人胃癌组织中P D C D 4与D N MT 1表达及初步研究

梁月英，林建华

(东莞市凤岗医院检验科，广东 东莞523690)

目前在我国胃癌的发病率和病死率都是恶性肿瘤中最高的[1]，胃癌发病是由于胃黏膜上皮细胞首先出现癌细胞病变引起的，在以往的研究中已发现的癌组织中[2]，程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的基因含量下调甚至缺失[3]。本文是对人胃癌组织中PDCD4与DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达及临床意义的初步研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年6月至2013年3月这9个月间在我院进行治疗的胃癌患者，入选患者均经病理组织学诊断确诊为胃癌，其中患者男性42例，女性18例，患者年龄在42~77岁之间不等，平均年龄为(67.43±2.2)岁，所有患者自愿参与本实验，入院前签署同意书。

1.2 检测方法 (1)主要试剂：PDCD4兔抗人多克隆抗体(1:100，武汉三鹰公司)；DNMT1兔抗人多克隆抗体(1:100，北京博奥森生物公司)；SP9001三步法免疫组化检测试剂盒，DAB显色试剂盒(北京中杉金桥公司)。(2)检测方法：采用免疫化SP三步法，石蜡切片长规脱蜡，梯度乙醇脱水，过氧化氢阻断内源性过氧化酶，使用0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液，在微波条件下进行热修复，使用12%的血清封闭，滴加特异性抗体孵育，DAB显色，在光学显微镜下进行观察，将PBS作为阴性对照。

1.3 统计学分析 采用SPSS 11.0软件进行数据分析。计数资料以频数表示，比较采用χ2检验；P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化染色结果观察 见图1。

图1 PDCD4和DNMT1在胃癌和癌旁组织中的表达

2.2 PDCD4和DNMI1蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系 PDCD4和DNMTI的表达都与病理分型存在显著相关性(P<0.05)。与年龄、淋巴结转移、TNM分型无显著联系(P>0.05)。见表1。

表1 PDCD4和DNMI1蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

2.3 RT-PCR检查结果观察 胃癌组织中PDCD4mRNA、DNMT1 mRNA 表 达 量 (0.27 ±0.03)、(0.77±0.08)， 癌旁组织中 PDCD4mRNA、DNMT1 mRNA 表达量(0.27±0.03)、(0.46±0.09)，差异有统计学意义(t=22.381,t=18.013,P＜0.05)。

2.4 三组间PDCD4和DNMI1蛋白表达的比较DNMTI和PDCD4在胃癌组织、癌旁组织、正常组织中阳性含量为表现出相反的趋势，胃癌组织与癌旁组织比较数据差异明显，具有统计学意义(P<0.05)。而胃癌组织、癌旁组织与正常组织相比较，数据差异不明显，不具有统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.5 PDCD4和DNMI1在胃癌组织中表达的相关性 经表达相关性分析成负相关关系。见表3。

表2 三组间PDCD4和DNMI1蛋白表达的比较

表3 PDCD4和DNMI1在胃癌组织中表达的相关性

3 讨论

PDCD4不仅能够调节细胞程序性死亡[4，5]，还可以通过抑制蛋白质转录和翻译过程对癌细胞的增长产生抑制作用，与多种肿瘤的发生、发展存在密切联系[6-8]。而DNMT1是人体内普遍存在的基因，在基因表达过程中起着重要作用。已有研究表明DNMT1在结肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肝癌等众多恶性肿瘤中表达均异常增高[9-11]，并会对肿瘤的分化程度、临床分期、预后等产生影响。研究表明PDCD4蛋白能够通过上调P21来减少细胞增殖速度[12]，可以在蛋白翻译水平抑制癌细胞生成，目前科学家在结肠癌、肝癌等多种恶性肿瘤中检测到PDCD4蛋白或mRNA显著缺失或异常[13]。胃癌属于常见的恶性肿瘤，发病率和病死率在我国均居癌症首位，癌症的发生和发展是一个复杂的过程，需要多种细胞因子和酶的参与，这些细胞因子和酶中既有抑制基因活动的[14]，又有促进基因活动的。DNMT1是一种较早发现和掌握的控制细胞程序性凋亡的细胞因子，而PDCD4是近几年才发现的与癌细胞繁殖过程有关的细胞因子，还需要进一步的研究明确其具体的作用机理[15]。

此次的研究研究采取免疫组化与RT-PCR进行检测分析，与癌组织比较，胃癌组织中PDCD4表达均出现不同程度的下降，进一步说明PDCD4表达活性可能与胃癌发生发展具有紧密的联系。而DNMT1在胃癌组织中的表达增加，且阳性表达率明显的高于癌旁组织组织。进一步说明，DNMT1在胃癌的发生发展中起到关键性的作用。经过PDCD4和DNMI1蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系分析，PDCD4和DNMTI的表达都与病理分型存在显著相关性(P<0.05)。与年龄、淋巴结转移、TNM分型无显著联系 (P>0.05)。说明，PDCD4和DNMTI在胃癌发病进展过程中具有一定的作用。本实验中，由表2可知DNMTI在胃癌组织、癌旁组织、正常组织中阳性含量为71.67%、61.67%、36.67%，PDCD4在胃癌组织、癌旁组织、正常组织中阳性含量为30%、50%、70%，表现出相反的趋势，胃癌组织与癌旁组织比较数据差异不明显，不具有统计学意义(P>0.05)。而胃癌组织、癌旁组织与正常组织相比较，数据差异明显，具有统计学意义(P<0.05)。表1中PDCD4和DNMTI的表达都与病理分型存在显著相关性(P<0.05)。表明患者不同的分化阶段，受到DNMTI和PDCD4的调控效果不同，抑制或促进效果都有所不同。表3中经表达相关性分析成负相关关系。

综上所述，PDCD4和DNMTI的表达出现异常与胃癌的发生、发展存在密切联系，两者表达成负相关关系。

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