剪刀股总黄酮的提取与含量测定*

马金萍，杨 辉

1沙岭子医院药剂科，河北 张家口075000，2河北北方学院药学系

剪刀股总黄酮的提取与含量测定*

马金萍1，杨 辉2△

1沙岭子医院药剂科，河北 张家口075000，2河北北方学院药学系

目的：建立剪刀股总黄酮的提取与含量测定方法。方法：通过正交试验优化剪刀股总黄酮最优提取条件，采用分光光度法对剪刀股总黄酮的含量进行测定。结果：剪刀股总黄酮含量为3.16%，样品平均回收率为97.5%,RSD为3.86%。结论：分光光度法测定剪刀股总黄酮含量，方法简便、准确、重现性好。

剪刀股；正交试验；总黄酮；含量测定

剪刀股(Ixeris debilis A.G ray)是菊科苦荬菜属植物剪刀股全草，别名鸭舌草、鹅公英，具有清热凉血、利尿消肿之功效。用于肺热咳嗽、喉痛、口腔溃疡、急性结膜炎、阑尾炎、水肿、小便不利；外用治乳腺炎、疮疖肿毒、皮肤瘙痒等[1]。相关文献[2]报道剪刀股提取物可对抗烟碱引起的致癌作用。目前，对剪刀股化学成分的研究报道较少。本研究对剪刀股总黄酮的提取及含量测定方法进行探讨，以期为剪刀股药用价值的开发利用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 剪刀股采自河北省张家口市，芦丁标准品由中国药品生物制品检定所提供，其他试剂均为国产分析纯，试验用水为蒸馏水。KQ-2500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；R E 52C S型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；U V759紫外-可见分光光度计（上海精科）；D Z F-688型真空干燥箱（宁波江南仪器厂）；S F-400型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 标准曲线的制备[3]精密称取120℃干燥3小时至恒重的芦丁对照品13.4 m g，置50 m L量瓶中，加70%乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得浓度为0.268 m g/m L的对照品溶液。精密吸取对照品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 m L，分别置25 m L量瓶中，加水至6m L，加5%亚硝酸钠溶液1m L，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 m L，摇匀，放置6分钟，加4%氢氧化钠溶液10m L，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；在波长510 nm处测定吸光度，以芦丁浓度(C)对吸光度(A)绘制标准曲线。

1.2.2 正交试验设计 在预试验的基础上，选取料液比、提取时间、乙醇浓度3个因素，并各设置三个水平，以总黄酮含量为测定指标，采用L9(34)正交试验设计，优化总黄酮提取工艺，见表1。

表1 正交试验影响因素与水平

将剪刀股洗净，待控干水分后，于45℃恒温干燥箱烘干至质量恒定，粉碎为粗粉。准确称取剪刀股粗粉9份，各5 g，按照正交设计方案的条件进行超声波提取，同法再超声提取2次，合并滤液浓缩至干，用70%乙醇转移至50m L容量瓶中，定容，摇匀，过滤，取续滤液2m L，用70%乙醇定容于25m L容量瓶中作为供试品溶液。取供试品溶液2m L分别置25m L量瓶中，照“1.2.1”项下方法操作，在波长510 nm处测定吸光度。

1.2.3 稳定性试验 精密吸取相同供试品溶液5份，每份2 m L，分别于室温放置0、15、30、45、60 min后，依法测定吸光度。

1.2.4 重现性试验 同一批样品5份，每份5 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备溶液，精密吸取2m L，依法测定并计算含量。

1.2.5 精密度试验 精密吸取相同供试品溶液2 m L，加水至6 m L，按“1.2.1”项下方法操作，于510 nm波长处连续5次测定吸光度。

1.2.6 加样回收试验 取重现性试验所用的同批样品（已知含量3.16%）约5 g，共5份，精密称定，加入适量的芦丁对照品，按供试溶液制备方法制备溶液，依法测定吸光度。

1.2.7 含量测定 称取剪刀股粗粉3份，各5 g，依据所选最佳条件，提取总黄酮并进行含量测定。

2 结果

2.1 标准曲线的绘制 以芦丁浓度(C)对吸光度(A)绘制标准曲线。得到回归方程为：A=12.996C+ 0.0018（r=0.999 6）。结果表明，当芦丁质量浓度为0.0000～0.0536 m g/L时，其质量浓度与吸光度呈良好的线性关系。

2.2 正交试验结果 超声提取剪刀股总黄酮的最佳工艺条件为A2B2C3，即料液比为1∶20，乙醇浓度为70%，提取120 min。结果表明，从剪刀股提取总黄酮以液料比影响最大，其次为提取时间，乙醇浓度影响最小，见表2-3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析

2.3 稳定性试验 平均吸光度为0.266，R S D=3.23% (n=5)，表明供试品溶液在1小时内稳定。

2.4 重现性试验 平均含量为3.18%，R S D=2.38% (n=5)，表明方法重现性好。

2.5 精密度试验 平均吸光度为0.263，R S D=0.15% (n=5)，表明仪器精密度良好。

2.6 加样回收试验 平均回收率为97.5%，R S D =3.86%，表明方法具有良好的加样回收率。

2.7 含量测定 含量测定结果见表4。

表4 含量测定

3 讨论

通过正交试验，优选了剪刀股总黄酮的提取工艺，正交试验结果直观分析表明剪刀股总黄酮最佳提取工艺条件为料液比为1∶20，乙醇浓度为70%，提取120分钟。3种因素对黄酮提取率的影响顺序为A＞C＞B，在该最佳提取工艺条件下，总黄酮提取率达到2.9237%。

黄酮类化合物含量测定方法有比色法[4]、分光光度法[5-6]等。本研究选用分光光度法并以A l (N03)-N a N02-N a0H系统为显色剂测定剪刀股中黄酮的含量。通过方法学验证试验，此法操作简单，并具有良好的稳定性、重复性和准确度等优点。可用于中药或天然产物中黄酮含量的测定。

[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999:881.

[2] 蒲明秋,毛飞鹏.蚕豆根尖细胞微核试验-剪刀股对抗烟碱引起遗传物质损伤的诱变效应[J].中国慢性病预防与控制, 1995,3(2):89.

[3] 张军武,赵琦,王昌利.不同生长年限黄芪中黄芪甲黄的含量考察[J].西部中医药,2012,25(3):30-31.

[4] 郭亚健,范莉,王晓强,等.关于NaNO2-AI(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮方法的探讨[J].药物分析杂志,2002,22(2):97-99.

[5] 秦民坚,吉文亮,王峥涛.鸢尾不同产地、采收期总黄酮的含量测定[J].现代中药研究与实践,2004,18(4):23-25.

[6] 方圆,王雪彦,晁若冰.土茯苓药材中落新妇苷和总黄酮的含量测定方法研究[J].药物分析杂志,2010,30(9):1738-1741.

Extraction and ContentDeterm ination of Total Flavonoids in JianDaoGu

MA Jinping1,YANG Hui2△
1 Pharmacy Departmentof ShalingziHospital,Zhangjiakou 075000,China; 2 College of Pharmacy of Hebei North University

Objective:To establish the extractionmethodsand contentdeterm ination of total flavonoids in Jian－DaoGu(Ixeris japonica).Methods:The extraction conditions of total flavonoids in JianDaoGu were optimized by orthogonal design,and the contents of total flavonoids in JianDaoGu were detected by spectrophotometricmethod.Results:The contentsof total flavonoids in JianDaoGu occupied 3.16%,average recovery rate of the sampleswere 97.5%, RSD was3.86%.Conclusion:Determ inationmethod of total flavonoids in JianDaoGu by spectrophotometricmethod is simple,accurateand reproducible.

JianDaoGu;orthogonaldesign;total flavonoids;contentdetermination

R657.3

A

1004-6852(2015)07-0027-03

2014-10-25

河北省高等学校科学技术研究项目（编号 Z 2013006）。

马金萍（1970—），女，主管药师。研究方向：中药临床研究。

△通讯作者：杨辉（1972—），男，副主任药师。研究方向：中药化学研究。