断奶幼兔日粮中添加Tu—569菌剂对其生长性能及肠道微生物区系的影响

姜军坡　高同国　王世英

摘要：将90只30日龄断奶健康幼兔随机分成对照组和试验组，试验组日粮中添加Tu-569菌剂，对照组不添加，分别饲喂10、20和30 d后，计算相应的日均增重、料重比、饲料转化率、腹泻率等指标。解剖幼兔后收集小肠、大肠内容物，通过选择性培养基测定其芽孢杆菌、大肠杆菌、乳酸菌、酵母菌的数量。结果表明，试验组幼兔的日均增重比对照组增加9.4%～22.6%，料重比低5.7%～18.9%，饲料转化率高6.9%～23.7%，胴体重高13.4%～26.1%，幼兔腹泻率降低了33.43%，小肠内的芽孢杆菌数量增加了15.9倍；而幼兔小肠内的大肠杆菌数量、乳酸菌数量、酵母菌数量差异不大。与对照组相比，试验组幼兔大肠内的芽孢杆菌数量增加了26.8倍；试验组幼兔大肠内的大肠杆菌数量减少了53.0%；试验组幼兔大肠内的乳酸菌数量增加了9.2倍；试验组幼兔大肠内的酵母菌数量增加了2.2倍。故饲喂Tu-569菌剂可使幼兔的日均增重、饲料转化率、胴体重增加，料重比下降；还可增加幼兔大肠内芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌等有益菌的数量，降低幼兔大肠内大肠杆菌数量，防止幼兔腹泻。

关键词：兔；生长性能；芽孢杆菌；大肠杆菌；乳酸菌；酵母菌

中图分类号：S829.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）19-4779-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.19.031

Abstract： 90 healthy weaned rabbits， 30 days old， were randomly divided into the control group and the test group. Agent Tu-569 was only added into the diet of rabbits in the test group. Indexes， such as daily weight gain， feed-gain ratio， feed conversion rate and diarrhea rate， were calculated when rabbits were fed for 10 days， 20 days and 30days， respectively. Intestine contents were collected after dissecting. Amount of Bacillus， Escherichia coli， lactic bacteria and yeast were determined with selective medium. Results showed that the daily weight gain of rabbits in the test group was increased by 9.4% ～22.6%， compared with that of the control group. Feed-gain ratio was decreased by 5.7% ～ 18.9%. Feed conversion rate increased by 6.9%～23.7%. Carcass weight was increased by 13.4%～26.1%. Meanwhile， diarrhea rate in the test group was decreased by 33.43%. Amount of Bacillus in the small intestine of rabbits in the test group was increased by 15.9 times， compared with that of the control group. But amounts of Escherichia coli， lactic bacteria and yeast in the small intestine had no significant difference between the two groups. Amount of Bacillus in the large intestine of rabbits in the test group was increased by 26.8 times， compared with that of the control group. Amount of Escherichia coli in the large intestine was decreased by 53.0%. Amount of lactic bacteria in the large intestine was increased by 9.2 times. Amount of yeast in the large intestine was increased by 2.2 times. Conclusion could be draw that agent Tu-569 had functions of increasing daily weight gain， feed conversion rate and carcass weight， decreasing feed-gain ratio， increasing amounts of beneficial bacteria， such as Bacillus， lactic bacteria and yeast， decreasing the amount of Escherichia coli and preventing young rabbit diarrhea.

Key words：rabbits；growth performance；Bacillus；Escherichia coli；Lactic bacteria； yeast

据统计，腹泻引起的兔死亡约占家兔死亡总数的70%～80%[1]。造成幼兔腹泻的原因包括寄生虫、病毒性、细菌性等传染性因素和自身消化机能、应激、饲料等非传染性因素，其中细菌性因素包括大肠杆菌、魏氏梭菌等病原菌[2]。研究证明，微生态制剂可较好地预防幼兔腹泻的发生和降低死亡率，并可减少耗料量，降低料重比[3]。本研究组从健康獭兔肠道中筛选到的Bacillus velezensis Tu-569菌株，可在胞外产生抑制大肠杆菌、沙门氏菌和痢疾杆菌等致腹泻病原菌的抑菌蛋白，并可在胞外产生消化酶，对幼兔安全，具有作为饲料添加剂饲喂幼兔的潜力，可制备成菌剂用于防治幼兔腹泻及提高幼兔生产性能[4]。Tu-569菌剂系由Tu-569菌株制备而成。本试验拟研究Tu-569菌剂对幼兔生长性能及肠道内微生物区系的影响，为Tu-569菌剂的进一步推广应用奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 Tu-569菌剂 Tu-569菌剂（菌浓为1×1010 CFU/g）由河北众邦生物技术有限公司生产，系Bacillus velezensis Tu-569菌株经发酵制备。Tu-569菌株由河北农业大学生命科学学院制药工程系分离并保存。

1.1.2 试验动物 30日龄断奶健康幼兔90只，购自河北省保定市曲阳县吴少伟獭兔养殖厂。

1.1.3 主要培养基 NA培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠15 g，琼脂15 g，水1 000 mL，pH 7.2～7.4。

EMB培养基：蛋白胨10 g，乳糖10 g，K2HPO4 2 g，琼脂25 g，2%曙红水溶液20 mL，0.5%美蓝水溶液13 mL，水1 000 mL，pH 7.4。

MRS培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏10 g，酵母膏10 g，KH2PO4 2 g，K2HPO4 2 g，葡萄糖20 g，吐温80 1 mL，CH3COONa·3H2O 5 g，MgSO4·7H2O 0.58 g，MnSO4·H2O 0.25 g，琼脂18 g，水1 000 mL，pH 6.2～6.6。

YPD培养基：蛋白胨10 g，酵母浸出粉5 g，葡萄糖20 g，琼脂14 g，水1 000 mL，pH 7.0。

1.2 试验方法

1.2.1 饲喂方案 将90只30日龄断奶健康幼兔随机分为对照组、试验组，每组45只。试验组幼兔日粮中添加0.1%的Tu-569菌剂，对照组幼兔日粮中不添加Tu-569菌剂。每天6：00和18：00人工饲喂日粮，按每只幼兔每天定量添加75 g日粮进行喂养，自由饮水，正常管理。

1.2.2 幼兔生长性能及腹泻率、死亡率的测定 每天观察兔舍的臭味，记录群兔状态、采食量、腹泻、粪便及死亡情况。

1.2.3 取样及菌群变化的测定 饲喂10 d后，对照组和试验组分别随机选取3只幼兔停食24 h后称重，处死，解剖，测定酮体重。饲喂20 d后，对照组和试验组分别随机选取3只幼兔停食24 h后称重，处死，解剖，测定酮体重。饲喂20 d后，对照组和试验组分别随机选取3只幼兔停食24 h后称重，处死，解剖，测定酮体重。

幼兔解剖时，将肠道按小肠、大肠分段，分别收集其内容物。各取大约1 g肠道内容物于灭菌锥形瓶中，放入已灭菌的研钵中快速研细。将研细的肠道内容物转移至装有10 mL无菌水的试管中，并用涡旋振荡仪混匀。大肠内容物依次进行10-1～10-9倍梯度稀释，小肠进行10-1～10-6倍梯度稀释。

（1）芽孢杆菌数量的测定。测定芽孢杆菌时，先将肠道内容物80 ℃水浴处理30 min。采用平板稀释涂布法，以NA培养基平板测定芽孢杆菌的数量。37 ℃培养12 h，观察并记数。

（2）大肠杆菌数量的测定。采用平板稀释涂布法，以EMB培养基平板测定大肠杆菌的数量。37 ℃培养12 h，观察并记数。

（3）乳酸菌数量的测定。采用平板稀释涂布法，以MRS培养基平板测定乳酸菌。37 ℃培养12 h，观察并记数。

（4）酵母菌数量的测定。采用平板稀释涂布法，以YPD培养基平板测定酵母菌的数量。37 ℃培养12 h，观察并记数。

2 结果与分析

2.1 饲喂Tu-569菌剂对幼兔生长性能的影响

由表1可知，饲喂期间，试验组和对照组的日均采食量保持同一水平。与对照组相比，饲喂至10 d时，试验组的日均增重高9.4%；20 d时，试验组的日均增重高22.6%；30 d时，试验组的日均增重高12.9%。与对照组相比，饲喂至10 d时，试验组的料重比下降5.7%；饲喂至20 d时，试验组的料重比下降18.9%；饲喂至30 d时，试验组的料重比下降12.4%。与对照组相比，饲喂至10 d时，试验组的饲料转化率增加6.9%；饲喂至20 d时，试验组的饲料转化率增加23.7%；饲喂至30 d时，试验组的饲料转化率增加13.1%。与对照组相比，饲喂至10 d时，试验组的胴体重增加26.1%；饲喂至20 d时，试验组的胴体重增加16.0%；饲喂至20 d时，试验组的胴体重增加13.4%。

2.2 饲喂Tu-569菌剂对幼兔腹泻的影响

由表2可知，试验组的腹泻率为4.44%，与对照组相比，下降了33.43%。试验组有2只幼兔仅表现出轻微腹泻症状；对照组幼兔有2只腹泻表现出轻微腹泻症状，1只表现出严重腹泻症状，4 d后轻微腹泻幼兔恢复正常，严重腹泻幼兔死亡。

2.3 饲喂Tu-569菌剂对幼兔肠道菌群的影响

2.3.1 饲喂Tu-569菌剂对幼兔小肠内菌群的影响 由表3可知，试验组幼兔小肠内的芽孢杆菌数量增加明显，为对照组幼兔小肠内的芽孢杆菌数量的16.9倍。与对照组幼兔相比，试验组幼兔小肠内的大肠杆菌数量、乳酸菌数量、酵母菌数量相差不大。故饲喂Tu-569菌剂可明显增加幼兔小肠内的芽孢杆菌数量。

2.3.2 饲喂Tu-569菌剂对幼兔大肠内菌群的影响 由表4可知，与对照组幼兔相比，试验组幼兔大肠内的芽孢杆菌数量明显增加，为对照组幼兔大肠内芽孢杆菌数量的27.8倍。试验组幼兔大肠内的大肠杆菌数量减少，为对照组幼兔大肠内的大肠杆菌数量的47.0%。试验组幼兔大肠内的乳酸菌数量增加，为对照组幼兔大肠内的乳酸菌数量的10.2倍。试验组幼兔大肠内的酵母菌数量增加，为对照组幼兔大肠内的乳酸菌数量的3.2倍。故饲喂Tu-569菌剂可显著增加幼兔大肠内芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌的数量，可降低幼兔大肠内大肠杆菌数量。

3 小结与讨论

吴建忠等[5]向兔日粮中添加乳酸芽孢杆菌制剂，发现与对照组相比，试验组的平均日增重可提高7.98%～15.16%，料肉比降低2.83%～3.40%，。潘康成等[6]向兔基础日粮中添加0.1%蜡样芽孢杆菌PAS38制剂，发现可使试验组的料重比比对照组下降13.8%。胡艳等[7]向兔饲料中添加枯草芽孢杆菌，使试验组兔子平均日增重比对照组提高了33.35%，料肉比降低了13.96%，成活率提高了10%。孙宝丽等[8]对仔兔灌服利生菌王（芽孢杆菌为其主要成分之一），发现灌服后仔兔的生长速度可提高2.3%～13.0%，断奶后料肉比可下降11.5%～14.0%。任永军等[9，10]向35日龄断奶肉兔日粮中添加由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌组成的复合芽孢杆菌制剂，发现在饲粮中添加复合芽孢杆菌制剂可以促进肉兔肠道发育，刺激盲肠有益菌的增殖并抑制有害菌的增殖；还发现该复合芽孢杆菌制剂可有效提高新西兰兔生产性能、屠宰性能和免疫器官指数，并可改善兔肉肉品质。本研究证明，Tu-569菌剂可使试验组幼兔的日均增重增加9.4%～22.6%；试验组幼兔的料重比下降5.7%～18.9%；试验组幼兔的饲料转化率增加6.9%～23.7%；试验组幼兔的胴体重增加13.4%～26.1%；同时，试验组幼兔腹泻率降低了50.0%；与对照组幼兔相比，可使试验组幼兔大肠内的芽孢杆菌数量增加26.8倍；试验组幼兔大肠内的大肠杆菌数量减少53.0%；试验组幼兔大肠内的乳酸菌数量增加9.2倍；试验组幼兔大肠内的酵母菌数量增加2.2倍。日粮中添加Tu-569菌剂导致有益菌数量增加及有害菌数量减少与Tu-569菌株产生抑制腹泻病原菌生长的物质相关[4]。日粮中添加Tu-569菌剂导致幼兔的日均增重、饲料转化率、胴体重增加的原因可能与Tu-569菌株特性有关，该菌株富产胞外消化酶[4]，但这一相关性尚需测定日粮添加Tu-569菌剂后小肠、大肠的消化酶活力变化来加以证实。

饲喂Tu-569菌剂可使幼兔的日均增重、饲料转化率、胴体重显著增加，料重比显著下降，还可显著增加幼兔大肠内芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌等有益菌的数量，显著降低幼兔大肠内大肠杆菌数量，防止幼兔腹泻。

参考文献：

[1] 李炳胜，赵凤传.家兔腹泻病的综合防治[J].中国养兔，2013（7）：42，38.

[2] 张林海，张代宝，马文涛，等.浅析仔兔腹泻病因及防治措施[J].当代畜牧，2014（14）：63-64.

[3] 王仲兵.微生态制剂对幼兔腹泻治疗的研究[J].中国预防兽医学报，2007，29（6）：475-479.

[4] 尚 伟.抗兔腹泻芽孢杆菌Tu-569菌株的筛选、发酵及应用[D].河北保定：河北农业大学，2012.

[5] 吴建忠，刘清神，冯定远.乳酸芽孢杆菌制剂对齐卡肉兔的促生长作用研究[J].饲料工业，2008，29（15）：48-49.

[6] 潘康成，冯 轼，崔恒敏，等.微生物制剂对幼兔生长及HPA轴5-HT能细胞的影响[J].动物营养学报，2009，21（6）：945-952.

[7] 胡 艳，苏 州，郭礼荣.枯草芽孢杆菌对普通级实验兔生产性能的初探[J].科技广场，2012（12）：230-231.

[8] 孙宝丽，何英俊，傅冲云，等.益生菌添加剂对天露山黑兔仔兔生产性能的影响[J].中国草食动物科学，2013，33（2）：75-77.

[9] 任永军，雷 珉，邝良德，等.复合芽孢杆菌制剂对肉兔肠道发育和免疫功能的影响[J].动物营养学报，2014，26（1）：144-152.

[10] 任永军，雷 珉，邝良德.复合芽孢杆菌制剂对肉兔生产性能、免疫器官指数及肉质的影响[J].中国畜牧杂志，2014，50（3）：73-77.