NF-κB、IκBα在胃癌组织中的表达及临床意义

李亚平刘振胜黄冠男姜相君

作者单位：265400 山东招远1招远市人民医院消化内科；266000 山东青岛2青岛大学医学院附属青岛市立医院药学科，3消化内二科

临床经验

NF-κB、IκBα在胃癌组织中的表达及临床意义

李亚平1刘振胜2黄冠男3姜相君3

作者单位：265400 山东招远1招远市人民医院消化内科；266000 山东青岛2青岛大学医学院附属青岛市立医院药学科，3消化内二科

目的 探讨核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、抑制蛋白IκBα在慢性浅表性胃炎组织、慢性萎缩性胃炎组织、胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达水平，分析其在不同胃黏膜组织中的表达差异及其临床意义。方法 收集胃癌组织40例（胃癌组），慢性浅表性胃炎组织20例（慢性浅表性胃炎组）、慢性萎缩性胃炎组织20例（慢性萎缩性胃炎组）及正常胃黏膜组织20例（正常胃黏膜组）。采用免疫组化SABC法对各种胃黏膜组织标本中NF-κB、IκBα的表达进行测定并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果 胃癌组NF-κB、IκBα的表达均显著高于慢性萎缩性胃炎组、慢性浅表性胃炎组与正常胃黏膜组（P均<0.05）。NF-κB、IκBα的表达与胃癌患者性别、年龄、肿瘤病理类型、肿瘤最大直径等的差异均无统计学意义（P均>0.05），与胃癌细胞分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移等的差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 随着胃黏膜损伤程度的加重，NF-κB、IκBα的阳性表达逐渐升高，其高表达可能参与胃癌的发生和转移。

胃肿瘤；慢性萎缩性胃炎；慢性浅表性胃炎；核转录因子-κB；IκBα

胃癌是严重威胁人类健康的消化道肿瘤［1］，我国胃癌发病人数占全球发病总数的42%［2］。我国胃癌死亡率居高不下，其原因与早期诊断率低有关。因此，寻找并建立能够在胃癌早期确诊的方法是提高胃癌早诊率、降低死亡率的关键。

核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是从B细胞中提取的能与免疫球蛋白κ链基因特异性结合并促进κ轻链表达的核蛋白因子，涉及细胞的生长、分化、凋亡的调节、细胞因子的产生等。NF-κB通常与其抑制蛋白IKB形成复合物，以非活性形式存在于细胞质中。IKB在NF-κB调控基因转录方面起重要作用。NF-κB在各种刺激信号的作用下被激活［2］，从而参与调控众多炎症因子基因的表达。Wu等［3］用Hp刺激人胃癌细胞株，发现Hp感染、NF-κB的活化和环氧化酶（COX-2）的表达在胃癌发生、发展过程中起重要作用。Hahm等［4］研究发现Hp感染可以激活NF-κB，从而诱导COX-2和IL-8的表达，这可能是Hp感染导致胃癌发生的机制之一。

本课题通过比较NF-κB、IκBα在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达差异，并分析与胃癌患者临床病理特征的关系，探讨NF-κB信号转导通路在胃癌发生、发展中的作用，为胃癌的早期诊断提供实验佐证。

1 资料与方法

1.1 组织标本

收集2010年2月至2013年11月在我院手术切除并经病理组织学证实的胃癌组织40例（胃癌组），胃镜下活检的慢性浅表性胃炎组织20例（慢性浅表性胃炎组）、慢性萎缩性胃炎组织20例（慢性萎缩性胃炎组）、正常胃黏膜组织标本20例（正常胃黏膜组）。详细记录胃癌患者的性别、年龄、肿瘤病理类型、肿瘤最大直径、TNM分期等资料。

胃癌组织取自癌灶中央非坏死区域，正常胃黏膜组织取自与之配对的距离癌组织5cm以上区域，组织标本置于10%福尔马林溶液，固定24h，用于免疫组化染色。胃癌诊断均经组织病理学确诊，患者术前均未接受放疗和化疗。

1.2 实验方法

免疫组化法检测：将各种胃组织标本经4%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，HE染色，光镜观察，采用免疫组化SABC法。染色步骤和抗体稀释均按产品说明书进行。DAB显色剂，苏木精复染，PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照。结果判定：细胞结构清晰，着色明显高于背景，NF-κB、IκBα免疫组化染色以细胞质和（或）细胞核内呈棕黄色为阳性表达。根据着色深浅程度及阳性染色部位，使用Imagepro-plus图像分析系统测量每个标本积分光密度值，即每个标本阳性表达的光密度值和面积乘积之和进行定量分析［5］。

1.3 统计学处理

使用SPSS17.0统计学软件分析实验数据，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两个样本均数的比较用t检验。计数资料两个样本率的比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各种胃黏膜组织NF-κB、IκBα的免疫组化测定

正常胃黏膜组及慢性浅表性胃炎组胃黏膜组织中NF-κB呈弱阳性表达，主要分布在细胞质中，两者差异比较无统计学意义（P＞0.05）。慢性萎缩性胃炎组（尤其是重度慢性萎缩性胃炎）有较强的NF-κB表达，主要分布在细胞质和（或）细胞核中，显著高于正常胃黏膜组及慢性浅表性胃炎组（P均<0.05）。

胃癌组NF-κB的表达量较正常胃黏膜组、慢性浅表性胃炎组及慢性萎缩性胃炎组明显增多，染色强度增强，与其他3组比较差别均有统计学意义（P均<0.05）。IκBα在正常胃黏膜组及慢性浅表性胃炎组的细胞质中有少量表达，两者差异无统计学意义（P＞0.05）；慢性萎缩性胃炎组IκBα的表达增多，显著高于正常胃黏膜组及慢性浅表性胃炎组（P均＜0.05）；胃癌组有较强的IκBα表达，与正常胃黏膜组、慢性浅表性胃炎组及慢性萎缩性胃炎组比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表1、图1。

表1 NF-κB、IκBα在各种胃黏膜组织中的表达情况（积分光密度值，±s）

表1 NF-κB、IκBα在各种胃黏膜组织中的表达情况（积分光密度值，±s）

与正常胃黏膜组比较，#P＞0.05；分别与正常胃黏膜组、慢性浅表性胃炎组比较，*P均＜0.05；分别与正常胃黏膜组、慢性浅表性胃炎组、慢性萎缩性胃炎组比较，**P均＜0.05。

组别 n NF-κB IκBα正常胃黏膜组 20 0.105±0.034 0.098±0.041慢性浅表性胃炎组 20 0.211±0.071#0.304±0.063#慢性萎缩性胃炎组 20 0.686±0.088*0.651±0.079*胃癌组 40 0.865±0.081**0.844±0.077**

图1 NF-κB、IκBα在各种胃黏膜组织中的表达（SP×200）

2.2 NF-κB、IκBα的表达与胃癌患者临床病理特征的关系

NF-κB、IκBα的表达与胃癌患者性别、年龄、肿瘤病理类型、肿瘤最大直径的差异均无统计学意义（P均>0.05）。而与胃癌的细胞分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期等的差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表2。

表2 NF-κB、IκBα的阳性表达与胃癌患者临床病理特征的关系（n）

3 讨论

NF-κB系统由NF-κB家族及其抑制物IκBα共同组成。NF-κB是一种极其重要的转录激活因子，IκBα是一类NF-κB的抑制蛋白。NF-κB是炎症的中心环节，也是癌变过程的关键调节蛋白，在肿瘤生长过程的信息传递中起重要作用，与肿瘤的发生、发展密切相关。最近研究表明，NF-κB的不恰当活化在肿瘤细胞抗凋亡机制中起重要作用［6］。目前已证明在乳腺癌、甲状腺癌、T淋巴细胞或B淋巴细胞白血病、结肠癌等病毒诱导的肿瘤中，均存在NF-κB活性的高表达［7，8］。近年研究表明，NF-κB在胃癌、结肠癌、肝癌等多种肿瘤中有较高的表达。在NF-κB与胃癌关系的研究中，发现NF-κB活化后可促进多种基因表达从而参与胃癌进展。Wu等［3］的研究发现Hp感染、NF-κB的活化和COX-2的表达在胃癌发生、发展过程中起重要作用。Sasaki等［9］应用免疫组化法检测RelA（p65）在胃癌细胞质和细胞核中的表达，发现其明显高于邻近正常上皮细胞（P＜0.05）。该实验还显示NF-κB的活性与淋巴结转移、浸润深度、腹膜转移、肿瘤大小等临床病理特点具有相关性（P＜0.05）。许多实验显示NF-κB在胃癌细胞和组织中的表达激活，与胃癌的发生、发展、浸润和转移密切相关，并在某种程度上决定患者预后。

本实验研究结果显示，随着胃黏膜病变的加重，NF-κB的表达增加，并且随着胃癌细胞分化程度越低、TNM分期越高，NF-κB、IκBα表达的阳性率越高。提示NF-κB可能通过某些途径参与胃癌的发生和发展，深入研究NF-κB将有助于揭示胃癌发病的机制。将NF-κB作为胃癌治疗的新靶点，有针对性地选择其活化途径的不同水平进行选择性调控NF-κB的活性，有望从基因水平对防治胃癌和抗癌药物设计一个较好的靶点，为临床治疗胃癌提供一条新的途径。

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［2014-09-15收稿］［2014-12-25修回］［编辑 阮萃才］

R735.2

A

1674-5671（2015）01-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.01.10

青岛市公共领域科技支撑计划基金资助项目［2012-1-3-1-（10）-nsh］

姜相君。E-mail：drjxj@163.com