P r e mi e r H b 9 2 1 0糖化血红蛋白分析仪性能验证

邓纪望，叶秋灵，高云翔，蔡燕玲，刁文连

(中山市大涌医院，广东 中山528000)

HbA1c是红细胞中血红蛋白与萄萄糖不可逆地进行非酶促蛋白糖基化反应的产物，其值反映了整个红细胞半衰期(大约60d)的血糖水平并与这段时间的平均血糖水平有显著的关系。随着HbA1c在2型糖尿病的诊断和一级预防中的作用被人们所认可和重视[1,2],HbA1c的准确测定越来越重要。HbA1c检测较OGTT试验简便易行，结果稳定，变异性小，且不受进食时间及短期生活方式改变的影响，患者依从性好。2010年ADA指南已将HbA1c≥6.5%作为糖尿病诊断标准之一。2011年WHO也建议在条件具备的国家和地区采用这一切点诊断糖尿病[3]。为了了解PremierHb9210糖化血红蛋白分析仪配套检测系统在本室能否达到厂家的分析性能指标以及我国《糖化血红蛋白实验室检测指南》[4]的要求，是否适用于我室进行临床检测，我们对其分析性能进行了验证，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 全部标本均来自2014年8-9月我院健康体检、门诊及住院患者，HbA1c检测值在3.9%～6%之间有28例，HbA1c检测值在6%～15%之间有18例，HbA1c检测值超过15% 者2例，共48例，整个验证过程未采集与患者隐私相关的个人信息。

1.2 仪器与试剂 Premier Hb9210全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂 (HPLC和硼酸盐亲和原理)，试剂 A(批号:4544)，试剂 B(批号:4423)，色谱柱 (批号：4551)，WASH(批号:4437) ，DIL( 批号:4479)。VARIA2全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂 (中山大学附属中山医院医学检验中心，表1中用A代表)。

1.3 方法 严格按照校准程序进行仪器校准，方法评价期间每日测定2个水平定值质控品，在室内质控在控的情况下进行检测。实验方案如下。

1.3.1 准确度验证 选用20个不同浓度的样本，将其等分成两份，一份在我室分别进行全血模式及手工稀释模式检测，一份送中山大学附属中山医院医学检验中心用全血模式检测，计算结果并进行比对，要求同时满足：(1)相对偏差达到厂家声明标准<5%；(2)绝对差值在±0.5%HbA1c内，以控制在±0.3%HbA1c为宜[4]；(3)配对资料 T检验差异无统计学意义。

1.3.2 携带污染评估

1.3.2.1 方案 根据说明书要求，需要准备两个红细胞比积大致接近的样本，一个高HbA1c浓度值样本，一个低HbA1c浓度值样本，将低HbA1c浓度值样本等分成11个样本，将高HbA1c浓度值样本等分成10个样本，等分后共21个样本。在分析这21个样本时，不允许有其他样本或测试在仪器上运行，分析时样本必须按下列顺序分析，否则实验将会无效。样本序列：3低/2高/1低/2高/4低/2高/1低/2高/1低/2高/1低。

1.3.2.2 计算携带污染(残余值)=高-低结果的平均值—低-低结果的平均值、误差限度=3倍的低-低结果的标准方差)、两个水平的CV值。

1.3.2.3 要求 (1)每个水平的CV值计算要低于2%；(2)携带污染＜误差限度。

1.3.3 精密度评价 根据EP15-A2文件[5]，对高、中、低3个浓度水平的HbA1c标本，每个标本每天检测4次，每次间隔2h，共5d[6-8]。对每个浓度水平独立进行精密度评价，计算其平均值、标准差和CV值。要求不精密度在厂家声明的不精密度(≤2%)范围。

1.3.4 线性范围评估 参考 《临床化学设备线性评价指南》[9]对线性范围进行验证，将接近分析仪检测上限的高值样本和检测下限的低值样本按不同比例混合成5个不同浓度的标本，浓度分别为A：100%低值，B：75%低值+25%高值，C：50%低值+50%高值，D：25%低值+75%高值，E：100%高值。混合均匀后将各个浓度的标本分别测定4次，取其均值，采用直线回归方程进行数据分析，直线回归方程，y=mx+b。 要求:0.97≤m≤1.03,R2≥0.95。

1.3.5 参考区间验证 根据 《临床实验室检验项目参考区间的制定》[10]小样本验证方方案，选20例健康体检人员样本测定HbA1c，要求超出参考区间(HbA1c4%~6%)样本≤2。

1.4 统计学处理 数据采用SPSS17.0统计软件处理。对离群值的检验用格拉布斯(Grubbs)法，两样本均数比较，采用配对样本t检验，P<0.05表示两种方法的检测结果之间的差异有统计学意义[11]。

2 结果

2.1 准确度及全血稀释验证 A：检验中心结果，B：全血模式结果，C：手工稀释(1：150)模式结果；全部结果相对偏差满足厂家声明要求；绝对偏差满足我国《糖化血红蛋白实验室检测指南》的要求；配对资料T检验结果：A组与B组、A组与C组，B组与C组P值分别为0.718、0.673、0.936，两者差异无统计学意义。见表1。

表1 准确度验证结果

2.2 携带污染验证 按照3低/2高/1低/2高/4低/2高/1低/2高/1低/2高/1低的顺序HbA1c%结果为4.83、4.86、4.92、15.88、15.81、5.02、15.91、15.82、5.11、5.03、4.95、4.87、15.78、15.86、4.97、15.73、15.94、5.03，其中高-低标本检测值(±s)为 5.02±0.057，CV%为 1.14%；低-低标本值(±s)为 4.93±0.069．CV%为 1.39%;携带污染为 0.09，误差限度为0.21。所有结果均符合要求。

2.3 精密度验证 对于3个不同水平的HbA1c样本， 检测结果 (HbA1c%，±s) 为 4.78±0.077、7.93±0.086、11.56±0.083，不精度 (CV%) 分别为 1.61、1.08、0.72，不精密度均符合要求。见表2。

2.3 线性范围验证 线性范围验证结果见表3，经回归分析糖化血红蛋白浓度在4.0%~18.7%内呈线性，直线回归方程:y=1.005x-0.142。R2=1≥0.95，符合线性要求。

2.4 参考区间验证结果 20例健康体检者HbA1c(%)全部在参考区间4%~6%范围内，验证通过。

3 讨论

在2002年，美国糖尿病学会(ADA)将HbA1c定义为糖尿病病人血糖监控的 “金标准”，HbA1c＜7%时，一般可采用饮食和运动疗法。HbA1c＞7%时，不管OGTT的诊断是糖耐量减退还是糖尿病，均需要药物治疗。由于HbA1c在糖尿病管理中的重要作用，2010年ADA在其正式更新的指南中将HbA1c作为一种更快速、更简易的诊断试验推荐用于糖尿病的诊断[12]。由于HbA1c检测仪器种类繁多，各实验室的正常参考值亦存在一定差异[13]，为了规范HbA1c的检测，我国 《糖化血红蛋白实验室检测指南》对HbA1c分析系统的性能指标及使用做出了详细规定，实验室在引入这一项新技术或新设备时必须要对分析系统的性能进行验证。

表2 精密度验证结果

表3 线性范围验证结果

准确度验证结果显示相对偏差满足厂家声明要求；绝对偏差满足我国《糖化血红蛋白实验室检测指南》的要求；手工稀释结果与全血结果差异无统计学意义。精密度验证结果三个浓度水平不精度(CV%)分别为 1.61、1.08、0.72，与张传宝等报道的基本一致[14]。携带污染验证携带污染为0.09，误差限度为0.21，符合要求。糖化血红蛋白浓度在4.0%~18.7%内呈线性，与陈雨等报道一致[15]。参考区间验证结果20例健康体检者HbA1c(%)全部在参考区间4%~6%范围内。由于缺少变异血红蛋白标本，本文未对由此引起的干扰进行验证。

综上所述，Hb9210糖化血红蛋白分析仪Premier在准确度、携带污染、精密度、线性范围、参考区间等方面的验证结果达到厂家声明的分析性能指标以及我国《糖化血红蛋白实验室检测指南》的要求，适用于我室临床检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)。

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