青藏高原不同种红景天中没食子酸含量的定量分析*

刘 青，杜守颖，尼玛次仁，米 久，次仁旺加

1北京中医药大学，北京 100102；2西藏藏医学院

青藏高原不同种红景天中没食子酸含量的定量分析*

刘 青1,2，杜守颖1△，尼玛次仁2，米 久2，次仁旺加2

1北京中医药大学，北京 100102；2西藏藏医学院

目的：对青藏高原不同种红景天中没食子酸进行分析，建立定量分析方法，为其进一步利用提供依据。方法：采用HPLC法测定没食子酸的含量，以30%乙醇提取样品；Shim-pack VP-ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm）；甲醇-0.04%磷酸溶液（10∶90）为流动相；检测波长274 nm。结果：线性范围为1.0μg/mL～200.0μg/mL（R=0.9999）,平均回收率为100.49%，RSD为1.8%。结论：该方法简便，准确，重复性、回收率好，可用于青藏高原不同种红景天中没食子酸含量的测定。

红景天;青藏高原；HPLC；没食子酸

红景天属植物在我国有73种，西藏有32种，2个变种[1]，就其青藏高原红景天而言，享有“高原人参”之美誉。既是珍贵药用植物，亦是药食同源植物，近年研究表明，红景天具有抗缺氧、抗寒冷、抗微波辐射、延缓衰老和抗癌等功效，应用广泛[2]。红景天的多种功效与其含有多种活性成分密切相关，2010版《中华人民共和国药典》中把红景天苷作为红景天的检测指标，随着研究的深入，发现没食子酸在红景天成分中占有较大比例，同时没食子酸具有抗炎、抗突变、抗氧化、抗自由基等多种生物学活性[3]；目前主要应用于抗菌抗病毒、抗肿瘤方面，其他行业也有广泛应用。本研究采用液相色谱法，以其活性成分没食子酸为对照，对青藏高原红景天进行定量分析研究，并对不同产地，不同品种进行比较，为进一步开发利用及其制剂的质量标准研究奠定基础和提供依据。

1 仪器与材料

梅特勒A E200电子天平；岛津LC-20A液相色谱仪，配S P D-20A紫外可见检测器；S h im-p a c k VP-OD S色谱柱（250 mm×4.6 mm）；P h enomene x G emini OD S色谱柱（250 mm×4.6 mm）；W ondaSi l C18（150mm×4.6mm）；KQ-250D B超声清洗器（250W，昆山超声仪器有限公司）。甲醇（色谱纯，F i sh er公司）；乙醇（分析纯，成都全山化学试剂有限公司）；30%乙醇（取乙醇加水自配）；磷酸（上海红卫农药厂）；蒸馏水（自制）。没食子酸（中国食品药品检定研究院，批号：110831-201204）。青藏高原不同种红景天由西藏藏医学院组织采集（共20个样品）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 S h im-p a c k VP-OD S色谱柱（250mm×4.6mm）；流动相：甲醇-0.04%磷酸溶液（10：90）；柱温：25℃；流速：1.0m L/min；检测波长274 nm。

2.2 供试品溶液制备 取本品粉末约2.5 g，精密称定，置50m L量瓶中，加30%乙醇20m L，20℃超声处理（功率250W，频率40 K H z）20分钟，静置室温，加30%乙醇稀释至刻度，摇均，精密量取5m L，置25m L量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇均，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液制备 精密称取没食子酸对照品适量，加30%乙醇制成每1 m L中含0.2 m g的溶液，即得。

2.4 系统适应性试验 取”2.3”项对照品溶液及供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件，各进样20μl，测得H PLC图谱。理论塔板数按没食子酸峰计算不低于4000，见图1。

图1 高效液相色谱图

2.5 线性关系的考察 精密配制系列浓度的没食子酸对照品溶液1.0μg/m L、20.0μg/m L、40.0μg/m L、80.0μg/m L、120.4μg/m L、200.0μg/m L，分别精密进样20μL，测定峰面积，见表1、图2。

表1 没食子酸线性范围测定结果

图2 没食子酸线性范围测定结果

根据上述试验结果，没食子酸浓度与其峰面积之间在1.0～200.0μg/m L范围内，存在良好的线性关系（R=0.9999）。

2.6 精密度试验 精密量取没食子酸对照品溶液10μl（100μg/m L）重复进样5次，其峰面积测量值，计算其R S D为0.2%。

2.7 稳定性试验 任取样品（2号样品）按正文方法制备，分别在0、4、9、13、17、21小时测定，计算其R S D为0.1%，结果表明，样品溶液在21小时内稳定性良好。

2.8 重现性试验 任取样品（4号样品）按正文方法制备，每隔1小时进样1次，共6次，（R S D=0.5%n=6）。

2.9 回收率试验 采用加样回收法，精密称取适量的已测知含量的红景天（没食子酸含量为3.546 m g/g；6号样品）9份，分为低、中、高三个不同浓度，分别精密加入没食子酸对照品溶液（1.0m g/g）7.1m L、9.0m L、10.5m L，计算加样回收率，结果平均回收率为100.49%，R S D=1.8%。

2.10 样品测定 取上述20个样品，按”2.1”色谱条件测定，计算其中没食子酸的含量，见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

根据相关文献[4-5]，流动相比例为甲醇-0.04%磷酸溶液（10∶90）能保证没食子酸峰与杂质峰的分离度、理论板数较好；在274 nm处有较高的吸收。对于红景天中没食子酸的提取溶剂选择，比较了甲醇，70%甲醇，50%甲醇，30%甲醇，乙醇，70%乙醇，50%乙醇，30%乙醇，其中同浓度的红景天药材中，30%乙醇作为溶剂时没食子酸的峰面积最大，故以30%乙醇作溶剂进行提取。本研究采用H PLC法对青藏高原不同种红景天中没食子酸进行了含量测定，方法精密度好，测定结果准确。从测定结果看，青藏高原不同种红景天中没食子酸含量分别为大花红景天0.29～6.6 m g/g，圣地红景天0.10～2.9 m g/g，卵萼红景天1.0～1.6 m g/g，长鞭红景天0.10 m g/g，狭叶红景天0.28 m g/g。从采集的20个样品看，传统、市场都可以作为红景天原药材使用，但就没食子酸含量差异的原因，主要是品种差异，其生长环境不同（如沙地、草地、岩石、溪流河畔等），还有采收时间、加工方法、贮藏条件等。

[1] 宋月英,韩慧文,郝素云,等.红景天研究进展[J].武警医学院学报[J],2004,13（1）:66-68.

[2] 尼玛次仁,刘青,多杰仁青,等.青藏高原红景天研究进展及存在问题[J].中华中医药杂志.2013,28(9):2675-2678.

[3] 李肖玲,崔岚,祝德秋.没食子酸生物学作用的研究进展[J].中国药师,2004,7(10):767-769.

[4] 章娟,段虎成,毕开顺.HPLC法同时测定大花红景天中的4个酚类成分的含量[J].北方药学,2011,8(7):13-14.

[5] 顿珠,刘青,索朗其美,等.HPLC法测定藏药余甘子膏中没食子酸的含量[J].中草药,2010,41(9):1477-1478.

Quantitative AnalysisofGallic Acid in D ifferent Speciesof HongJingTian in Qinghai-Tibet Plateau

LIU Qing1,2,DU Shouying1△,NIMA Ciren2,MIJiu2,CIRENWangjia2
1 Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China; 2 Tibetan College of Tibetan Medicine

Objective:To provide reference for furtherutilization of gallic acid by analyzing gallic acid in differentspecies of HongJingTian(Rhodiola rosea L.)in Qinghai-Tibet plateau and establishing themethod of quantitative analysis.Methods:The contents of gallic acid were determined by HPLC,the samples were extracted w ith 30% ethanol;Shim-pack VP-ODS chromatographic column(250mm×4.6mm);acetonitrile-0.04%phosphoric acid(10∶90)as themobile phase;detection wavelength was 274 nm.Results:Linear rangewas between 1.0μg/m L and 200.0 μg/m L(R=0.9999),average recovery rateswere100.49%,RSD was1.8%.Conclusion:Themethod,which is simple, accurate,reproducible and good recovery rate,could be used for content determ ination of gallic acid in different speciesof HongJingTian in Qinghai-Tibetplateau.

HongJingTian;Qinghai-Tibetplateau;HPLC;gallic acid

R927.2

A

1004-6852(2015)07-0025-03

2014-10-25

973计划前期研究专项（编号 2012CB722905）。

刘青（1976—），男，讲师，在读博士研究生。研究方向：中药（藏药）新型与技术。

△通讯作者：杜守颖（1960—），女，博士学位，教授，博士研究生导师。研究方向：中药新剂型与制剂关键技术的研究。