干燥块根，具有行气止痛，温肾散寒。用于寒凝气滞，胸腹胀痛，气逆喘急，膀胱虚冷，遗尿，尿频，疝气疼痛，经寒腹痛[1]。乌药在国内许多地区均有分布，其中以浙江天台所产的品质最佳，故称为台乌药，被认为是乌药的道地产区。药理研究表明，乌药具有广泛的药理活性，其主要有效成分为异喹啉类生物碱及呋喃倍半萜。本实验采用高效液相测定不同产区乌药醚内酯、异乌药内酯及去甲异波尔定的含量，以探讨不同产地乌药药效成分的差异，以评价不同产地乌药质量，并为浙产乌药的开发利用提供科学依据，也为乌药的质量评价奠定基础。

1 仪器与试剂

1.1 仪器[2]安捷伦Agilent1100高效液相色谱仪及Agilent化学工作站，DAD检测器；伊利特公司Hypersil ODS2 Cl8分析柱（4.6mm×250mm×5μm）；去离子水。

1.2 试药[3]乌药醚内酯、异乌药内酯、去甲异波尔定标准品（批号分别为：12061303、12061302、12021704，四川成都曼思特生物科技有限公司）；乌药药材采集于浙江、江西、湖南等地，经浙江省中药研究所药材室鉴定为樟科植物乌药 Lindera aggregate（Sims）Kosterm.的干燥块根；乙腈、甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法

2.1 乌药醚内酯与异乌药醚内酯含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱：伊利特公司Hypersil ODS2 C18分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）；流速：1.0mL/min；检测波长：235nm；柱温：25℃；进样量：10μL。采用梯度洗脱，分时流动相比例A为0～5min：35%（A）；25～30min:55～75%（A）；30～45min：75～100%（A）。理论板数按乌药醚内酯和异乌药醚内酯计算不低于3000。乌药醚内酯对照品、异乌药醚内酯对照品和乌药样品色谱图见图1。

2.1.2 对照品溶液的制备分别精密称定乌药醚内酯和异乌药醚内酯标准样品适量，用甲醇溶解并稀释，配成每1mL含0.11mg的乌药醚内酯和异乌药醚内酯的标准品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约1.5g，精密称定，置索氏回流提取器中，加入乙醚溶液70mL，加热回流4h，提取液挥干，残渣用甲醇分次溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系的考察精密吸取该对照品溶液2、4、6、8、10、12μL，按上述色谱条件测定峰面积，分别以峰面积为纵座标（Y），对照品进样量为横座标（X）。绘制标准曲线，并计算回归方程，乌药醚内酯的回归方程为：Y=122.87X+7.33，r=0.9999，线性范围：0.11～1.32μg。异乌药醚内酯回归方程为Y=84.969X+ 4.22，r=1.0，线性范围：0.11～1.32g。

图1 HPLC图谱（a乌药醚内酯对照品色谱图；b异乌药醚内酯对照品色谱图；c乌药样品的HPLC色谱图，1峰为乌药醚内酯，2峰为异乌药醚内酯）

2.2.2 精密度试验精密吸取含乌药醚内酯和异乌药醚内酯的标准品溶液，重复进样5次，每次10μL，考察测定的精密度，乌药醚内酯面积相对标准偏差为0.97%，乌药醚内酯面积相对标准偏差为0.59%。2.2.3 稳定性试验取同一标准品溶液，室温下放置，分别在0、4、8、12、24h进样10μL测定，乌药醚内酯峰面积RSD为0.58%，异乌药醚内酯峰面积相对标准偏差为0.73%，表明标准品溶液在室温下比较稳定。

2.2.4 重复性试验取同一乌药样品6份，依“2.1.1.1 色谱条件”条件测定乌药醚内酯和异乌药醚内酯含量，样品乌药醚内酯含量，相对标准偏差RSD为2.95%；异乌药醚内酯含量相对标准偏差RSD为3.35%，表明该方法的重复性较好。

2.2.5 加样回收率试验取已知含量的乌药样品，分别添加乌药醚内酯和异乌药醚内酯对照品后，同上述条件，进行测定，见表1～2。