银杏叶总黄酮的微波提取及纯化工艺分析

王卫华，王春波，王晨静

（青岛大学药学院药理学系；*青岛大学附属医院，山东青岛266021）

银杏叶总黄酮的微波提取及纯化工艺分析

王卫华，王春波，王晨静＊

（青岛大学药学院药理学系；*青岛大学附属医院，山东青岛266021）

目的探讨银杏叶总黄酮的最佳微波提取及纯化工艺。方法利用正交设计系统分析乙醇浓度、提取次数、料液比、提取时间四个因素对银杏叶总黄酮的微波提取及纯化工艺的影响，以及利用紫外分光光度计法测定银杏叶中总黄酮的含量，计算出提取率。结果通过正交设计法对微波提取银杏叶中总黄酮的工艺进行分析，以料液比1∶40、每次提取1 h、乙醇浓度80%以及提取一次是最佳条件。结论此种工艺为最佳，能为进一步研究和应用银杏叶总黄酮提供依据。

银杏叶总黄酮；微波提取及纯化；正交设计试验

银杏叶，是银杏科植物银杏（Ginkgo biloba L）的干燥叶。需在秋季叶子尚绿时采收，并及时干燥。银杏的主要栽种方式一般为人工栽培。栽培地区北至辽宁，南达广东，东起浙江，西达陕西、甘肃、西南到四川、贵州、云南等地[1]。具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂的功效。用于瘀血阻络，胸痹心痛，中风偏瘫，肺虚咳喘，高脂血症。

银杏叶总黄酮是银杏叶的提取物，经临床验证其具有扩血管，增加脑血管的血流量，改善血液循环，还可扩张冠状动脉，抗氧化。也有报道黄酮类的抗癌作用。因此，广泛用于预防及缓解冠心病、脑梗、心绞痛、脑血管硬化等疾病[2]。本试验参考相关文献，利用正交设计，分析银杏叶总黄酮的提取及纯化最佳工艺，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂银杏叶（采自菏泽郊区，干燥、粉碎备用）；芦丁标准品（购自中国药品生物制品检定所）；无水乙醇（分析纯）中国药品生物制品检定所；亚硝酸钠（分析纯）中国药品生物制品检定所；硝酸铝（分析纯）中国药品生物制品检定所；氢氧化钠（分析纯）安徽安特生物化学有限公司。

1.2 仪器与设备M700型微波炉（格兰仕微波炉制造有限公司）DG 120型四两装中药材粉碎机（万通药化机械）GL-21M型高速冷冻离心机（长沙湘麓仪器有限公司）、Explorer专业型分析和精密天平EX6201（湖南弘林仪器）、722型紫外可见分光光度计（上海奥析科学仪器）。

1.3 因素及方案参考了多篇相关文献中关于影响银杏叶中总黄酮的提取率的考察因素[3-4]，本研究确定以乙醇浓度、提取的次数、乙醇用量（料液比）、提取时间为考察因素，设计了正交试验。详见表1。

表1 正交试验考察因素表

1.3.1 提取液黄酮浓度的测定[6]精密量取待测溶液1 mL于25 mL的容量瓶中，先加入5%的NaNO2溶液0.5 mL摇匀，放置6 min；再加入10%的AlCl3溶液0.5 mL，摇匀再放置6 min；后加入4%的NaOH溶液4.0 mL，加60%乙醇定容至刻度，摇匀后，放置15 min。在510 nm处测定吸光度，带入回归方程求黄酮浓度。

按公式计算银杏叶中总黄酮的提取率：提取率=浓度(mg/mL)×稀释倍数×提取液体积(mL)×0.001/原料干重(g)。正交试验水平结果，见表2。

K1、K2、K3表示每个因素分别取3个水平时的结果之和，R是K1、K2、K3算术平均值的标准差，它反映了试验中各因素对结果影响的大小，即它们的大小顺序反映出提取相关因素的改变对提取提取率高低的影响[7]。

各因素对总黄酮的提取率影响顺序为：A＞B＞C＞D.即依次为乙醇浓度＞料液比＞提取次数（D）＞提取时间（C），也即乙醇浓度对提取率的影响最大，而提取时间对提取率影响最小。分析得知，乙醇浓度80%、料液比1∶40、提取一次、提取时间为1 h的组合为最佳银杏叶总黄酮提取组合。

1.3.2 统计学处理所获数据采用SPSS Statistics系统分析。

表2 正交试验设计与水平

2 讨论

本研究以银杏叶中总黄酮提取液在510 nm波长处的测得的吸光度为参考指标，通过提取工艺的正交试验研究，确定以银杏叶为原料微波提取总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇浓度80%、料液比1∶40、提取1次、提取时间为1个小时。

比较传统方法，该提取纯化方法操作简易，对环境污染较小、提取纯化成本低、结果准确可靠。为进一步研究银杏叶中总黄酮的提取工艺提供了科学依据。银杏叶含有非常丰富的黄酮，具有非常大的开发利用价值，应加强对其资源的开发与利用。本方法适用于各大工业生产，但所用仪器和设备需进一步研究。

[1]《食品科学》2014年总目录[J].食品科学,2014，(24):353-376.

[2]李筱玲,邓寒霜.黄酮类化合物提取分离方法研究进展[J].陕西农业科学,2015，(1):77-79;92.

[3]吴如健,陈瑾,胡菡青,等.橄榄黄酮类化合物研究进展[J].福建农业学报，2015(1):106-110.

[4]李嵘,金美芳.微波法提取银杏黄酮甙的新工艺[J].食品科学, 2000，21(2):39-41.

[5]《时珍国医国药》2013年1～12期总目次[J].时珍国医国药,2013 (12):1-18.

[6]顾采琴,谢琳琳,张织芬,等.香蕉皮黄酮的分离纯化及抑菌活性研究[J].食品科学，2013(16):98-102.

[7]《食品研究与开发》2013年总目次第34卷[J].食品研究与开发, 2013，(24):1-20.

[8]王锋,李稳宏,李多伟.超声萃取-溶剂纯化银杏外种皮活性成分新工艺[J].化学工程，2004，(6):70.

Process Analysis of Total Flavonoids from Ginkgo Biloba Leaves in Microwave Extraction and Purification

Wang Weihua,Wang Chunbo,Wang Chenjing
(Qingdao University College of Pharmacy;＊The Affiliated Hospital of Qingdao University)

ObjectiveTo Explore the best microwave extraction and purification technology of flavonoids from ginkgo biloba leaves.MethodsAnalysing the four factors which are ethanol concentration,extraction times,solid-liq⁃uid ratio,extracting time have some effects on the microwave extraction and the purification of total flavonoids from ginkgo biloba leaves by using the orthogonal design system.ResultsBy microwave extraction and purification pro⁃cess of total flavonoids of ginkgo biloba orthogonal analysis comparison,the best condition is extracted by material liq⁃uid than 1:50,every time an hour,80%ethanol concentration and extraction time is the best condition.ConclusionThis process is the best,and provide a basis for further research and application of flavonoids from ginkgo biloba leaves.

Total flavonoids of Ginkgo biloba;Microwave extraction and purification;Orthogonal Design

R92

A

1008-4118（2015）04-0006-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2015.04.003

2015-09-23

王卫华（1981-），女，现工作于菏泽医学专科学校。研究方向：药理学。

王晨静。wangchenjing1117@126.com