秦艽醇提物治疗类风湿关节炎的实验研究*

王 佳，王 钢，王丽琴，王 涛，田杰祥

甘肃中医药大学附属医院，甘肃 兰州 730000

秦艽醇提物治疗类风湿关节炎的实验研究*

王 佳，王 钢，王丽琴，王 涛，田杰祥

甘肃中医药大学附属医院，甘肃 兰州 730000

目的：观察大叶秦艽醇提取物对胶原诱导性关节炎大鼠的防治作用，并探讨其作用机制。方法：将SPF级SD大鼠80只随机分为正常组、模型组、白芍组及秦艽组，每组20只。除正常组外，其余各组用胶原乳液多点皮内注射建立关节炎模型；秦艽组以秦艽乙醇提物1.8mL（kg/d）灌胃；白芍组以白芍总苷胶囊内容物混悬液2 mL（kg/d）灌胃；正常组和模型组予等量蒸馏水灌胃。实验第24天、31天观察各组大鼠一般情况及关节X线片变化情况。结果：模型组大鼠踝关节及足趾关节明显肿胀、变形，秦艽组及白芍组与模型组比较关节肿胀程度明显减轻，其差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：秦艽提取物能在早期改善胶原诱导性关节炎大鼠的一般情况，减轻关节肿胀程度，改善滑膜炎症状，保护关节，体现治疗早期RA的优势。

类风湿关节炎；胶原诱导性关节炎；秦艽醇提物

类风湿关节炎 (R h e u matoid A rt h riti s,R A)是一种以慢性、对称性、破坏性关节炎为主要特征的全身性自身免疫性疾病，其病变发生在滑膜，累及关节软骨、韧带、肌腱及全身组织，临床表现为受累关节疼痛、肿胀，继而软骨破坏、关节间隙变窄，功能下降，晚期关节强直、畸形，功能活动障碍，最终致残，病变呈持续、反复发作的慢性过程［1］。我国患病率约为0.32%～0.36%［2］，因缺乏特异性治疗，所以致残率高，对患者的生理、心理、日常生活等带来不良影响，严重影响患者的生活质量，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要病因之一，所以对类风湿关节炎发病机制的研究一直是风湿病学领域的热点。

虽然动物模型只是模拟疾病发病，不可能完全复制人类的疾病，但是它们提供了有关自身免疫性疾病的组织学、分子生物学和遗传学等方面的重要资料，也为新的治疗药物的研究开发起重要作用。胶原诱导性关节炎大鼠模型在临床表现、免疫学和病理学特征方面与人类R A具有相似性［3］，因此被广泛应用于研究R A，为研究R A的病因、发病机制及治疗等提供了较好工具。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 S P F级S D大鼠80只，雌雄各半，体质量（180±20）g，由甘肃中医药大学S P F动物实验中心提供，实验动物合格证号：0000612。大鼠正常饲养1周以适应环境，随机分出20只作为正常组，其余大鼠制作胶原诱导性关节炎（C I A）模型，将造模成功大鼠随机分为模型组、白芍总苷胶囊治疗组（白芍组）、秦艽提取物治疗组（秦艽组），每组20只，各组再随机分为免疫后24 d，31 d 2个亚组。

1.2 模型建立 造模方法[3]：牛Ⅱ型胶原蛋白20m g溶于10m L浓度为0.1mol/L的冰乙酸中，4℃过夜，冰浴下与等体积量弗氏完全佐剂充分乳化（最终Ⅱ型胶原浓度为1m g/m L）。用10%水合氯醛0.3m L/100g腹腔麻醉造模大鼠，麻醉成功后在大鼠背部、尾根部及右后足趾部多点皮内注射该乳化剂0.4m L（6～8点/只），10天后腹腔内注射上述乳剂0.2m L。

1.3 实验药物的制备 秦艽提取工艺[4]，将秦艽粉碎，精密称重，置于1000m L圆底烧瓶中，加入8倍量70%乙醇，加热、回流提取3次(每次1.5 h)；再将所得醇提液用旋转蒸发仪回收乙醇且浓缩为每毫升含生药0.5 g，4℃冰箱保存备用。根据实验大鼠与人体表面积比例系数换算、确定大鼠每日服药剂量为1.8m L。白芍总苷胶囊规格为0.3 g，由宁波丽华制药有限公司提供，取胶囊内容物加蒸馏水2m L配置成混悬液。

1.4 给药方法 造模后第9天开始，正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃；白芍组予白芍总苷胶囊内容物2 m L/（k g·d）灌胃；秦艽组予秦艽醇提物1.8m L/（k g·d）灌胃（依据人与动物体表面积换算的等效剂量）。

1.5 统计学方法 数据采用S P SS 11.5统计软件分析，计量资料以(±s)表示，采用方差分析，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 大鼠一般情况 模型组大鼠皮下注射胶原乳化剂及加强免疫后精神状态、饮食情况、活动能力明显降低，免疫5天后肉眼观察，模型大鼠足趾和踝关节出现肿胀，7天后肿胀明显，并日渐加重，部分大鼠右后足出现足趾变形。造模后9天开始给药，14天后白芍组及秦艽组大鼠上述症状明显缓解。

2.2 大鼠关节AI值测定结果 与正常组比较，免疫后10天开始模型组、白芍组及秦艽组大鼠后足关节肿胀明显，A I值增高，其差异有统计学意义（P＜0.05），说明造模成功。随着免疫时间的延长，模型组大鼠关节肿胀呈明显递增趋势（P＜0.05）。给药后1周、2周、3周白芍组及秦艽组大鼠关节肿胀减轻，A I值减小；与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各组大鼠关节AI值比较（±s）

表1 各组大鼠关节AI值比较（±s）

注：与正常组同期比较，**表示P＜0.01；与模型组同期比较，▲表示P＜0.05；与本组前一时点比较，★表示P＜0.05。

组别正常组模型组白芍组秦艽组31天0 6.375±1.061☆2.000±0.756▲★1.875±0.641△★10天0 2.875±0.834**3.00±0.926**2.875±0.834**17天0 5.375±1.685☆3.500±0.926▲3.625±0.744△24天0 6.250±1.281☆3.000±1.069▲3.125±1.126△

2.3 大鼠踝关节足趾容积检测结果 实验第10天开始模型组、白芍组及秦艽组大鼠踝关节足趾容积明显增大，与正常组及本组前一时间点比较，差异有统计学意义（P＜0.01），说明造模成功。随着免疫时间的延长，模型组大鼠关节足趾容积逐渐增大，与正常组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。第17天、24天、31天白芍组及秦艽组大鼠关节足趾容积逐渐减小，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；随着给药时间的延长，与第24天比较，第31天白芍组与秦艽组大鼠关节足趾容积减小明显，其差异有统计学意义（P＜0.05）；且给药后秦艽组与白芍组比较上述指标差异不明显，无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 大鼠踝关节足趾容积的变化（±s）mL

表2 大鼠踝关节足趾容积的变化（±s）mL

注：与正常组同期比较，**表示P＜0.01；与模型组同期比较，▲表示P＜0.05；与本组前一时点比较，★表示P＜0.05。

组别正常组模型组白芍组秦艽组31天0.904±0.048 1.370±0.126**1.001±0.031▲★0.988±0.026▲★造模前0.815±0.068 0.808±0.053 0.793±0.076 0.811±0.073 10天0.853±0.079 1.051±0.087**1.067±0.068**1.056±0.078**17天0.871±0.064 1.192±0.071**1.072±0.040▲1.074±0.049▲24天0.892±0.045 1.264±0.112**1.049±0.034▲1.051±0.029▲

2.4 大鼠踝关节病理性观察结果 大鼠踝关节切片，H E染色，光镜观察，结果显示：正常组大鼠关节腔内无炎性渗出，滑膜无增厚、水肿，软骨表面光整，细胞排列整齐，关节结构正常；模型组大鼠关节腔内有大量炎性渗出物，滑膜充血水肿，软骨细胞数少且排列紊乱，软骨面有缺损，骨质破坏；白芍组大鼠关节结构正常，无明显骨质破坏，关节腔内有少量炎性渗出物，滑膜轻度增厚，软骨面不平整，偶见细胞破坏，细胞数较模型组增多，软骨细胞排列不规则；秦艽组大鼠关节腔内有少量炎性渗出物，关节结构清晰，无明显骨质侵蚀，关节软骨面不平整，软骨细胞数较模型组增多，细胞排列不规则，见图1-4。

图1 正常组（×10）

图2 模型组（×10）

图3 白芍组（×10）

图4 秦艽组（×10）

2.5 大鼠踝关节X线片观察结果 拍摄各组大鼠右后踝关节X片，观察大鼠踝关节宏观结构。正常组大鼠X线显示关节面清晰，骨质结构完整，关节间隙正常；模型组可见关节软组织肿胀明显、关节面不清晰、骨质破坏、关节结构缺损；白芍组关节周围软组织轻度肿胀，关节面毛糙，无明显骨质破坏和新骨形成，有轻度关节间隙狭窄；秦艽组关节面光滑，关节间隙无明显狭窄，未见明显骨质破坏和关节结构缺损，关节周围软组织轻度肿胀，见图5-8。

图5 正常组

图6 模型组

图7 白芍组

图8 秦艽组

X线片观察可知，秦艽组与白芍组均无明显骨质破坏，关节结构完整，且2组间表现无明显差异，秦艽组和白芍组X线片表现均优于模型组，提示白芍总苷胶囊和秦艽提取物均可防止类风湿关节炎关节骨质破坏，有保护关节的作用。

3 讨论

类风湿关节炎属中医学“痹证”范畴，有“顽痹”“历节风”之称。其基本病理改变为关节滑膜慢性炎症形成侵袭性血管翳，破坏软骨、骨与周围组织呈慢性炎症反映，是R A的显著特征。有学者认为，促炎性Th1细胞及其分泌的I N F-γ和抗炎性Th2细胞及其分泌的I L-4失衡在R A发病机制中起重要作用[5]。研究发现，R A患者Th l及其细胞因子占优势。应用Ⅱ型胶原蛋白混合弗氏佐剂诱导的胶原诱导性关节炎模型是研究人类R A的理想模型[6-7]，该模型除了具有R A的急性病变外，还有一定的慢性病变特征。造模大鼠后肢肿胀于致敏1周后出现，3周病变最为严重，少数可累及前肢，肿胀可持续3～7周，最终导致关节僵硬变形，关节病理特征与人类R A相似[8]。

秦艽为龙胆科植物秦艽Gentianamacrophylla P al l.麻花秦艽G.straminea Maxim.粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie e x B u r k.或小秦艽G.dahurica F i s e h.的干燥根。前三者按性状不同分别习称“秦艽”和“麻花艽”，后一种习称“小秦艽”。多为栽培。主产于甘肃、陕西等地。春、秋二季采挖。秦艽及麻花艽晒软，堆置“发汗”至表面呈红黄色或灰黄色时，摊开晒干，或不经“发汗”直接晒干；小秦艽趁鲜时搓去黑皮，晒干。均以根条粗大，肉厚、色棕黄、气味浓厚者为佳。

秦艽味辛、苦，性平。归胃、肝、胆经。临床主要用于风湿痹证、筋脉拘挛、关节屈伸不利、中风不遂、骨蒸潮热、小儿疳积发热、湿热黄疸等。古人称之为“风药中之润剂，散药中之补剂”，具有祛风湿、止痹痛、退虚热、清湿热等功效[9]。现代研究表明，秦艽主要含有生物碱、环烯醚萜苷、甾醇苷和其他成分，具有抗炎、镇痛、镇静、解热及保肝等作用，能调节中枢神经系统及免疫系统，广泛用于风湿病、心脑血管疾病、肛肠疾病及皮肤病等的治疗。

本研究以胶原诱导性关节炎大鼠（C I A）为模型，证实秦艽醇提物能够在早期改善胶原诱导性关节炎大鼠的一般情况，减轻关节肿胀程度，改善滑膜炎症状，抑制C I A大鼠关节破坏，保护关节，体现治疗早期R A的优势。

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[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社，2010:253－254.

Experim ental Study on T reating Rheum atoid Arthritisby QinJiao A lcohol Extracts

WANG Jia,WANGGang,WANG Liqin,WANG Tao,TIAN Jiexiang
University Hospital of Gansu Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China

rheumatoid arthritis;collagen-induced arthritis;alcoholextractsof QinJiao

R285.5

A

1004-6852(2015)07-0011-04

2014-10-25

甘肃省中医药科学技术研究课题（编号 GZK-2010 -3）。

王佳（1981—），男，硕士学位，主治医师。研究方向：骨病的中西医结合治疗。

A b s t ra c t Objective:To observe preventive and therapeutic effects of DaYe QinJiao(Gentianamacrophylla Pall.)alcoholic extracton rats suffering from collagen-induced arthritis,and explore itsmechanism.Methods:Eighty SPFSD ratswere randomized into thenormalgroup,themodelgroup,BaiShao(White Paeony Root)group and QinJiao group,20 ratseach group.Except the normalgroup,ratsof the othergroupswere prepared bymultiple intradermal injections of collagen emulsion;QinJiao group accepted QinJiao alcoholextracts lavage in the concentration of 1.8m L (kg/d);BaiShao group totalglucosidesof peony suspension in the concentration of 2mL(kg/d);the normalgroup and themodelgroup the same amountsof distilled water lavage.Common conditionsand the changesof jointX-ray of the rats in all the groupswere observed at the 24th daysand 31stdays.Results:The ankle and toe of the rats in themodel group became swollen and deformed;the swollen degreesof jointswere obviously alleviated when QinJiao group and BaiShao group were compared w ith themodel group,the difference had statisticalmeaning（P＜0.05）.Conclusion: QinJiao alcoholic extract could improve common conditions of the ratsw ith collagen-induced arthritis early,relieve swollen degreesof the joints,improve the symptom of synovitisand protect the joint,which reflects the advantagesof early treatmentof RA.