鸭致病性大肠杆菌耐药性调查与分析

杜　娟，牛艳波，王　丽

（长治市畜牧兽医局，山西　长治　046000）

鸭致病性大肠杆菌耐药性调查与分析

杜娟，牛艳波，王丽

（长治市畜牧兽医局，山西长治046000）

摘要：试验选用22种抗生素对20株致病性鸭源大肠杆菌进行耐药性检测，结果表明，20株试验菌对测试抗生素均存在不同程度的耐药性，其中对5种以及5种以上的抗生素有抗药性的菌株占90%，试验菌对青霉素耐药率最高（90%），其次为恩诺沙星（85%），而对黏杆菌素和呋喃妥因的耐药性最低。

关键词：鸭；大肠杆菌；耐药性；调查；分析

鸭致病性大肠埃希氏菌（E. coli）是引起鸭大肠杆菌病的病原体，主要导致病鸭大肠杆菌性败血症、肉芽肿、心包炎、肝周炎、气囊炎、肠炎、脐炎、全眼球炎和卵黄性腹膜炎等症状，并对雏鸭和胚胎鸭有较高的致死性[1]。鸭致病性大肠杆菌感染还可以作为禽流感、新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病的继发病出现，加剧疾病发展，对鸭体生命健康和养鸭产业构成巨大威胁[2]。伴随着抗生素在家禽养殖中的过度使用和滥用，鸭大肠杆菌对药物的耐药性增加，病鸭死亡率提高。本试验从山西省不同地区患大肠杆菌病的病鸭中分离出20株致病性大肠杆菌，并挑选22种抗生素对这些大肠杆菌的耐药性进行检测，以期为大肠杆菌耐药性的消除探索新的方法。

1　材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验菌株

20株鸭致病性大肠杆菌从山西省不同地区鸭场送检的病鸭中分离。大肠杆菌质控菌株ATCC25922购自北京天坛药物技术开发公司。质粒转化使用的受体菌株DH5α购自Promega公司。

1.1.2药敏纸片

头孢拉啶（RA）、庆大霉素（GM）、利福平（FF）、卡那霉素（K）、环丙沙星（CIP）、阿莫西林（AMX）、头孢噻肟（CTX）、氧氟沙星（OFL）、黏杆菌素（PMB）、诺氟沙星（NOR）、强力霉素（DO）、泰乐菌素（TL）、氟苯尼考（FF）、恩诺沙星（ENR）、氨苄西林（AMX）、硫红霉素（SU）、头孢曲松钠（CED）、呋喃妥因（CFX）、四环素（FT）、青霉素（PG）、链霉素（S）、阿米卡星（AMK）等购自杭州天和药物技术开发公司。

1.2试验方法

1.2.1菌株分离

鸭大肠杆菌的分离、纯化和鉴定参照常规方法进行[3-4]。将收集到的鸭大肠杆菌菌株接种在普通营养肉汤培养基中，37℃培养24 h，抹片，挑取边缘整齐、表面光滑、灰白色半透明的单个菌落划线接种于麦康凯琼脂平板培养基上，37℃培养24 h。

1.2.2药敏实验

选取麦康凯琼脂上长出的红色菌落进行药敏试验，药敏试验参照临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的Kirby-Bauer法进行[5]。每次测定均以标准质控菌株ATCC25922作参照。结果判定按CLSI 2008年标准进行，级别分为耐药（R）、中度敏感（M）和敏感（S）3种。

2　试验结果

20株大肠杆菌除了对黏杆菌素和呋喃妥因完全敏感外，对其他20种抗生素均有不同程度的耐药性，其中最少对3种抗生素有耐药性，最多对19种抗生素有耐药性，5耐及5耐以上的菌株占分离菌株的90%，20株鸭源大肠杆菌耐药谱见附表。大肠杆菌耐药抗生素按严重程度依次为PG、ENR、RA、NOR、E、AMX、DO、TL、TE、CIP、SU、OFL、S、CED、FF、CFX、GM、K、CTX、AMK。其中PG、ENR、RA、NOR、E、AMX、DO、TL、TE、CIP、SU、OFL、S等13种抗生素的耐药率≥50%，20株鸭源大肠杆菌耐药率分析见附图。

附表　20株鸭源大肠杆菌耐药谱

附图　20株鸭源大肠杆菌耐药率分析

3　讨论

大肠杆菌的耐药性受多种因素影响，各地报道的鸭源大肠杆菌耐药种类均有所不同，且不同时期分离菌株的耐药性也有较大差异。我国各地区关于耐药性的调查有很多，有各地的报道也有综合性的比较。其中，以山东省、广东省、河南省、重庆市等地的报道较多。郝智慧等报道了山东省9个地区、河北省青县和辽宁省本溪市的肉鸭大肠杆菌耐药情况，其中山东省肉鸭大肠杆菌耐药最多，辽宁省最少，对5种药产生耐药性的达到90%，对9种药产生耐药性的达到80%。李芳等对2009—2010年我国部分地区的耐药性又进行了分析，在大部分地区对头类药物的耐受率已接近或超过50%，对磺胺类药物的耐受率已达70%，个别地区对阿米卡星的耐受率也超过了60%，对土霉素、四环素药物的耐药率已接近100%，值得注意的是对氨曲南也出现耐药株。杨希国等报道，2008—2010年辽宁省鸭源大肠杆菌耐药性不断增加，2009和2010年分离的大肠杆菌对多黏菌素E耐药率较低，对其余9种药物的耐药率均很高，尤其对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、四环素、磺胺异恶唑、复方新诺明和恩诺沙星的耐药率均> 80%，2008年分离的大肠杆菌主要集中在1～5重耐药，2009、2010年分离株主要集中表现在6～9重耐药。朱恒乾等对广东省10多个地市家禽类养殖场分离出的378株大肠杆菌进行耐药性研究，结果表明，耐药性逐年上升，耐药率逐年下降，耐药谱已集中在5～12耐。徐小艳等对1975—2002年江苏省鸡致病性大肠杆菌的耐药性变化情况进行分析，结果表明，20世纪90年代前期、中期、后期致病性大肠杆菌对抗生素药物的平均耐药率分别为28.11%、42.15%、54.05%，大肠杆菌对抗生素药物的敏感和中度敏感菌株比例下降，而耐药菌株比例却逐年增加[9]。陈鸿树等对重庆6株鸭大肠杆菌耐药调查表明氧氟沙星、诺氟沙星耐药率均为50%[10]。张秀英等从山东分离81株鸡源大肠杆菌的耐药情况为萘啶酸、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺氟沙星、诺氟沙星的耐药率分别为95.1%、61.7%、65.4%、80.2%、55.6%[11]。研究表明，近年来禽源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物也产生较严重的耐药性，耐药率逐年上升。

本试验调查了山西省鸭源大肠杆菌对各类抗生素的耐药情况，发现大肠杆菌对青霉素类、大环内酯类、四环素类、喹诺酮类抗生素耐药性均>50%。其中，对青霉素类抗生素耐药率最高；对氨基糖苷类抗生素、硝基呋喃类抗生素和头孢菌素类抗生素的耐药率较低，而对硝基呋喃类抗生素全部敏感，这一结论与我国其他学者研究结果一致。

不同地区大肠杆菌的耐药性不同，主要是与地区性用药习惯导致抗药性有关，与当地的优势发病菌株也有关。在同一个地区，不同种鸭群对药物的抗药性不同，同一种鸭不同养殖场的抗药性也不同，这些问题与养殖场的用药习惯关系甚大。

[参考文献]

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[2] Dwars R M, Matthijs M G R, Daemen A J J M, et al. Progression of lesions in the respiratory tract of broilers after single infection with Escherichia coli compared to superinfection with E. coli after infection with infectious bronchitis virus[J]. Veterinary Immunolo⁃gy and Immunopathology, 2009, 127（1）: 65-76.

[3]曹澍泽.兽医微生物学及免疫学技术[M].北京:北京农业大学出版社, 1992.

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[5]郝智慧,肖希龙,邱梅,等.不同区域鸡大肠杆菌对抗菌药的耐药性比较[J].中国兽医科学, 2009, 39（1）: 84-88.

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[8]朱恒乾,陈朝喜,廖晓萍,等.广东地区2007—2009年禽源大肠杆菌的耐药性演变[J].中国兽医杂志, 2011, 47（9）: 5-7.

[9]徐小艳,王国相,印继华,等. 1975—2002年大肠杆菌耐药性变化情况调查[J].畜牧与兽医, 2003, 35（3）: 29-32.

[10]陈鸿树,杨忠祥,孔礼明,等.鸭的大肠杆菌和沙门氏菌感染及药敏性测定[J].四川畜牧兽医学院学报, 2001, 15（4）: 29-33.

[11]张秀英,卢秀梅.大肠杆菌对兽医临床抗菌药物耐药情况分析[J].河北畜牧兽医, 2003, 19（5）: 15-17.

Investigation and Analysis on Drug Resistance of Duck Pathogenic Escherichia coli

DU Juan, NIU Yanbo, WANG Li
（Animal Husbandry and Veterinary of Changzhi City, Changzhi 046000, Shanxi China）

Abstract:Twenty-two kinds of antibiotics were used for resistance test of twenty strains of Duck Pathogenic Escherichia coli. The results showed that twenty strains of bacteria had generated different levels of resistance to test antibiotics, 90% of bacterium had generated resistance to five and over five kinds of antibiotics, highest degree to peni⁃cillin(90%), and higher degree to enrofloxacin(85%), but lowest degree to colimycin andfuradantin.

Key words:duck; Escherichia coli; drug resistance; survey; analysis

作者简介：杜娟（1985-），女，山西长治市人，兽医师，主要从事畜产品质量安全监管和重大动物疫病防控专业工作。

收稿日期：2015-04-05

中图分类号：S852.61；S834

文献标志码：A

文章编号：1001-0084（2015）06-0041-03