细胞实验室污染原因及有效预防控制措施的分析

邱小华 ，贺文凤 ，梁茜 ，胡龙华

(南昌大学第二附属医院；1、分子医学重点实验室；2、检验科，江西 南昌330006)

实验污染一直困扰着科研和临床医务工作者，污染可能导致实验结果错误，甚至科研失败，污染可能导致检验结果错误，延误患者治疗或治疗失败。细胞实验室对环境要求更为严格，导致医学细胞实验室污染因素很多，如：实验操作过程中产生的气溶胶，带有粉末、微生物的空气进入无菌实验室，污染试剂，操作技术人员无菌观念较差，无菌操作不规范等等。Wedum[1]认为实验室感染中65%以上的感染是由微生物气溶胶引起的，而且微生物气溶胶在一个实验室内产生后,还可以通过气流转移到同一建筑物的其他地方,甚至污染整个建筑物的空气[2]。近期，我科细胞实验室短期内出现几次细胞培养严重污染情况，对此，我们进行了污染原因分析，并采取了相应的预防措施，达到了预期的效果，现将调查报告如下。

1 材料与方法

1.1 采样 针对3次严重污染情况，均采集无菌培养室不同方向的空气，培养箱各个层面的气体，净化工作台面棉拭子，净化工作台四个顶角及台面中央同时采集了5个空气点，可疑细胞培养基等。1.2培养 将采集的各种标本置入血平板培养基和PDA培养基，置37℃、5%CO2的培养箱中培养24h及48h，分别观察血平板和PDA平板上细菌生长情况，根据生长情况，用VITEK2-Compact全自动微生物分析仪鉴定。

2 结果

干预前3次培养结果观察见表1。

表1 干预前培养结果

干预前培养基内见大量连接成长链状的芽生孢子并可见到大量菌丝。此外,在部分培养基中见到球形细菌，经过革兰染色为革兰阴性球杆菌和革兰阳性球菌，经VITEK2-Compact全自动微生物分析仪鉴定为鲍曼不动杆菌和白念珠菌。

干预后未见培养基内克隆生长。

3 讨论

3.1 主要对策 (1)75%的酒精擦拭净化工作台及培养箱：酒精消毒。酒精属于醇类消毒剂，其优点为作用较快，性能稳定，基本无腐蚀性，无毒，而且渗透能力强，进入细菌体内使其蛋白质凝固，从而杀死细菌。但其缺点为对细菌芽孢及鲍曼不动杆菌和白念珠菌无效。以巴氏消毒液消毒地面及操作台面,并以紫外线照射过夜。巴氏消毒液有效成分是次氯酸钠，有很强的氧化性，但仍对细菌芽孢无效，消毒后对培养基、净化工作台、培养箱及室内空气采样培养，血平板仍见克隆生长。(2)甲醛(40%)10ml/m2,高锰酸钾5g/m2，熏蒸细胞培养室：封闭熏蒸24h后，开窗通风，置换室内空气中的甲醛，并以75%的酒精拭净化工作台及培养箱。甲醛与高锰酸钾反应产生甲醛气体，甲醛气体能使菌体蛋白质变性凝固，溶解菌体类脂，杀灭物体表面和空气中的细菌繁殖体、真菌芽胞和病毒[3-9]。消毒后对培养基、净化工作台、培养箱及室内空气采样培养，血平板均未见克隆生长。

3.2 预防控制措施 (1)严格执行细胞实验室规章制度：在运行中不断完善无菌实验室规章制度，并加强无菌实验室的管理。对外来的进修人员、实习学生进入实验室前要接受培训和教育，在掌握了一定的基本理论与实验技能、操作规程等，并在带教老师的指导下方可进行实验操作。(2)培养箱、无菌室、净化台定期消毒：净化工作台实验前紫外灯消毒30min，实验后再用75%的酒精擦拭台面，对生物样本和实验废弃物进行高压蒸汽灭菌后，丢弃医疗废物桶，无菌室以甲醛(40%)10ml/m2,高锰酸钾5g/m2浓度定期封闭消毒[10，11]，甲醛气体必须分布到房间的每个角落。(3)杜绝感染源的产生：尽量减少实验人员频繁出入细胞实验室，进入实验室必须穿隔离衣，实验操作时动作轻柔，避免微生物气溶胶的产生。一旦发现细胞污染，应立即查明原因，采取有效可靠方法彻底清除污染源，阻止细胞大面积污染。(4)控制实验室湿度与温度：鲍曼不动杆菌和霉菌等广泛存在于自然界中，属于条件致病菌，有着很强的繁殖能力，温暖潮湿的环境，就会大量滋生[12-18]。必须控制室内温度湿度，保持细胞室的干燥与清洁来阻止其繁殖或切断其传播途径。

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