传染性单核细胞增多症患儿细胞免疫功能变化及意义

刘志强，段荣，柯江维

(江西省儿童医院检验科，江西 南昌330006)

传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis，IM)是由 EB 病毒(Epstein-Barr virus，EBV)感染引起的淋巴细胞增生性传染病，小儿时期常见。临床上以发热、咽峡炎、淋巴结及肝脾大、外周血中淋巴细胞增加并出现异型淋巴细胞等为特征[1．2]。近年来，随着临床免疫学研究的发展，本病免疫功能的改变受到更多的关注。DNT细胞 (CD3+CD4-CD8-T细胞)是新近发现的一类细胞表面既不表达CD4分子同时也不表达CD8分子的T细胞群,它属于双阴性调节性T淋巴细胞，对免疫应答有抑制作用，是机体在感染、肿瘤及自身免疫等过程中进行调节的关键因素[3]。本文通过检测IM患儿不同病期外周血DNT细胞与T淋巴细胞分化抗原(CD)的表达水平，并与健康儿童的相应指标作对比分析，观察IM患儿细胞免疫状态的变化及可能对预后的影响。

1 资料与方法

1.1 标本来源 3例IM患儿均为本院血液科2011年9月至2013年7月收治的住院患儿。男36例，女27例。年龄12个月~9岁。均符合IM诊断标准[4]。健康对照组30例，均为同期体检的健康儿童，男17例，女13例；年龄1~8．5岁。两组间性别、年龄相比无显著性差异(P＞0.05)。

1.2 检测方法

1.2.1 标本采集 采集IM患儿急性期、恢复期及对照组健康儿童清晨空腹静脉血lml，置含肝素抗凝管中，标本2h内检测。

1.2.2 淋巴细胞CD系列表达检测 取美国BD公司CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE 鼠抗人荧光单克隆抗体混合试剂20ml，加入肝素抗凝血100μl，混匀，室温避光孵育20min，分别加入红细胞裂解液1ml，室温避光放置 10min，1000r/min 离心 5min，弃上清液，用PBS洗涤2次，弃上清，加PBS 250μl上机，采用BD公司FACSCanto流式细胞仪检测受检者外周血淋巴细胞CD3+CD4-CD8-淋巴细胞及CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+淋巴细胞的百分率,采用BD FACSDiva软件进行结果分析。

1.3 统计学处理采用SPSSl3.0软件处理，数据以表示，组间均数比较采用配对和成组设计t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

急性期IM患儿DNT细胞、CD3+T细胞、CD3+CD4-CD8+T细胞百分比显著高于恢复期IM患儿和对照组儿童 (P<0.01)，CD3+CD4+CD8-T细胞百分比显著低于恢复期IM患儿和对照组儿童 (P<0.01)。恢复期IM患儿DNT细胞、CD3+T细胞、CD3+CD4-CD8+T细胞、CD3+CD4+CD8-T细胞百分比与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。见表1。

表1 IM患儿与对照组DNT细胞及T淋巴细胞亚群水平测定值(s，%)

表1 IM患儿与对照组DNT细胞及T淋巴细胞亚群水平测定值(s，%)

组别 n CD3+ CD3+CD4+CD8- CD3+CD4-CD8+ DNT急性期恢复期对照组63 63 30 85.22±4.31 68.96±1.41 66.89±8.23 20.76±5.13 51.24±4.38 52.64±6.25 62.14±8.21 37.66±5.21 35.42±6.28 10.17±4.16 6.09±1.82 5.64±1.61

3 讨论

IM是儿童原发性EBV感染的典型表现，有关研究发现EBV对机体免疫功能的影响可能在IM的发病过程中起着重要作用[5]。典型的IM约80%是CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞(CTL)扩增活化，它们有良好的溶细胞能力，不仅能识别并杀死EBV感染的B细胞，抑制其分化增殖，还能通过释放过量细胞因子导致IM症状[6]。所以IM患儿的症状不是病毒复制直接引起，而是T淋巴细胞免疫反应的结果。亦有研究显示T细胞激活程度和IM临床症状严重程度有一定关联[7]。因此监测IM患儿细胞免疫功能的改变、掌握正常免疫个体T细胞亚群变化的规律有重要的临床意义。

本实验测定了IM患儿不同时期外周血淋巴细胞 CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+的表达，结果显示：急性期CD3+、CD3+CD4-CD8+T细胞百分比明显增高，CD3+CD4+CD8-T细胞百分比明显降低，与林珊[8]报道一致。恢复期CD3+CD4+CD8-T细胞百分比升高、CD3+CD4-CD8+T细胞百分比降低，但与健康儿童无显著性差异 (P>0.05)，CD3+T细胞百分比与健康儿童比较无显著性差异 (P>0.05)，与金海荣等[9]的报道不相一致，是否因样本因素或其它因素有待进一步的观察。

在急性EBV感染后，大量EBV特异性CD3+CD4-CD8+T细胞增殖，它们有很强的细胞毒作用功能，能杀灭感染的B细胞，并消除病毒[10]。而CD3+CD4+CD8-T细胞在细胞免疫过程中起到免疫辅助作用，同时也具备杀伤功能，在维持EBV感染后细胞免疫反应与被感染细胞清除的平衡中起到一定的作用[11]。本文中IM患儿急性期与对照组健康儿童比较CD3+CD4+CD8-T明显下降，CD3+CD4-CD8+T明显升高，而且CD3+CD4-CD8+T急性期与恢复期比较明显升高且有显著性差异(P<0.05)。分析原因由于IM患儿急性期CD3+CD4-CD8+T淋巴细胞大量扩增以控制EBV诱导B淋巴细胞增殖，而CD3+CD4+CD8-T淋巴细胞在辅助此过程中被消耗。

以往研究发现，在外周DNT细胞中存在去甲基化的CD8基因[12]，对DNT细胞基因高保守序列进行多个基因位点分析，得出DNT细胞的前体细胞可能是CD8+T细胞[13]，以上研究暗示DNT细胞可能来源于CD3+CD4-CD8+T细胞。体外研究表明，人类DNT细胞在体外被激活后可产生TNF-α，IFN-γ，而不分泌IL-4[14]；从转基因小鼠中纯化出的DNT细胞可通过抑制同系基因型CD4+T细胞或CD8+T细胞来发挥其免疫抑制功能[15]。而Kyttaris等[16]用IL-23R处理取自 MRL/lpr小鼠淋巴结的淋巴细胞可诱导出DNT细胞，此DNT细胞亦高表达IL-17，向淋巴细胞缺陷小鼠输注此DNT细胞后可导致小鼠狼疮样肾炎发生。本研究发现急性期IM患儿DNT细胞是增多的，推测其可能因为EBV的感染，导致大量EBV特异性CD3+CD4-CD8+T细胞增殖，进而促进DNT细胞大量增殖，协同促进炎症反应的加重。但对于IM患儿DNT细胞确切的作用及机理目前还不清楚。

总之，IM是T细胞功能紊乱性疾病，检测外周血DNT细胞与T细胞亚群变化对评估患儿的细胞免疫功能状况，判断病情预后具有十分重要的临床意义，同时，针对IM患者细胞免疫功能紊乱的状态，在原治疗的基础上进行细胞免疫调节治疗，一定程度上可促进病情恢复，有效改善预后。

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